新版《医院消毒卫生标准_》修订交流分享(实验部分)[1]

中华人民共和国国家标准公告2012年第13号关于批准发布《三相异步电动机试验方法》等352项国家标准和45项国家标准样品的公告国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会批准《三相异步电动机试验方法》等352项国家标准和45项国家标准样品，现予以公布。二○一二年六月二十九日序号标准号标准名称代替标准号实施日期63GB15982-2012医院消毒卫生标准GB15982-19952012-11-01附录A：采样及检查方法采样和检查原则；空气微生物污染检查法；物体表面微生物污染检方法；医务人员手卫生检查方法；医疗器材检查方法；消毒剂检查方法；治疗用水检查方法；紫外线灯检查方法；消毒器械检查方法；医院污水检查方法；疫点（区）消毒效果检测方法；大肠菌群检查方法；沙门菌检查方法；乙型溶血性链球菌检查方法；铜绿假单胞菌检查方法；金黄色葡萄球菌检查方法；其他目标微生物检查方法。A1采样和检查原则采样后应尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过4h；若样品保存于0℃～4℃时，送检时间不得超过24h。不推荐医院常规开展灭菌物品的无菌检查，当流行病学调查怀疑医院感染事件与灭菌物品有关时，进行相应物品的无菌检查。常规监督检查可不进行致病性微生物检测，涉及疑似医院感染暴发、医院感染暴发调查或工作中怀疑微生物污染时，应进行目标微生物的检测。可使用经验证的现场快速检测仪器进行环境、物体表面等微生物污染情况和医疗器材清洁度的监督筛查；也可用于医院清洗效果检查和清洗程序的评价和验证。A2空气微生物污染检查方法1、采样时间Ⅰ类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。2、检测方法Ⅰ类环境可选择平板暴露法和空气采样器法，参照GB50333《医院洁净手术部建筑技术规范》要求进行检测。空气采样器法可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器。检测时将采样器置于室内中央0.8m～1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。房间大于10m2者，每增加10m2增设一个采样点。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类环境采用平板暴露法：室内面积≤30m2，设内、中、外对角线3点，内、外点应距墙壁1m处；室内面积＞30m2，设4角及中央5点，4角的布点部位应距墙壁1m处。将普通营养琼脂平皿(Ф90mm)放置各采样点，采样高度为距地面0.8m～1.5m；采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间（Ⅱ类环境暴露15min，Ⅲ、Ⅳ类环境暴露5min）后盖上平皿盖及时送检。将送检平皿置36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。3、结果计算平板暴露法按平均每皿的菌落数报告：cfu/皿·暴露时间。A3物体表面污染检查方法1、采样时间潜在污染区、污染区消毒后采样。清洁区根据现场情况确定。2、采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。采样方法用5cm×5cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌PBS或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1～4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10mL采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。3、检测方法把采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL～20mL，36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。A4医务人员手卫生检查方法1采样时间采取手卫生后，在接触病人或从事医疗活动前采样。2采样方法将浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积约30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10mL采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米（cm2）计算。若采样时手上有消毒剂残留，采样液应含相应中和剂。3检测方法把采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL～20mL，36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。手、物表采样液吐温－80（2%）20g卵磷脂（0.3%）3g硫代硫酸钠（5H2O）（0.5%）7.85g蛋白胨10g氯化钠8.5gPBS1000ml最终pH7.2～7.4A5医疗器材检查方法1、采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。2、灭菌医疗器材的检查方法可用破坏性方法取样的，如一次性输液（血）器、注射器和注射针等参照《中华人民共和国药典》“无菌检查法”进行。对不能用破坏性方法取样的医疗器材，应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹，采样取全部表面或不少于100cm2；然后将除去手接触部分的棉拭子进行无菌检查。手机采样方法决定检测结果！棉签涂擦法不能体现手机的无菌性！3、牙科手机：应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，将每支手机分别置于含20mL～25mL采样液的无菌大试管（内径25mm）中，液面高度应大于4.0cm，于旋涡混合器上洗涤震荡30s以上，取洗脱液进行无菌检查。消毒医疗器材的检查方法可整件放入无菌试管的，用洗脱液浸没后震荡30s以上，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL～20mL，36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数（cfu/件），必要时分离致病性微生物。可用破坏性方法取样的，在100级超净工作台称取1～10g样品，放入装有10mL采样液的试管内进行洗脱，取洗脱液1.0mL接种平皿，计数菌落数（cfu/g），必要时分离致病性微生物。对不能用破坏性方法取样的医疗器材，在100级超净工作台，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜100cm2，取全部表面，被采表面≥100cm2，取100cm2，然后将除去手接触部分的棉拭子进行洗脱，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL～20mL，36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数（cfu/cm2），必要时分离致病性微生物。消毒后内镜采样方法取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50mL含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集（可使用MODELBL100型蠕动泵【1.0～100.0转/min】）送检。将洗脱液充分混匀，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL～20mL，36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数（cfu/件）。将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜（0.45μm）过滤浓缩，将滤膜接种于凝固的营养琼脂平板上（注意不要产生气泡），置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。采样前准备无菌手套，80ML容量的螺口瓶及中和剂。采样前需要瓶口酒精灯烧灼消毒。抽取中和剂，需要用50ＭＬ的一次性注射器抽取，注意无菌操作。将中和剂从内镜注水口缓缓注入，避免喷溅，注意无菌操作，手不能接触到“推柱”内侧。同时将出水端放入螺口瓶中，注意不要污染。盖上盖子前仍酒精灯瓶口烧灼再旋紧盖子，及时送检。123456A6消毒剂检查方法1、消毒剂采样分库存消毒剂和使用中消毒液。2、消毒剂有效成分含量检查方法库存消毒剂的有效成分含量应依照《消毒技术规范》或产品企业标准进行检测；使用中消毒液的有效浓度测定可用前述方法，也可使用经国家卫生行政部门批准的消毒剂浓度试纸（卡）进行监测。3、使用中消毒液染菌量检查方法用无菌吸管按无菌操作方法吸取1.0mL被检消毒液，加入9mL中和剂中混匀；醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含0.1%硫代硫酸钠中和剂，洗必泰、季铵盐类消毒剂用含0.3%（W/V）吐温80和0.3%卵磷脂中和剂，醛类消毒剂用0.3%甘氨酸中和剂，有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加吐温80至3%（W/V）；也可使用该消毒剂消毒效果检测的中和剂鉴定实验确定的中和剂。用无菌吸管吸取一定稀释比例的中和后混合液1.0mL接种平皿，将冷至40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL～20mL，36℃±1℃恒温箱培养72h，计数菌落数；必要时分离致病性微生物。消毒液染菌量(cfu/mL)＝平均每皿菌落数×10×稀释倍数(A.6)使用中消毒液采样液吐温－80（3%）30g卵磷脂（0.3%）3g硫代硫酸钠（5H2O）（0.5%）7.85g甘氨酸（0.5%）5g营养肉汤1000ml调节pH7.2～7.4A7治疗用水检查方法血液透析相关治疗用水按YY0572《血液透析和相关治疗用水》进行检测。1、试样应在收集后30min内进行检测，或立即放在1℃～5℃下储存，24h内检测。2、应采用倾注平板法细菌总数计数。培养基应为胰蛋白酶大豆琼脂或等价物，35℃～37℃培养48h，48h后若呈阴性可72h后再检查。也可采用膜过滤技术滤除500mL～1000mL水,并在R2A低营养琼脂培养基上,可28℃～32℃下培养5d或更长时间。3、应用鲎试剂法检查内毒素。其他治疗用水参照相关标准执行。口腔诊疗冲洗用水等。内毒素：主要成分为脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），LPS主要致热及毒性部分为脂质A（LipidA）。内毒素有高水溶性，高耐热性，难以灭活及清除，有极强的发热效应，是最常见的外致热源，是血液制品和输液过程中的主要污染物。细菌内毒素检查法•本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。•细菌内毒素检查包括两种方法：•凝胶法：系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。•光度测定法：浊度法/显色基质法供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示，1EU与1个内毒素国际单位（IU）相当。•试验环境：百级洁净工作台。本试验操作过程应防止微生物和内毒素的污染。•试验用器材：仪器：试管恒温仪（恒温水浴箱）、试管、刻度吸管、移液器等。材料：细菌内毒素标准品、鲎试剂、细菌内毒素检查用水等。•细菌内毒素国家标准品（RSE）系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。•细菌内毒素工作标准品(CSE)系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。细菌内毒素标准品：•细菌内毒素检查用水：系指内毒素含量小于0.015EU／ml（用于凝胶法）或0.005EU/ml（用于光度侧定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。•试验所用的器皿：需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。耐热器皿常用干热灭菌法（250℃、30分钟以上)去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。•供试品溶液的制备：一般要求供试品溶液的pH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。•内毒素限值的确定药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定：L=K/M•式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；•K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kg·h）表示，注射剂K=5EU/(kg•h)，放射性药品注射剂K=2.5E