放线菌、霉菌及真菌的形态观察

实验五放线菌、霉菌及酵母菌的形态观察一．实验目的学习并掌握观察放线菌、霉菌及酵母菌形态的基本方法；初步了解放线菌、霉菌及酵母菌的形态特征。二．实验原理1．放线菌：是一类主要呈菌丝状生长和孢子繁殖的陆生性较强的革兰氏阳性细菌，广泛分布于含水量低、有机质丰富的微碱性土壤中。放线菌的菌落形态特征为：形成干燥、不透明、表面呈致密丝绒状，上有一层彩色“干粉”的菌落。菌落与培养基连接紧密，难以挑取，菌落正反面颜色不一致，在菌落边缘的琼脂平板上有变形的现象，有泥腥味。放线菌在显微镜下一般气丝在上，基丝在下，气丝色暗，基丝较透明。有的放线菌只产生基丝而无气丝。本实验采用压片法来观察放线菌的菌丝形态。2．酵母菌：酵母的菌落形态与细菌的相仿，由于酵菌细胞比细菌的大，细胞内有许多分化的细胞品，细胞间隙含水量较少，不能运动，帮菌落较大、较厚，外观较稠和、不透明，菌落颜色多为乳白色或矿烛色。一些不产假菌丝的其菌落更隆起、边缘极圆整；产假菌丝的其菌落较扁平，表面和边缘较粗糙。a.形态观察：酵母是不运动的单细胞真核生物，通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。b.死活鉴定：美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。3．霉菌：也呈菌线体形态，但霉菌的菌丝和孢子比放线菌的粗得多。霉菌的菌落形态较大，质地蔬松，外观干燥，不透明，菌落与培养基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味。菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊。三.实验步骤1.放线菌形态观察：A.用接种铲或解剖刀将平板上的菌苔连同培养基切下一小块，菌面朝上放在一载玻片上。B.另取一洁净载玻片置火焰上微热后，盖在菌苔上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢丝或孢子）粘附在后一块载玻片中央，有印迹的一面朝上，通过火焰2～3次固定。C.用番红染液覆盖印迹，染色约1min后水洗D.干后用油镜观察2.酵母菌形态观察及死活细胞鉴别：A．美蓝浸片的观察:（1）按无菌操作取少量酵母菌与0.1％吕式碱性美蓝染色液混合均匀，放置约3min后，先用低倍镜后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并用颜色区别死活细胞。（2）染色0.5h后再次观察，注意死细胞是否增加。（3）用0.05％吕式碱性美蓝染色液重复上述操作。B．水－碘液浸片的观察：先滴加碘液后加水，取少量酵母菌混合均匀，盖上盖玻片观察。3.霉菌的形态观察：A.先观察霉菌的菌落形态;B.然后在载玻片上滴加一滴0.1％的美蓝染液；C.用解剖针或镊子从霉菌菌落底部小心挑取少量已经产孢子的霉菌菌丝；D.放在载玻片上的染液中E.盖上盖玻片，置于低倍镜下观察，必要时换高倍镜。四.习题你认为在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区别是什么？（P46习题3）