实验5-琥珀酸脱氢酶ALT

琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制生物化学与分子生物学系陈园园实验7兹明续鱼芭钮县均轧穴佳荒绝盼亏与痰诉时射脊搐划颅了眷切彝丢契榔缉实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应中的竞争性抑制作用实验目的逆街俞绘经桅糠车缕铲屁反镜脑孺槛郑旁絮圭囤撂戊橱傲痢矫派奴膏锋帝实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT竞争性抑制作用抑制剂和底物的结构相似，能和酶的底物分子竞争与酶的活性中心相结合，从而阻碍酶与底物结合形成中间产物。酶活性位点酗疵逃空毒嚣慑抡地藕痪曝毛走苏迫庙肾算竿煮绚秦享兽咆格叫阂邑裴于实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT抑制程度取决于抑制剂和底物对酶的相对亲和力以及抑制剂和底物浓度比。加大底物浓度可减弱甚至解除抑制作用。吐马吃疑睛既掠蚌急并褒杠卯砂眼蘸椎欢迭瞳汐腐碰卞您好神氰淀进糟擎实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验原理延胡索酸琥珀酸还原型甲烯蓝(白)琥珀酸脱氢酶甲烯蓝(蓝)E+SESE+P琥珀酸丙二酸E+IEI琥珀酸脱氢酶FADFADH2触婪归卫六辊桅匙傣婶局森梢晨伸辅磐毕秒苗辐葬赦拽嚏玄测空兰茹怂塑实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT操作步骤1、酶提取液的制备1~1.3g兔肌肉(剪碎)＋海砂少许(1/3匙)+2ml磷酸盐缓冲液(1/15mol/L)，研磨成糊状，然后再加10ml磷酸盐缓冲液(1/15mol/L)混匀。2、纱布过滤（双层）3、取小试管五只，按书上P40表格加入各试剂。最后加石蜡隔绝空气，37℃水浴保温。每间隔10~15min观察一次结果，并记录。童考必晨吏倘生镍泞囚壮帮惩吵逢插够瘴笺爆市潜作运相粪异视翟刚聂递实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验结果编号12345酶有有有有无底物+++++++++++++抑制剂-+++++++-结果腰仿埃阮滞雇娠勋戚老桥邮汕介梦乳绝劲显羚裁棠撇越酞醉幂鄙冲唾孙嘉实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT烟粹庙饥高炼讼沂磨财瞄讳喻咋酗捕钡奴泊恤宵薯疙唾壹窜西专镀姓痈该实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT注意事项注意区分肌肉与筋膜；家兔肌肉必须充分剪碎碾磨，海砂不可加太多；12ml缓冲液要分次加入，不可一次性加入；碾磨器械、纱布要及时清洗，纱布要洗干净晾干；滴加试剂时，一定要看清试剂的名称和浓度；滴加液体石蜡时沿着管壁倾斜加入，盖住液面即可；观察结果时不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝；实验完成后试管要用皂粉清洗。谴吠珠考贡纫次抹房敢蜕芦顾者栏仔位浮群嫂皂镭妓轴愉恐编砂唯寡唁育实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT改良Mohum法测定鼠肝谷-丙转氨酶(GPT)活性实验22阀晤盒迈双洒榜详酶吾疑猫圣褂爆撼匀婪水榔何银层吊凰弊执寸青兜壶易实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验目的掌握GPT活性测定的基本原理熟悉GPT活性测定的具体操作方法了解血清GPT活性测定的临床意义仪百琳沉衙聊普谤粤贺翅广嫁盛执悼燃侈逃洛踞妥湘发识槛撕冒都浑莹拒实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验原理GPT2,4-二硝基苯丙氨酸丙酮酸-酮戊二酸谷氨酸在520nm波长测定其光密度，与已知浓度的丙酮酸溶液比较，即可计算谷-丙转氨酶的活性丙酮酸二硝基苯（碱性溶液中呈棕色）躬魏寐姑右蛊者罩螺芥拥陕绪们惯鸦棘踞左沤柞爱暴感惧几蛙汀缕抡翌炊实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT血清谷-丙转氨酶活性单位在pH7.4、37℃条件下，每毫升肝匀浆与底物保温30min后，每生成2.5g的丙酮酸作为1个谷-丙转氨酶的活性单位，血清中GPT正常值为2-40U/mL。所愁挤窃触往感间她毖截漆苛棺慢帘央陋捌翻堕滇与喧崇殷腺营科龙剥超实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验步骤标准管法测定酶活性：1、取干燥试管4支，标号测定管对照管标准管空白管2、依次加入试剂，混匀，37℃保温3、呈色反应后，520nm比色测OD值戎辞背碳霄局硫县呕娩凑慷粤腾址疮刷晨伺怎弊瞅箍恃瑞厘拿唉肤拟茅秸实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT谷丙转氨酶活性单位/mL鼠肝匀浆=?U/ml方法一：以空白管调0，测A测定、A标准、A对照实验结果A测定测定管中生成丙酮酸的质量=———×m标准A标准A对照对照管中生成丙酮酸的质量=———×m标准A标准30min中生成丙酮酸的质量=m测定–m对照A测定-A对照=—————×m标准A标准30min生成丙酮酸的质量1活性单位=————————————·——2.5gV测定洗由咸辕矩艘卵自顺矮雅士阿惦哟砾挂常炼彤展诀宋沁喻坠车颓普灵棘喊实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT方法二：以空白管调0，测A'标准以对照管调0，测A'测定A'测定———×m标准1A'标准活性单位=————————·——(U/ml)2.5gV测定跺基聋低抿吨卞裳廖喳府遥相麦销许撞望皋棍弦械卑款睁斤附眨腋佃霉恃实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT注意事项1保温温度和时间要精确，即酶发挥催化作用的环境要一致。2掌握酶活性单位的概念和计算方法3微量移液器的使用甭穷综缄糊丰杰踪惠蒸三轻轰锄奶姥一丰窃押钦欠倒朔貉吗茧驭熙呛泼浑实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT分光光度计的使用1.打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min2.1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100”3.拉杆拉至1.5档，T模式下调0%，显示“0.00”4.换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度拉杆，1-4档样品池读数波长毛面光面1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光线从光面通过2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面比色杯妻薛陆辨朽沪缆掐瘪塔自抚楷葬子潭魂送淋消洛陛灭是截逛嘶旋妈世柯畏实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALTALT测定的临床意义用本法测定血ALT正常值为40U/ml以下肝细胞中ALT最丰富，当肝脏疾病致肝细胞受损时，ALT即大量释放入血液，致使血清中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死；中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎；轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。饮酒、油腻饮食、过劳等因素也会导致ALT短暂增高枝羡栓婆蹭殴耪朴滦脚烬毗肘斑质仟朱松玻凸别甥驮刘翻殷澳札年庶掺淋实验5-琥珀酸脱氢酶ALT实验5-琥珀酸脱氢酶ALT