06芳酸类非甾体抗炎药物的分析-杭太俊药物分析第七版

药物分析第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析非甾体抗炎药（NosteroidalAntiinflammatoryDrugs，NSAIDs）是一类不含有甾体骨架的抗炎药，多数具有芳酸基本结构。本章主要讲芳酸类NSAIDs，同时讲一下尼美利舒和对乙酰氨基酚。第一节典型芳酸类非甾体抗炎药物的结构与性质一、典型药物与结构特点OOHOR'R(水杨酸类)OHOHO(水杨酸)(SalicylicAcid)OOHOCH3O(阿司匹林)(Aspirin)OOHOOOH(双水杨酯)(Salsalate)FFOHOHO(二氟尼柳)(Difunisal)第一节:结构与性质OHNOCH3CH3甲芬那酸HMefenamicAcidOHNORH邻氨基苯甲酸类酸性酸性光谱特性第一节:结构与性质NROOR'H邻氨基苯乙酸类NNaOOClClH双氯芬酸钠DiclofenacSodium酸性酸性光谱特性基团特性第一节:结构与性质R'RCH3HOO芳基丙酸类CH3HOOCH3CH3布洛芬IbuprofenCH3HOOO酮洛芬KetoprofenCH3HOOOCH3萘普生Naproxen酸性第一节:结构与性质NOOH3CHOCH3ClO吲哚美辛IndometacinNR'RCH3OHO吲哚乙酸类酸性光谱特性第一节:结构与性质NSOHCH3NROOOH苯并噻嗪甲酸类NSOHCH3NOONOH吡罗昔康PiroxicamNSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康Meloxicam水解光谱特性第一节:结构与性质NO2HNSCH3OOO尼美利舒NimesulideHONCH3OH对乙酰胺基酚Paracetamol其它非甾体类抗炎药水解光谱特性第二节:鉴别试验依据药物理化性质，可展开一系列鉴别方法OHOHOOOOFeOH+FeCl3+H2O+3HCl紫堇色一、与三氯化铁反应显色阿司匹林：紫堇色双水杨酯：紫色二氟尼柳：深紫色均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显色水杨酸反应第二节:鉴别试验对乙酰胺基酚与三氯化铁显蓝紫色HONCH3OH对乙酰胺基酚ParacetamolFeCl3+Fe1/3ONCH3OH+HCl蓝紫色NSOHCH3NOONOH吡罗昔康PiroxicamNSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康Meloxicam显玫瑰红色显淡紫色酚羟基反应第二节:鉴别试验二、缩合反应显色CH3HOOO酮洛芬+NHNO2NO2NH2CH3HOONNO2NNO2橙红色H2SO4-H2OH二苯甲酮结构第二节:鉴别试验三、重氮化-偶合反应对乙酰氨基酚具有伯氨基，在酸性条件下反应可生成对氨基酚，再与亚硝酸钠进行重氮化反应，之后再与碱性β-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。NHCOCH3HO+HCl+H2ONH2HO·HCl+CH3COOHN2ClHO+2H2ONH2HO·HClHNO2+N2ClHO++OHNaOHOHNNOH红色偶氮化合物水解反应产生芳伯胺芳伯胺重氮化偶合反应第二节鉴别重氮化-偶合反应OCOCH3COONHCOCH3+3H2OHCl贝诺酯HONH2HCl+OHCOOHNaNO2,2HClHON2+Cl-OHNaOHOHNNOH橙红色(三)氧化反应第二节鉴别甲芬那酸＋H2SO4深蓝色(O)K2Cr2O7△黄色并产生绿色荧光随即变为棕绿色(四)水解反应COOHOCOCH3Na2CO3COONaOHCH3COONa+CO2+H2SO4COOHOHH2SO4CH3COOH阿司匹林白色水杨酸第二节:鉴别试验六、特征元素反应：分子中含有氯、硫等元素可以转化为氯化物或硫化物进而进行鉴别。七、光谱法1、UV2、IR第二节鉴别(七)IR：阿司匹林-COOH-OH-COOHPh-C邻位取代Ph第二节鉴别N-HO-HN-HPh:C=C芳胺酚第二节:鉴别试验八、色谱法供试品保留时间对照品保留时间第三节:特殊杂质及其检查法一、阿司匹林和双水杨酯生产工艺ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+COOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,70~75C。ASAOH-CO2副产物水杨酸COOHOOOH双水杨酯第三节:特殊杂质及其检查法COOHOHCOOHOHHOOOCOOH[O][O]HOOHCOOHCOOHHOOOCOOHHOCOOHOO+COOHOOOCOOH-+HPLC法淡黄、红棕、深棕色第三节:特殊杂质及其检查法其它有关物质OH(CH3CO)2OOCOCH3+OCOCH3COOHOCOCH3COO+OHCOOHOHCOO醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯HPLC法二、甲芬那酸中2,3二甲基苯胺的检查第三节:特殊杂质及其检查法甲芬那酸ClCOOHH3CCH3NH2NHCOOHH3CCH3+CuGC法第三节:特殊杂质及其检查法三、二氟尼柳中有关物质的检查FFNH2FFCOCH3FFOCOCH3FFOHFFOHCOOHFF+Cu偶联乙酰化(CH3CO)2O,AlCl3氧化H2O2水解OH/H-+羧化CO2,CH3ONaTLCHPLC所谓物质A和物质B的检查是采用自身对照法进行检查的相同药物,不同浓度,相互比较,主点限量第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析萘普生的有关物质检查MeOMeOCH3O酰化羧化MeOOHCH3COOH催化氢化MeOCH3COOH2-萘甲醚6-甲氧基-2-萘乙酮2-羟基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸萘普生色谱条件杂质限量二、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺第三节:特殊杂质及其检查法HPLCClNO2NH2HOHONO2HONHCOCH3水解还原酰化ClNHCOCH3第四节含量测定一、酸碱滴定法(Acid-basetitrationmethod)苯甲酸pKa4.20水杨酸pKa2.98酸性较强COHOHO羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；分子内氢键，更增加了其极性直接滴定Aspirin、丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均采用本法第四节含量测定1.直接滴定法中性乙醇COOHOCOCH3NaOH20℃以下COONaOCOCH3H2O乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定过程易水解中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差pKa3~6的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定pKa6~9的药物要用非水溶液滴定法若SA不合格，不宜采用本法第四节含量测定NSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康Meloxicam本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几乎不溶，在丙酮中微溶。所以ChP使用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。烯醇式结构:酸性为什么氢氧化钠能溶解之？第四节含量测定2.水解后剩余滴定法(Residualtitrationafterhydrolysis)OCOCH3COOH2NaOHH2OOHCOONaCH3COONa2NaOHH2SO4Na2SO42H2O取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，缓缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4USP32-NF27第四节含量测定含量%=(V0-V)×F×TW×100%T=0.5××12180.16=45.04(mg/ml)滴定度滴定度浓度待测物反应系数滴定液物反应系数滴定液物摩而质量空白反应体积样品测定消耗体积样品称重量第四节含量测定3.两步滴定法(Two-steptitration)Aspirin片HOCCOOHCH2COOHCH2COOH枸橼酸CitricacidHOCHCOOHCHCOOHHO酒石酸Trataricacid水解产物水杨酸SAHAc第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc第二步：水解后剩余滴定第四节含量测定取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4COONaOCOCH3NaOHCOONaOHNaAcH2O2NaOHH2SO4Na2SO42H2O第四节含量测定标示量%=WW×××××标示量100%(V0-V)FT空白消耗样测消耗校正因数滴定度片剂规格第四节含量测定游离SA偏高时结果偏高不能完全排出干扰缺点优点操作简便水杨酸干扰少结果准确，避免游离SA及片剂中稳定直接滴定法水解后剩余滴定法两步滴定法二、非水溶液滴定法吡罗昔康第四节含量测定四、UV1.直接UV法2.离子交换-UV法氯贝丁酯在226nm的波长处有最大吸收，但对氯酚等有关物质亦有吸收，干扰UV法的测定。根据氯贝丁酯为酯结构，不能发生电离，而有关物质可发生酸性解离的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采用UV法测定。标示量%=AsCRDWWAR××××××标示量100%第四节含量测定3.CPC-UV法(ColumnPartitionChromatography)利用固定相酸碱性的不同进行分离利用药物和固定相起化学反应而进行分离利用生成离子对进行层析分离单纯靠选择流动相进行分离200~300mm60mm4mm22mm层析柱玻棉压榨棒350mm21mm担体：硅藻土(Celite545)固定相：一定pH的缓冲水溶液流动相：与水不相混溶的有机溶剂(洗脱前必须先用水饱和)第四节含量测定b.ASA测定供试液制备洗脱5,25mlCHCl3相继洗脱，弃去CHCl3洗脱10ml冰HAc-CHCl3(1→50)**；85ml冰HAc-CHCl3(1→100)，并稀释至100ml测定：280nm空白：CHCl3①NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上用CHCl3洗脱的目的：去除中性或碱性杂质②冰HAc酸化的目的：使ASA游离，易被CHCl3洗脱第四节含量测定CRAR×阿司匹林(mg)=Ax供试品吸光度对照品吸光度对照品浓度例子第四节含量测定五、HPLC标示量%=CRAxARDWW×××××标示量100%对照品浓度供试品浓度对照品浓度第五节体内药物分析样品内标方法血清中ASA和SA苯甲酸高氯酸沉淀蛋白尿中丙磺舒依他尼酸C8固相萃取血浆中布洛芬肉桂酸甲醇沉淀蛋白血浆中二氟尼柳对羟基联苯大孔树脂固相萃取样品分析方法，方法验证及样品的处理