还原糖脂肪蛋白质的鉴定 苏教版 实验.

高中生物实验实验一：生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、实验原理可溶性还原糖的鉴定：当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。CH2OH-(CHOH)4-CHO+2Cu(OH)2→CH2OH-(CHOH)4-COOH+Cu2O↓+2H2O蛋白质的鉴定：在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu2+作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。脂肪的鉴定：苏丹Ⅲ是可以对脂肪染色的试剂，因此，当含有大量油滴的植物细胞用苏丹Ⅲ染色后，在显微镜下可以看到细胞内橘黄色的颗粒。二、实验目的1、初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖的基本方法。2、初步掌握鉴定生物组织中脂肪的基本方法3、初步掌握鉴定生物组织中蛋白质的基本方法。三、实验材料1、做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含量、生物组织有无色素是影响实验结果及其观察的最重要因素。因此要选用可溶性还原糖含量高、白色或近于白色的植物组织，其中以苹果、梨最好，也可用白萝卜替代。也可直接用蔗糖和淀粉含量较高的物质配置的溶液。2、做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实验的要求。将花生种子经过3-4小时的浸泡使其变软，有利于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎裂，切不成薄片。3、做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量较高的大豆或鸡蛋清。甲液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液）斐林试剂乙液（0.05g/mL的硫酸铜溶液）甲、乙试剂千万要分开放，不可混合。在实验过程中，将4-5滴乙液滴入2mL甲液中现混现用！！！四、试剂配制苏丹Ⅲ溶液：将0.1g苏丹Ⅲ干粉溶100mL体积分数为95%的酒精溶液中，待全部溶解后即成。A液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液）双缩脲试剂B液（0.01g/mL的硫酸铜溶液）（1）制备组织样液（教师制备）（2）鉴定样液1、先在试管中加入2mL组织样液，再加1mL清水或唾液五、实验操作1、生物组织中可溶性还原糖的鉴定再加入2mL刚配制的斐林试剂隔水加热2分钟注意观察整个实验过程中，溶液颜色的变化！！！（1）切片制作①去掉花生种皮②用左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（为什么？）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面。③刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。）如此连续动作，切下一些薄片。2、生物组织中脂肪的鉴定（2）染色用毛笔将最薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央→滴苏丹Ⅲ溶液2-3滴于花生子叶薄片上→2-3min后，吸去染液→滴50%的酒精洗去浮色→吸去多余酒精→再滴1-2滴蒸馏水→盖上盖玻片，制成临时装片。（3）镜检鉴定在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（最好只有1-2层细胞），移至视野的中心→换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内橘黄色的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来。（1）制备生物组织样液（教师制备）（2）鉴定先加2mL组织样液再加2mL双缩脲试剂A液加3-4滴双缩脲试剂B液注意观察溶液中颜色的变化？3、生物组织中蛋白质的鉴定课堂练习1、下列关于实验一操作步骤的叙述中，正确的是（）A、用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定B、脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴C、鉴定可溶性还原糖时，要加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入乙液D、用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入含样品的试管中，且必须现混现用2、在生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，对实验材料的选择叙述中，错误的是（）A、甘蔗茎的薄壁组织、甜菜的块根等，都含有较多的糖且近于白色，因此可以用于进行可溶性还原糖的鉴定B、花生种子含脂肪多且子叶肥厚，是用于脂肪鉴定的理想材料C、大豆种子蛋白质含量高，是进行蛋白质鉴定的理想植物组织材料D、鸡蛋清含蛋白质多，是进行蛋白质鉴定的动物材料3、将三个鉴定实验与其使用的试剂和结果之间用直线连接起来。可溶性还原糖斐林试剂紫色脂肪双缩脲试剂橘黄色蛋白质苏丹Ⅲ砖红色NH2|4、实验可知，在尿素（O=C）溶液中加入双缩脲试剂，也能产生紫色反应。依据蛋|白质鉴定实验原理说明之。NH2