保健食品中大蒜素的测定

附件：一、保健食品中大蒜素的测定1范围本方法适用于以大蒜及其制品为原料的保健食品中大蒜素（三硫二丙烯，C6H10S3）的含量测定。本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0mL时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。本方法最佳线性范围：0.320mg/mL～3.00mg/mL。2原理：根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外标法定量。3试剂除特殊说明，所用试剂均为分析纯。3.1无水乙醇3.2正己烷3.3标准溶液：称取0.1000g标准品，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。此溶液可在冰箱中保存七天。取该溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。4仪器4.1气相色谱仪：附氢火焰（FID）检测器4.2数据处理机或积分仪4.3分析天平：万分之一4.4超声清洗机4.5离心机：3000r/min5分析方法5.1试样提取5.1.1固体试样：称取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），加无水乙醇适量，密塞，超声70min，取出冷却，加正己烷定容（调节大蒜素含量约为1mg/mL），振摇，静置分层后，取上层溶液进样。5.1.2液体试样吸取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），置于分液漏斗中，加5mL正己烷振摇提取1min，静置（或离心）分层后，取上层溶液进样。5.2气相色谱参考条件5.2.1色谱柱：HP-5(30m×0.25mm)5.2.2柱箱温度：100℃（3min）min)10(℃200℃150℃/min20℃/min105.2.3进样口温度：220℃5.2.4检测器温度：250℃5.2.5载气：氮气（1mL/min）5.2.6氢气：40mL/min；空气：400mL/min5.2.7进样量：1μL5.3定性分析：在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。5.4定量分析：试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比较定量。5.5结果计算W=100021mAVCA×100式中：W—大蒜素的含量，g/100g（g/100mL）；A1—试样使用液色谱峰面积或峰高；A2—标准使用液峰面积或峰高；C—标准使用液浓度，mg/mL；V—试样定容体积，mL；m—试样量，g（mL）。计算结果保留三位有效数字。二、保健食品中芦荟苷的测定1范围本方法适用于以芦荟及其制品为原料的保健食品中芦荟苷含量的测定。本方法的最低检出量10ng。本方法的最佳线性范围：0～100μg/mL2原理：用甲醇+水（55+45）作为溶剂，提取试样中的芦荟苷，经高效液相色谱仪C18柱分离，在紫外293nm波长下检测，以芦荟苷保留时间定性，峰面积定量。3试剂除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2008一级水要求。3.1甲醇：色谱纯3.2芦荟苷标准品：纯度≥98%3.3芦荟苷标准溶液：精确称取芦荟苷标准品10.0mg，加流动相甲醇+水（55+45）溶解并移入100mL容量瓶中，定容至刻度。精密移取5mL至10mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。4仪器设备4.1高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器4.2色谱柱：C18（以十八烷基键合硅胶填料为填充剂）或具同等性能的色谱柱，150mm×6mm，5μm。4.3超声波清洗器4.4C18净化富集柱C18预柱装量0.5g：分配型4.5离心机：3000r/min5色谱参考条件5.1流动相：甲醇+水=55+455.2流速：1mL/min5.3柱温：40℃5.4检测波长：293nm5.5灵敏度：0.016AUFS5.6进样量：10μL6分析步骤6.1试样制备：将固体试样粉碎成粉末状，混匀，称取适量试样（相当于含芦荟苷2.5mg，精确至0.001g）于50mL容量瓶中，加检测用流动相30mL，混匀，经超声振提5min，加流动相定容50mL，离心沉淀，上清液经滤膜（0.45μm）过滤，芦荟汁饮料直接经0.45μm滤膜过滤。6.2测定步骤：分别精密吸取标准溶液和试样溶液10μL注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件，以保留时间定性，用外标法计算试样中芦荟苷的含量。7结果计算X=mAVCA21式中：X—试样中芦荟苷含量，mg/g（mg/mL）；A1—试样中芦荟苷的峰面积或峰高；C—标准液的质量浓度，mg/mL；A2—标准液中芦荟苷的峰面积或峰高；V—试样定容体积，mL；m—试样的质量，g（mL）。计算结果保留三位有效数字。三、保健食品中红景天苷的测定1范围本方法适用于以红景天为原料的保健食品中红景天苷的测定。本方法的检出限：0.5g/mL。本方法的线性范围：0.01～0.50mg/mL。2原理：混匀的保健食品试样经70%乙醇超声波提取，聚酰胺柱净化后，以0.01mol/LNH4Ac-甲醇为流动相（80：20），采用高效液相色谱法，紫外检测器，根据保留时间定性，标准曲线法定量检测。3试剂试验用水为重蒸水。3.1乙酸铵：分析纯3.2甲醇：色谱纯3.3乙醇：分析纯3.4柱层析用聚酰胺粉（粒度：30～60目）3.5红景天苷标准溶液准确称量红景天苷标准品0.0200g，加入甲醇溶解并定容至10mL。此溶液每毫升含2.0mg红景天苷。4仪器4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV）4.2超声波清洗器4.3离心机4.4聚酰胺净化柱：用5mL玻璃注射器（长75mm，内径为12mm）作层析柱，底部放少许脱脂棉，内装层析用聚酰胺粉1.0g。5分析步骤5.1试样处理5.1.1固体样品：取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎、混匀，准确称取适量试样（精确至0.001g），用70％乙醇超声波萃取30min，定容至25mL。混匀，静置后，取10.00mL上清液于蒸发皿中，于沸水浴上挥干溶剂，用3mL水（分3～4次）溶解残渣并转移至聚酰胺柱上，待过柱后再用10mL水分数次洗脱柱中吸附的红景天苷，控制洗脱液流速为0.5～0.8mL/min，收集所有的洗脱液，定容至10.00mL，混匀后经0.45μm滤膜过滤，供液相色谱分析用。5.1.2液体样品：根据样品中红景天苷的含量，准确吸取一定量摇匀后的试样（1～10mL）于蒸发皿中去除溶剂（若试样中不含乙醇，则可直接过聚酰胺柱），其余步骤同上。5.2色谱参考条件5.2.1色谱柱：C18柱，4.6×250mm,5μm。5.2.2柱温：25℃5.2.3检测波长：215nm5.2.4流动相：甲醇-0.01mol/L乙酸铵溶液＝20:805.2.5流速：1.0mL/min5.2.6进样量：10L5.3标准曲线制备：分别配制浓度为0.0、0.01、0.02、0.05、0.20、0.50mg/mL红景天苷标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以红景天苷的浓度为横坐标，相应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或进行线性回归。6测定：取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰面积与标准系列比较定量。7结果计算Ｃ×ＶX=—————m×1000式中：X—试样中红景天苷的含量，mg/g（mg/mL）；C—由标准曲线上查出待测样液中红景天苷的浓度（g/mL）；V—样品的定容体积，mL；m—样品量，g（mL）。计算结果保留2位有效数字。四、保健食品中肉碱的测定1范围本方法适用于以肉碱为主要原料的保健食品中肉碱的测定。本方法最低检出量为0.27μg。本方法最佳线性范围：0.050mg/mL～2.0mg/mL。2原理：试样中的肉碱以0.5mmol/L的盐酸超声提取，反相色谱分离，与标准品的保留时间比较定性，以峰面积外标法定量。3试剂除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2008一级水要求。3.1磷酸氢二钾3.2辛烷磺酸钠3.30.50mmol/L盐酸3.4肉碱标准溶液：精密称取干燥至恒重的肉碱标准品（含量98%）0.0200g，用0.50mmol/L盐酸溶解并定容为10.0mL，此溶液浓度为2.0mg/mL。4仪器4.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列或紫外检测器和色谱工作站或记录仪4.2超声波提取器4.3溶剂微孔过滤器：带0.45μm水相滤膜。5分析步骤5.1试样预处理：称取粉碎并混合均匀的试样适量（相当于含肉碱约40mg，精确至0.001g），液体试样取5.0mL，于50mL容量瓶中，加入0.50mmol/L盐酸约35mL，超声提取10min，用0.50mmol/L盐酸定容，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集滤液，过0.45μm水相滤膜，为试样处理液。供HPLC分析。5.2试样分析5.2.1色谱参考条件：Shim-pakCLCODS柱，4.6×200mm，10μm。5.2.2流动相：水相[0.05mol/L（8.7g）磷酸氢二钾溶液，0.002mol/L（0.4325g）辛烷磺酸钠，用磷酸调至pH2.5]-乙腈=90:105.2.3流速：0.8mL/min5.2.4检测波长：210nm5.3标准曲线的制备：分别取标准溶液0.0、0.25、0.50、1.0、2.0、2.5、5.0mL标准溶液（3.4）于5mL容量瓶中，用0.50mmol/L盐酸稀释并定容为5.0mL，分别进样20L进行色谱分析。用标准浓度—峰面积绘制标准曲线。5.4试样测定：取20L试样处理液（5.1）注入色谱仪中，以保留时间定性，面积定量。5.5结果计算C×VX=———m式中：X—为试样中肉碱的含量，mg/g；m—为试样质量，g；C—为试样处理液中肉碱的浓度，mg/mL；V—为试样处理液体积，mL。结果保留三位有效数字。五、保健食品中人参皂苷的高效液相色谱测定1适用范围本方法适用于以人参为主要原料的保健食品中人参皂苷含量的测定。本方法的六种皂苷的最低检出量为10mg/kg。本方法的六种皂苷的最佳线性范围：0.1mg/mL～1mg/mL。2原理：将试样中的人参皂苷溶解、提取，经净化处理后，使用梯度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，适用于保健食品中人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的同时定量分析。3试剂除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682-2008一级水要求。3.1乙腈：色谱纯，200nm吸光度值为0.0213.2甲醇3.3D101大孔吸附树脂3.4高效液相色谱流动相：梯度淋洗A液为乙腈，B液为水。3.5人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准品：含量大于98%（HPLC）3.6人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准溶液的配制：配制人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准储备液，浓度分别为10mg/mL；再以此储备液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.1mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。4仪器设备4.1高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器4.2超声波清洗器4.3离心机4.4水浴锅5分析步骤5.1固体试样处理：取试验研成粉末，并过20目筛。称取该粉末样适量（相当于含总人参皂苷约75mg，精确至0.001g），于50mL具塞试管中，加水50mL于超声波清洗器中超声提取30分钟，取出，待溶液恢复常温后，准确取出10mL，通过D101大孔吸附树脂净化柱（大孔吸附树脂使用前先经甲醇浸泡，水洗，装成10cm长小柱），小柱先用10mL水冲洗，弃去水液之后，用70%甲醇25mL洗脱皂苷，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，残渣以甲醇溶解并定容至5mL，该样液离心后过0.5μm膜，滤液进行色谱分析。5.2液体试样处理：取一定量的试样于水浴上蒸干，残渣以50mL水超声提取30分钟，余下步骤与5.1相同。5.3测定5.3.1液相色谱参考条件5.3.1.1色谱柱：反相C18柱，4.6×250mm，5μm5.3.1.2检测波长：203nm5.3.1.3梯度淋洗条件时间（min）乙腈（％）水（％）流速（mL/min）梯度曲线020556575801618404