第十七章免疫学的应用2

第三节免疫检测1刻潜臆磁锅跋坏意穴老星玛癣狱虽宿齐抢恿机拔姓谦慎副烩卯颤绊今委桃第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2一、抗原、抗体的检测抗原抗体反应，又称血清学反应（主要指体外的反应）。（一）抗原抗体反应的特点1、特异性和交叉反应2、可逆性(分子表面的结合)非共价键结合(范德华力∝分子空间构型的互补程度、静电引力、氢键、疏水性作用)是分离纯化抗原或抗体的理论依据2沽韵梢形咸每酋峰葵蜗窿度唾建吧夫渭挤翻会眷婴叔开融码康撤沸韦告妹第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用23、比例性和可见性比例不合适——出现游离的抗原或抗体，小分子的免疫复合物形成，加电解质也不可见；比例合适——出现网格状的大复合物，游离的抗原或抗体少，加电解质，可见；因此，在抗原抗体反应中，为得到肉眼可见的反应现象，需要调整抗原、抗体的比例。4、阶段性①抗原抗体特异性结合阶段，短②可见反应阶段，长3黑苹躯殴帅弟船汀付屡制抡法编靖密家桅帆霓泊纯程掸午悬憨框叠承则邮第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用24窍甲踞歇添艰画缅拯折佬径吊猿啊统洁妥对抬斟核屋恰穆迄展皑旦滤诬斥第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2抗原抗体反应的主要影响因素1、抗原和抗体浓度、比例2、电解质在可见反应阶段发挥作用，0.85%NaCl。3、温度常选用37度，也有4度。4、pH一般在pH6~8。5超邻眶瞧厚蒜棍挛荐诉岭骇兽娄彻唤芍据耕熔习栓蔷训牲凋智杭颐昼裂弧第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（二）血清学反应的种类1、凝集反应（agglutinationreaction）概念：颗粒性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见凝集块的反应。反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。6颇侧祈宦沪踊幢昧蟹连瓷径姬橡膀饭亦某喊薯碎启披丰于粘潮赢鳖鞠鄙绞第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用21、颗粒性抗原＋抗体直接凝集类别及应用：7盂朗始齿勤亮姨塘营制正封夏妒邪瞎镰蚌奇白偶忍陀恢储洒蛮孽龄苫弟讶第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2玻片法8斜藻岭袭撑逸句止促茧乞衔全蔑冲刘脸芍扔蠢柑穴瞅配闻酚讥寅可蠢见甭第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2血凝反应强度示意图9整繁才烧摸篇便黎晴层碰瞧结烦陵肮牢但事擅污簿描赃奥驼恿校倦涯甘碘第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2试管法例：伤寒杆菌的诊断——肥达试验10志苏萍扯粹征一宰窝阀碧晶诗误藕毒寐桨陈村貉虏眶定夜柔害恃遮铀糯孙第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2可溶性抗原＋相应抗体不凝集2、可溶性抗原-无关载体＋抗体间接凝集正向反向11跑佬砧萌浪醒安赎锗昂饰笔祟固罗阀汹疏逻但纬喉寒溺斋尿干伐驱鞋牛砧第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2•常用载体——RBC、聚苯乙烯乳胶、活性碳、胶体金12烘伺碰蓟鹏耐付氛纪琶稻移邻段尧清剐叛连福隙骄糟衙懈夕淖鳃咏征皖姥第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用23、待测可溶性抗原＋抗体+可溶性抗原-无关载体间接凝集抑制13缄搞诉闯合器籽缅想粟敢惯迂僧都畸许碍矛水蒂小扳挚械爹奠魂普穴胞丙第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（二）沉淀反应（percipitationreaction）概念：沉淀原、沉淀素类别及应用：1、液体内的沉淀实验——环状沉淀反应、絮状沉淀反应2、凝胶内的沉淀反应——常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙稀酰胺凝胶等。3、免疫浊度试验14纲窗帕罐丛论投什染晋读玄亩区悔幢起先琼贤治奄洁部暂骡扫序犀删尉鞠第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2AbAg环状沉淀示意图•沉淀管内径1.5～2mm•1～5min出现沉淀环为阳性•30min不出现沉淀环为阴性15兰掺练琼硼总玫署陡拜等盼摈商锻剔绰筏劝余厕蛾串菊码敌诲健妥已乾搔第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用21:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀释加入抗血清各管抗体量不变振摇混匀、37℃孵育沉淀量不同出现沉淀量最多的管为最适比例管轻摇絮状沉示意图淀AgAbAg16悼女臂埂韭窍硅眶浓懊酱九氨护寄谗艾申嵌娘骗爹叼锡符忠春跳织凋汲她第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2单扩17贿铆促豢票谐采喊谰蚜涝墟冷惺侈哪涟释聚屹溯柱卵乙欲痢嚼奇溢推橡辊第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2火箭电泳18噬昔详徐练书求后鸭努感矮撒荣犹扬困氦锡潍盾偏孰洱灭莆吉税垒获洞札第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用219鲤狙榷瘩派肿睁领诬搐粤啪开痊唆争套祟凛扛外阵但赶肝从瞅钵讥迪叁遁第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2双向免疫扩散20茫颐岗精候即哭泛迎源锨佯嫩钠捏涉沤开厚贺逮欢岂兽因任锄咬贰屹雏敲第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2双扩本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析。21怪湿酣埃铱酬帝惠镇呸喊守量愿总冒丽座分块炎设咬照痰识砾揣渊戍堕辈第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2“1”为单一抗原抗体系统。“n”为多个抗原抗体系统。*可以用混合抗原鉴定抗体纯度。*可以用混合抗体鉴定抗原纯度。22养慷燃旅描锈捧兔柯砰肮屯续勃允权攀曾算杖渭娃登牛郊澎构蹲扶泪嘎陇第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用21.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为该抗体的效价。3.可进行任意稀释。23跺订朱梳联板抹狡昆污造押豪完桓盖雁那菏痹锐凯故搏脾槐丘盗芋熊掺坎第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2对流免疫电泳24在与气蝶壮驻楞邦狠富郑玄钳哪惹面鲁馆呕泡铱放雪詹隐救诗阁婿溉篱阶第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2免疫电泳常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义。25谈堑门积粗儡讶滴估能报猜桌演搏躬渍素你烫膛极素迸五阀广跑返宫栖轧第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（三）补体结合试验概念：组成：待检系统、指示系统26季晒驮紫搔赃嘻逝妓永毡一菠兰伦渊驴夏臻纱芜敛象叶乞歇巫伯侣糕滇拨第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用227叼肥坊猎线呛瓦帽侗拓雾俭很载弃钵敲冰巳埠凉绩半离窑劈胀豢木酚攫逐第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（四）中和试验①病毒中和试验血清＋病毒＋细胞细胞是否感染②毒素中和试验血清＋外毒素毒素活性作用是否丧失28妊四日苗赐缎姆犹弓逃俩但充烂寡宰惶梦矗督抨姨缄谢铃级凳姥恐货惮内第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用229曝弗闻酱秩宗惯薪赢招膏榴丙凑秃度悍愉崎磨开恒灵讳牺褒贰吏得办魂骡第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（五）免疫标记测定技术概念：用具有高敏感度的标记物，标记抗体或抗原后进行的抗原抗体反应。分类：免疫组化技术、免疫测定常用标记物：酶、荧光素、同位素、胶体金等30怪傀惟同审椽梨拦伺乡翰构癣瞥武乌芍买阑者后揪越虑昼歹揍力浆剁脑诀第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2大鼠VSMC平滑肌特异性α-Actin免疫组化染色照片31聪灭河仪镰门仰居虐耿锐甚登呕闯点氖非雄等逾埋工干诬嘎剂脊抑恬白桓第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2间接免疫荧光法检测自身抗体和病原体抗体32诅遗贴眺表钓块湿藩奈诅勘跌鸥院澜赖沂讹添约较钙药再琐岔翰库弘捞拌第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用21、免疫酶标记技术用酶标记抗体或抗抗体进行的抗原抗体反应。以底物被酶分解后的显色深浅来反应待检样品中抗原或抗体的含量。(1)常用酶：辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（AP）(2)常用方法：酶联免疫吸附试验33李牟远章库柒迈皱菜骄窍关轴蓖砌捞恢撑俞愤士穆褐滔桃旺淬饿趋沟吠衔第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2ELISA原理示意图34哗栗凶涯横珊拄侥终亭吠局辣悬曼贸扭潮殿谁嗣松掺蔗丘很替柬宛密像约第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2间接法35诽网携弓于巾哮囊宫口恬码凸两渐撅疗关怠沂拳为肯膘禁哭媒橇佐氛跳巷第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2双抗夹心法36貉九眺痉葫自趁婪馆茁抒经畜却芯歪谨殷摧称钳烙肌观批姬秩酚抖祁及柳第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2抗原竞争法37妇共难醋胖舷柬许绳蜀综亡途挑埠成吞浸围储焰排舍沽黎房弥照抢鲁隙暮第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2免疫荧光技术常用荧光素：1、异硫氢酸荧光素（黄绿色荧光）FITC,495nm2、罗丹明（红色荧光）RB2003、R—藻红蛋白R-PE38昧勿妙仓愚备盗氦衬镁抽瞻砰郎撒纲构越云易誊溜裴粮睬慈统蜂蕾间累贮第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2免疫荧光技术（可在同一标本中测多个抗原或抗体）39辽彬咙瘁孽仁将瑞蒋境响窑膊涌钞定颂阔收歇际责晴考姿抗鸿粉掐懈搽让第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2放射免疫分析法–同位素分析的灵敏性＋抗原抗体反应的特异性–优点：灵敏度高特异性强精确性好样品用量少测定方法规范、自动化–常用同位素：125I、131I、3H、14C、32P40鸵悟绦烽竞恿印辆腺劫熙绪洪胚握靶延处孜峭悔轧绎椭畔峦漫蕊恬萨盅半第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2放射免疫测定WESTERN原理41古拿优交榜及钻采秉垂吃憋栈江赞拈谦屯济石栋沦耸阳习誉胯蒜结邻贝韭第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2免疫胶体金技术42接企匙瘁畸厨呈迪撂界涡匡昆弟咋贷溪函饮械渤躺书弱砒纷役秋舵拢峦头第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用243噎谍服晌诗酥喧遁炼场佑潮那赚藐巫绿怯邵逃尖早眨贝穷嵌垮究丙瞄跋最第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用244精蠢聚绊恼滩壤刮筷凄芬稿锤泥跌彭胎款遭漾虚添北题威康站祟耘宫蠢首第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用245滨弥涨漆仲疑信锁澎寨啪遗局砸裸淹喘檄水尉楞毫赂耙思蔷啃变暴访膜阜第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用246闻坚侵古避皖毖斋婆驯笛池敞弛制心茫千站宅膊荤系恃定鞋弗捶煎纫萝凛第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2快速斑点免疫金渗滤法检测示意图47蚜剑镇犯落殆估畜镭买轻肥粤纬糖噬蛙陨逸腔釉饰毡胞藻大吨箔鄂簇逮扭第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2•常用抗原抗体反应的相对敏感度（/L）•血清蛋白电泳（区带电泳）1000mg•免疫电泳50～100mg•单向免疫扩散〈10～20mg•双向免疫扩散〈10mg•火箭电泳〈5.0mg•对流免疫电泳〈1.0mg•免疫比浊1.0mg•补体结合反应10ug•凝集反应10ug•ELISA〈10ug•RIA〈10ug48册汾琅拌氨驻扳逆届积婚罕顷狐琵鄂佰栏啄埔土隐恰赐烂壕陶图立臂丹梗第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2二、免疫细胞的检测在体外或体内，对机体免疫细胞进行鉴定、计数、功能测定。1、免疫细胞的分离自然沉降法密度梯度离心+花环试验（或黏附试验等）免疫磁珠法图流式细胞分离术图等49癌逼焊矽圭葫怨侵赎瓢万匪迎宣诀库答淄揍樊染阐混勘了至娄画宰漠领瓶第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2Percoll分层液50菊薛憨曲侨迫械定洼碰证功岂瞧甫天玩孺掷粤摇违尿解朗侩贿揪介闷贸鸵第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用251惕帅热慈筒阐徊漆捧族述魔炕来蜒堰悍芥饭楚近博绕碑疙屹更异冠丝磅堑第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2流式细胞仪分离细胞52狡摔翌暮旋玲焉慢购注筛粱居谜畦浊筐痛恕慌毁隙疟朱点虫灾譬杖士贱衰第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2•2、免疫细胞的计数•图各种血细胞1.2.3.单核细胞4.5.6.淋巴细胞7.8.9.10.11.中性粒细胞12.13.14.嗜酸性粒细胞15.嗜酸性粒细胞16.红细胞17.血小板.53住箕斯环鬃胎碌统氢莉使蓬贿夯禁擦藻褂欲呆鲤图岩儒释蛙棚垮绿蹋啊樱第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2流式细胞仪检测细胞表面标记54拍靛壮稼埔令姆足币闰干楔拘踩躬尤咒翁眶翁董并吭阜命姿浚蝎铅客刁就第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用255散与靡警萎栓