颐和春口服液对肾阳虚大鼠肾损伤的保护作用

中国现代应用药学2010年7月第27卷第7期ChinJMAP,2010July,Vol.27No.7·591·中的溶解度，从而有利于NLC对药物的包封。在本研究中脂质纳米粒制备时加入油酸与固体脂质混合使用，可以制备纳米结构脂质载体，液态脂质的存在可以紊乱固态脂质的晶形结构，提高载药量，促进吸收。而加入卵磷脂可以改善固体脂质纳米粒对细胞的亲和性，增加吸收。REFERENCES[1]BARGONIA,CAVALLIR,ZARAGP,etal.Transmucosaltransportoftobramycinincorporatedinsolidlipidnanoparticles(sln)afterduodenaladministrationtorats.PartⅡ-Tissuedistribution[J].PharmacolRes,2001,43(5):497-502.[2]WISSINGSA,MÜLLERRH.Theinfluenceofsolidlipidnanoparticlesonskinhydrationandviscoelasticity-invivostudy[J].EurJPharmBiopharm,2003,56(1):67-72.[3]ZHANGJM,HUFQ,YINGXY,etal.Studiesoninsulin-loadedstearylaminenanoparticles:preparationandphysicochemicalproperties[J].ChinPharmJ,2004,39(8):605-607.[4]MULLERRH,RADTKEM,WISSINGSA.Solidlipidnanoparticles(SLN)andnanostructuredlipidcarriers(NLC)incosmeticanddermalogicalpreparation[J].AdvDrugDeliveryRev,2002,54(suppl):S131-155.[5]GARCÍA-FUENTESM,TORRESD,ALONSOMJ.Designoflipidnanoparticlesfortheoraldeliveryofhydrophilicmacromolecules[J].ColloidsSurfBBiointerfaces,2003,27(2/3):159-168.[6]YANGSC,ZHUJB,YUL,etal.Bodydistributionofcamptothecinsolidlipidnanoparticlesafteroraladministration[J].PharmRes,1999,16(5):751-757.[7]MÜLLERRH,LUCKSJS.Arzneistofftragerausfestenlipidteilchen,festelipidnanospharen(SLN):Europea0605497[P].1996b.[8]YUANH,MIAOJ,DUYZ,etal.CellularuptakeofsolidlipidnanoparticlesandcytotoxicityofencapsulatedpaclitaxelinA549cancercells[J].InterJPharm,2008,348(1/2):137-145.[9]YUANH,CHENJ,DUYZ,etal.StudiesonoralabsorptionofstearicacidSLNbyanovelfluorometricmethod[J].ColloidsSurfBBiointerfaces,2007,58(2):157-164.收稿日期：2009-09-17颐和春口服液对肾阳虚大鼠肾损伤的保护作用朱善意1,2，刘玲艳1，陈爽1，高越颖1，冯磊1，邱丽颖1*(1.江南大学医药学院生物制药系，江苏无锡214122；2.江苏省姜堰市苏中制药集团有限公司，江苏姜堰225500)摘要：目的观察颐和春口服液对肾阳虚大鼠肾功能的保护作用，并初步探讨其机制。方法用腺嘌呤灌胃制备肾阳虚大鼠模型。实验分为正常对照组、肾阳虚模型组、肾阳虚阳性药物治疗组和肾阳虚颐和春治疗组。给药10d后观察颐和春口服液对肾阳虚大鼠体重、肾指数、肾功能及肾形态学改变，并从凋亡和抗氧化方面探讨其保护机制。HE染色观察肾形态学改变、生化法测定血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)，末端标记法测定肾组织凋亡。结果颐和春可改善肾阳虚引起的大鼠体重下降，使肾指数增加，降低血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平，改善肾形态学表现，减轻肾小管上皮细胞凋亡，提高血清谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)活性。结论颐和春口服液对肾阳虚大鼠肾功能有明显的保护作用，可能与提高抗凋亡和抗氧化能力有关。关键词：颐和春；肾阳虚；肾功能；抗凋亡；抗氧化中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1007-7693(2010)07-0591-04TheProtectiveEffectsofYihechunOralSolutiononKidneyofKidney-YANGDeficiencyRatsZHUShanyi1,2,LIULingyan1,CHENShuang1,GAOYueying1,FENGLei1,QIULiying1*(1.DepartmentofBiopharmaceutics,SchoolofMedicineandPharmaceuticsJiangnanUniversity,Wuxi214122,China;2.SZYYGroupPharmaceuticalLimited,Jiangyan225500,China)ABSTRACT:OBJECTIVEToobservetheprotectiveeffectofYihechunoralsolutiononthedeficiencyofkidney-YANGratsandtoinvestigateitsinitialmechanism.METHODSPreparedeficiencyofkidney-YANGratsmodelwithintra-gastricadenine.Experimentalgroupsweredividedintonormalcontrolgroup,modelgroup,positivedrugtreatmentgroupandYihechuntreatmentgroup.ObservedtheeffectofYihechunontherats’weight,renalindex,renalfunctionandkidneymorphosis,and作者简介：朱善意，男，硕士，工程师Tel:13801472496*通信作者：邱丽颖，女，博士，教授Tel:[phone]E-mail:[e-mail]·592·ChinJMAP,2010July,Vol.27No.7中国现代应用药学2010年7月第27卷第7期investigateditsprotectionmechanismontheapoptosisandantioxygen.HEstainingofrenalmorphologicalchanges,biochemicalserumGSH-PX,BUN,andCr,end-labelingmethodforthedeterminationofapoptosisinrenaltissue.RESULTSYihechuncanimproveweightlossinratscausedbydeficiencytoincreasedkidneyindex,lowerserumcreatinine(Cr)andbloodureanitrogen(BUN)level,toimprovetheperformanceofrenalmorphologyandreduceapoptosisofrenaltubularepithelialcells,raiseserumglutathioneperoxidase(GSH-PX)activity.CONCLUSIONYihechunoralsolutionhassignificantlyprotectiveeffectsontherenalfunctionindeficiencyofkidney-YANGrats.Itsmechanismmaybeassociatedwithincreasedresistancetoapoptosisandtheantioxidantcapacity.KEYWORDS:Yihechunoralsolution;deficiencyofkidney-YANG;renalfunction;anti-apoptotic;antioxidant中医学认为“肾藏精，主生长发育和生殖”，其主生殖功能的发挥依赖肾阴、肾阳来实现。肾阳为一身阳气之根本，它对体内各个脏腑起着温煦生化的作用。若肾阳虚损，温煦功能失职，则可导致虚寒衰弱诸症及生殖机能的减退[1-2]。颐和春口服液配方来自明朝《景岳全书》中治疗男性阳痿、女性月经不调的“赞玉丹”，主要由人参、狗肾、鹿茸、锁阳、淫羊藿、蛇床子、沙参、冰片、覆盆子、熟地黄、韭菜子(炒)、附子(制)及路路通等15味中药材经提取制成，具有补肾壮阳，健脑强心之功效，适用于肾阳虚引起的阳痿、遗精、精冷不孕，腰膝酸软等症，目前已广泛应用于临床肾阳虚的治疗。但对其对肾脏的保护作用及机制少见报道。为此，本试验观察了颐和春口服液对肾阳虚大鼠肾脏的保护作用，并初步探讨其保护机制。1材料与方法1.1药物颐和春口服液(苏中药业，批号：000912)；腺嘌呤(上海丽珠东风生物技术有限公司，批号：000909，纯度98.0%)；金匮肾气丸为阳性对照药(同仁堂)。血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)试剂盒(南京建成生物有限公司)；凋亡试剂盒(武汉博士德生物有限公司)；其他试剂为国产分析纯。1.2肾阳虚模型的制备根据文献[3]用腺嘌呤制备肾阳虚模型，腺嘌呤剂量为每日200mg·kg1，与蒸馏水混成悬浮液灌胃，每日1次，共28d。据肾阳虚症状，如畏寒喜暖、小便清长、倦缩拱背、精神萎顿、少动闭眼、体毛枯疏、阴囊皱缩、睾丸回升、尾部苍白、肛周污秽、消瘦等符合中医肾阳虚证的特点，确定造模是否成功。1.3实验动物分组及给药雄性SD大鼠购自中国科学院上海实验动物中心，体重230~260g，实验动物合格证号：SCXK(沪)2007-0005。分为正常对照组、肾阳虚模型组、肾阳虚阳性药物治疗组和肾阳虚颐和春治疗组。各组大鼠均灌胃给药，药物剂量按说明书人服剂量的5倍量换算成大鼠用量，每天1次。正常对照组和模型组每天灌胃蒸馏水。各组于模型成功次日开始给药，连续10d。1.4动物取材于昀后一次给药后24h，断头处死大鼠，暴露肾脏，数码相机拍照其大体形态，然后迅速取出双肾，生理盐水漂洗净血液并用滤纸吸干水分称重，以双肾重(mg)与体重(g)之比表示肾指数。颈动脉取血，静置1h后3500r·min1离心10min分离血清，20℃保存备用。严格按照试剂盒说明测定血清BUN、Cr和GSH-PX。1.5肾组织形态学观察及凋亡检测于昀后一次给药后24h，断头处死大鼠，迅速取肾，10%甲醛固定，常规石蜡包埋，5m厚切片于经赖氨酸处理的防脱切片，常规脱蜡至水，HE染色，光镜观察肾形态变化。相邻切片用于测定肾组织凋亡，末端脱氧核糖转移介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTP-biotinnick-endlabeling，TUNEL)法测定肾组织细胞凋亡，细胞核呈棕色的细胞为凋亡细胞。严格按试剂盒说明进行。每张切片在损伤区和内周边区各取10个高倍视野(1