43动物细胞融合和单克隆抗体

2.2动物细胞工程选修3现代生物科技专题专题2细胞工程2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体问题探讨“番茄—马铃薯”（理想图）动物细胞也能融合吗？动物细胞融合过程示意图不同DNA的两个细胞灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞思考题1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；PEG等化学方法4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能还可以利用灭活的病毒进行诱导5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能7.你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？思考题利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8.在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？生产单克隆抗体6.你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞称为杂交细胞。提问？1.抗体是由何种细胞产生的？效应B细胞（浆细胞）。2.一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3.简述获得抗体的传统途径？抗原动物体抗体抗体不纯，产量低二、单克隆抗体刺激浆细胞4.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群5、B淋巴细胞在体外不可能无限增殖，如何解决这一问题？1.设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能够无限增殖杂种细胞二、单克隆抗体2.制备过程：免疫小鼠培养骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞B淋巴细胞注射特定抗原蛋白选择培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体克隆杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体制备过程示意图多种杂交细胞这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞只有B瘤杂种细胞才能成活单克隆抗体的应用：①在基础理论研究中具有重要意义②在疾病诊断、治疗和预防方面，具有③生物导弹特异性强、灵敏度高等优越性。教学反馈1.动物细胞融合技术最重要的用途是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞B2.单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）A.B淋巴细胞B.T淋巴细胞C.骨髓瘤细胞D.杂交瘤细胞D3.（多选）1975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是（）A.效应B细胞B．T淋巴细胞C.骨髓瘤细胞D．杂交瘤细胞ABCDB体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。(1).该实验方案的目的是：________________(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？(3).A是从小鼠的脾脏中取得__________该细胞能够产生______。(4).图中B为________________过程，常用_________________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。(5).C过程指细胞培养，该过程包括________培养和__________培养两个阶段B淋巴细胞抗体细胞融合灭活的病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代课后习题1.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A.②④B.①③⑤C.①②③④D.②③C2.动物细胞融合和植物原生质融合决定于()A.细胞膜的流动性B．细胞膜的选择透过性C.细胞质的流动性D．细胞质酶的活性A一.选择题3.“生物导弹”是指（）A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞D.在单克隆抗体上连接抗癌药物D4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）A．PEGB．灭活的病毒C．电刺激D．离心A二.简答题1.淋巴细胞是由动物体---------------------中的---------------------细胞分化发育而来的。2.杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是---------------------骨髓造血干主动运输3.如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。