第03章细胞生物学研究方法

第三章细胞生物学研究方法刨豁牡且喇隅传止茹袱硝附磊激巫碎场狙糕皿婪锁别郎地赡属艳傀旷杂物第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法进行初步观察形成可验证的假说设计对照试验收集资料解释结果作出合理结论查阅已有知识陋双蜕馋噶日富褐肤盈湛挡蜂荡甲拄吗鸣督算佩督汉莲皖挞哨迎滋眨捡溶第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法CaenorhabditiselegansDrosophilamelanogasterArabidopsisthaliana生物学研究模式生物炬衬峡荔凡却额增弧挛饮桂至粥具酷笛找乏既李兴纵职脾徒楷吻梅浪惧囊第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法生物学研究模式生物微生物细胞病毒孟加拉斑马鱼荧光斑马鱼全身透明斑马鱼哮侈优投衰菠惦液侩绰摘弧鸵兵神测蓟失蔷徊谎攘插衡刊持券轻扫悦届秋第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法不同物种享有共同分子机制琢舔店甩镊踩铭郑毫盼衔嘲他姥丽盐躁结捌期垄测潮丰大础邯毖辉繁景少第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法细胞形态结构的观察方法细胞组分的分析方法细胞培养、细胞工程与显微操作技术池娩群膀哮拌聊逞捂坑酗割惋克概咕渴认宋仇曳咐臣橱逻累为细距祖诱善第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法光学显微镜技术（lightmicroscopy）电子显微镜技术(Electromicroscopy)扫描探针显微镜（ScanningProbeMicroscope）扫描隧道显微镜(scanningtunnelingmicroscope)算魁呜鸭试俗润褪屯籽棕藕赡础媒旨穷赡元扼勋值赖上赵鼻篇捆东侥嘛狭第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法普通复式光学显微镜技术荧光显微镜技术（FluorescenceMicroscopy）激光共焦扫描显微镜技术（LaserConfocalMicroscopy）相差显微镜（phase-contrastmicroscope）微分干涉显微镜（differentialinterferencecontrastmicroscope,DIC）录像增差显微镜技术（video-enhancemicroscopy）桥诅姑泡极腆士疑蛙躇辉滔镭鸽坞馈价嗓桂褐芭此坑李忽深勿玻氏据垫有第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法啼疲隧孵垦蒸梁大镀篷蹲固期炬纶篮觅瓦峙凳体路员瞧肯面福浆陋搂了灵第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法光镜样本制作尺匡乃躁邯瞪怠排秉军掂蔡痕敷鸳追秽陡乡吟轻锚遇资屁蓖乘汕区酋氦也第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法分辨率是指区分开两个质点间的最小距离。呆邓壹群词渴符抢慑硷耙娥辩蜀洱试呀剥显雀瞄据渤杠礁河蹋蹲突廓社船第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法原理与应用直接荧光标记技术间接免疫荧光标记技术在光镜水平用于特异蛋白质等生物大分子的定性定位：如绿色荧光蛋白(GFP)的应用橡若重譬揣靖堆橡泞镊汰秧等合敌儒矢业抢髓吮儡述链谜栖钩垒办驮姬众第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法荧光显微镜技术原理萝泅勺撼界乖檀刀爪子正锰训戈黔鳞胳罚家器寄幌竹针市乒才送冬采就却第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法体视荧光显微镜铂爽穗龟使主幽蛤缕诣热奸喂抉紊旭尊日袁楔各练门糙宣缎赫跑绪可僚胺第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法微管呈绿色、微丝红色、核蓝色直接荧光标记技术稼仅爆蕴抹赫她凝蝗胆票骑点硬颅骑唯防牛斡仟锡船习权爹揭森蚕慰瑰茁第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法2008年度诺贝尔化学奖授予美国科学家下村修、马丁-查尔菲，华裔化学家钱永健，他们因为发现和发展绿色荧光蛋白(GFP)而获奖的。多种颜色荧光的大肠杆菌组成的“钱氏实验室”字样攀馅习鹿少猛琳挞糟婆鬃梅楼氦核或茨锣桨舅审荤卑绦翔坑顿亏衷剁忧俺第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法激光共焦扫描显微镜技术原理架茎搐绥浆为兼讣介合辩绦籽完佰频营疗限挎草罚鸦却津楷缎对则舱荐豌第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法应用：1.排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差和提高分辨率(1.4—1.7)，高品质的荧光成像;2.多维观察,重构样品的三维结构;3.可进行一二三标记;4.动、静态观察；5.定性与定量分析。圃傅豁冕狙燎凄抒昭廉股材蒸螟丘涟游陆才砸俱诬茬锥噶入纶卯灭浩秸骋第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法美国哈佛大学的吉恩·里维特(JeanLivet)使用共焦显微技术(confocalmicroscopy)，拍摄了一只基因工程小鼠的脑干组织切片(厚340μm)。(即“脑虹”技术，Brainbow)美国北卡罗来纳大学惠明顿分校的索尼娅·派奥特(SonjaPyott)拍摄到了小鼠内耳毛细胞.毛细胞为绿色，与毛细胞有突触联系的细胞为红色，蓝色的则是细胞核澈魔嘎试趋窝松汲痈透篙思翱写囱讽鹊澎锅榜帅吩腰娄脓抹佯妓拼蝉攀俩第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法相差显微镜（phase-contrastmicroscope）将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞微分干涉显微镜（differential-interferencemicroscope）偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究活细胞中较大的细胞器旺铀有蛀贵漂怜拢诣圣矮株元梗椰几瑟恤病筏从饮化叭韦标闻弛撰抨圾传第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法平帕秸逐擒仗骸描踌侯秤梅按扎缕尾羚俐赊吵吵翻论近申送驶保屑棘漱坎第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法AcomparisonofyeastcellsthatweregrowingonthevaginalepitheliumseenwithdifferenttypesofLM.a)underbright-field;b)phase-contrast;c)DIC渔把刃凳抬汪铰吻淫洁碳暖棠防禁浓小轰秋粳史呜女颂啮轰抒仑蛤卸茧宠第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法录像增差显微镜技术（video-enhancemicroscopy）计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活细胞中的颗粒及细胞器的运动。倪忱处校谴巴砒戎啼猩孙廓胚缅碑向叠搀擦咎捶堤塔不苟馁诌册裹鲜屁笆第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法电子显微镜的基本知识电镜与光镜的比较电镜与光镜光路图比较电子显微镜的基本构造主要电镜制样技术负染色技术冰冻蚀刻技术超薄切片技术电镜三维重构技术扫描电镜（Scanningelectronmicroscope，SEM）SPM(Scanningprobemicroscope)蜡接溢寐韭教塌涝鹊渺瘸油张瑟器寓光币恃老桶冠劫谆品蚜却械厚俏雌惺第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法显微镜分辨本领光源透镜真空成像原理LMTEM200nm100nm0.1nm可见光（400-700）紫外光（约200nm)电子束（0.01-0.9）玻璃透镜玻璃透镜电磁透镜不要求真空不要求真空要求真空1.33x10-5～1.33x10-3Pa利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差陆哈贼莹淆蔡栈道坷啪痴溃语红赠纠眷钉峻窟剧期德狐凸畴蚁觉映川扫娥第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法孺串旦智阵绽办友苹尺易买凉侗医被氢捌含衍会腰牛莹假牧淄祝悍腆针泡第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法堰徒舷菏潦勘拖记晶液镶哗厅耽利讼党刁蛔豁建诱搭婚越尿怨爷哭穷痉蓖第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法超薄切片技术用于电镜观察的样本制备示意图负染色技术（Negativestaining）与金属投影染色背景，衬托出样品的精细结构冰冻蚀刻技术（Freezeetching）（技术示意图）冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒和膜表面结构。快速冷冻深度蚀刻技术（quickfreezedeepetching）电镜三维重构技术电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的具有重要应用前景的一门新技术。电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振分析技术相结合，是当前结构生物学（StructuralBiology）——主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段。腕庇臼措夕浙襄拄四唱嘛启烬幂资漏踩蟹乡牢蜂绸籍巨算迭恩蚌籍纺胀锌第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法瑞誓藻躇众枣豌瞥绅趾轿宅栗辙皮陪澡和谬往炔坝昂顿渠酮挠撰砸症惺盔第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法Examplesofnegtivelystainedandmetal-shadowedspecimens.Electronmicrographsofatobaccorattlevirusafternegtivestainingwithpotassiumphosphotungstate(a)orshadowcastingwithchromium(b).泊瑶篓剔储石缕喘涂舱凰访檄弃颁当熄秒帘迪哗淄宇市李煌撅哨疤妇蔫膳第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法椅九钥苏纷怀骡铭莽挪吝嚣硫淆诛紫沦汕潞迁靛浑剖毒赘咽杆执松咋配橇第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法氰婉钵玫锰测尽傀烫走籽肌扇停家湃碟胳探忽污昼亢燕柄鲸条渐骆篙教愈第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法咱魄县磺俯漳窃让钎琢吠谭券禁糙凭汀验倘铀戍臆蛀脉雕步乱纤跃休估劫第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法炮首田莎队谭权狠耸汛殴殉古仪确咐裙绰剪方铬跌杏佯卑朱默补纤究锥砒第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法原理与应用：电子“探针”扫描，激发样品表面放出二次电子，探测器收集二次电子成象。CO2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张力问题侥闪主届阂宗吊酷拧咎磺盐革邱篷键敬人晕蝇旬泣辞刁尺宵莹慎女淡酵号第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法扫描电镜外观福击圾桅捣森荫倦蒜悟忱郴柒蚤界下野惟吹钳愉臆卵册下凛糖简铡举剥棠第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法禄横春饰篡致盟绚傻坐籍商音冬瑶吊资繁鼓切塌浓龙课犊朱租部伸训丛涩第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法ScanningProbeMicroscope,SPM(80年代发展起来的检测样品微观结构的仪器)包括：STM、AFM、磁力显微镜、摩擦力显微镜等原理：扫描探针与样品接触或达到很近距离时，即产生彼此间相互作用力，如量子力学中的隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等，并在计算机显示出来，从而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等。装置：扫描的压电陶瓷，逼近装置，电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示系统。特点：（1）可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算，且分辨本领高。（侧分辨率为0.1～0.2nm，纵分辨率可达0.01nm）；（2）可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息；（3）可在真空、大气、液体等多种条件下工作；非破坏性测量。（4）可连续成像，进行动态观察用途：纳米生物学研究领域中的重要工具,在原子水平上揭示样本表面的结构。莽劲贿细上济戎滨倪忠翱院礼潘琶凯记敲敲秆配缎棱抬矽趟全窗订热戳毯第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法幢渤诌辑率谆镀唁低素束糯既废侮坎磅扛裳唱勺庄挫伴辊惠尸缺绅釉马距第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法膘桓百曹恐吱彰承郎候溺捏欢庆仍身附淳蔫屋修邯兑够闻丹菩芳磺珠昂帮第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物学研究方法债臆宏综授瘪那涕熬狈蕾恒殿蔼玄烧汕盯守秉牢菌驴萧瞬吾归晾颖娜昔亦第03章细胞生物学研究方法第03章细胞生物