体液葡萄糖检验

医学检验系林勇平体液葡萄糖检验2004-02-26第九章教学目的与要求:1.复习血糖的来源与去路；掌握激素对血糖的调节作用2.掌握以糖尿病为代表的高血糖症的主要代谢紊乱及其机制3.掌握糖尿病的生化检测项目（血糖、尿糖、OGTT、糖化蛋白和胰岛素等）4.熟悉低血糖症的常见原因；了解某些糖代谢先天性异常的生化机制糖的重要生理功能1.氧化供能2.人体的主要组成成分之一糖蛋白、糖脂、蛋白多糖、核糖；转化成脂肪和某些非必需氨基酸等第一节概述糖的重要生理功能一、血糖的来源、去路和调节(一)糖的来源与去路(二)血糖浓度的调节1.肝脏的调节肝脏内糖代谢途径多，其中有的为其特有，它是调节血糖的主要器宫。2.神经系统的调节主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路中关键酶的活性来实现。3.激素的调节作用降低血糖的激素：胰岛素（insulin）升高血糖的激素：胰高血糖素、肾上腺素、糖皮质激素、甲状腺素、生长素等。（1）降低血糖的激素胰岛素（insulin）胰岛素的作用机制：受体胰岛素+C肽←前胰岛素←胰岛细胞（β细胞）cAMPATP膜通透性↑→G转运↑氧化产能↑糖原合成↑—→降低血糖酶活性↑脂肪合成↑肝细胞蛋白质合成↑胰岛素的生物活性：①靶细胞上胰岛素受体的绝对数目或绝对数目。②到达靶细胞的胰岛素浓度。③胰岛素与靶细胞受体的亲和力。④胰岛素与受体结合后的细胞内改变情况等。胰岛素的作用①促进肌肉、脂肪组织细胞膜对糖摄取，膜通透性↑②促进肝糖原合成↑③肝葡萄糖激酶活性↑，加速糖氧化分解↑④促进糖转化成脂肪、蛋白质↑⑤抑制糖异生（--）胰高血糖素由a细胞分泌的一种29aa氨基酸残基的多肽。肾上腺素是肾上腺髓质分泌的一种胺类激素。其作用均是通过与特异性受体结合，增加细胞内cAMP和Ca2+浓度。均能促进肝糖原分解成血糖及促进糖异生。（2）升高血糖的激素①胰高血糖素和肾上腺素②糖皮质激素：肾上腺皮质分泌的类固醇激素，主要促进糖异生和促进单糖的吸收。③甲状腺激素：具有双向作用，但总的趋势为升血糖。部分激素对糖代谢的调节二、糖代谢紊乱1、概念高血糖症：指空腹血糖浓度超过7.3mmol/L,有生理性和病理性之分，临床上最常见的病理性高血糖症是糖尿病。糖尿病：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病,系胰岛素绝对不足或相对不足，以高血糖症为基本生化特点。同时伴有糖、脂类、蛋白质、水、电解质和酸碱平衡紊乱，甚至出现一系列并发症如眼、肾的微血管病变及神经病变等。（一）、高血糖症与糖尿病2.糖尿病的诊断标准•症状+随机血浆葡萄糖≥11.1mmol/L,或空腹血浆葡萄糖≥7.0mmol/L,或OGTT两小时血浆葡萄糖≥11.1mmol/L。症状不典型者，需另一天再次证实。随机血糖是指一天中的任一时间采血测得的血糖浓度。3.糖尿病的分类①IDDM：也称Ⅰ型糖尿病，好发于青春期，对胰岛素敏感。②NIDDM：Ⅱ型，常见于中年肥胖病人，病变在于靶细胞膜上的胰岛素受体的数目减少或者缺陷，因而对胰对胰岛素不敏感。③继发性糖尿病：如嗜铬细胞瘤、库欣病等，或其它因素。两类原发性糖尿病的特征特征1型2型基本病因遗传+环境发病机制自身免疫性疾病生物活性降低占DM%＜15%＞85%（可发展为1型）发病年龄通常＜20岁＞40岁身体肥胖罕见多见血胰岛素↓↓（绝对不足）→或↑（相对不足）病情及酮症较重、常见较轻、少见治疗胰岛素敏感控制饮食、减肥4、糖尿病的代谢变化糖尿病会导致糖、蛋白质和脂肪代谢的改变，表现为高血糖症、高脂血症和酮酸血症及乳酸血症等。（1）高血糖症•Insulin绝对/相对不足→胰岛素/胰高血糖素比值↓利用葡萄糖减少；肝糖原输出增多；肝、肾糖异生作用增强（2）糖尿、多尿及水盐丢失•血糖过高超过肾糖阈时出现尿糖，严重者尿中可出现酮体。•尿中的葡萄糖和酮体分泌增加产生渗透性利尿，引起多尿及水盐丢失。（3）高脂血症及高胆固醇血症•胰岛素/胰高血糖素比值↓•TG↑,VLDL↑→高脂血症（Ⅳ型）•脂肪游离脂肪酸↑•分解↑乙酰辅酶A↑→高胆固醇血症•酮体↑→酮症酸中毒•当酮体产生过多，超过肝外周织的氧化能力时，会形成酮血症和酮尿症。•乙酰乙酸和β–羟丁酸均为酸性物质，产生过多进入血液可导致酸中毒。（4）酮血症血液肝细胞糖原（分解）（高血糖）磷酸戊糖+NADPH葡萄糖葡萄糖G-6-P蛋白质（动员）（酮血症）乳酸丙酮酸氨基酸酮体酮体（高Ch）乙酰CoA脂肪酸胆固醇胆固醇TCA循环甘油三脂（动员）代谢紊乱及其联系图代谢紊乱特点•以高血糖症为基本生化特点，同时伴有糖、脂类、蛋白质、水、电解质和酸碱平衡紊乱的一组临床综合症。–糖代谢紊乱：高血糖、糖尿；–脂类代谢障碍：高脂血症；–蛋白质代谢障碍：体重减轻，生长迟缓；–水、电解质、酸碱平衡紊乱：酮症酸中毒，高渗透压；代谢紊乱症群（三多一少）•高渗性利尿→多尿•多尿→口渴→多饮•糖利用障碍→能量代谢紊乱→饥饿→多食•Pro/Lipid分解和脱水→体重减轻•概念：血糖浓度低于2.2mmol/L称为低血糖症，临床上出现一系列因血糖浓度过低的症侯群。•原因①激素效应②肝病变③长期饥饿或剧烈运动•分类①空腹性低血糖②刺激性低血糖（二）低血糖症（三）酮症糖尿病酮症酸中毒(diabeticketoacidosis,DKA)第一节体液葡萄糖的测定①无机化学法②有机化学法③酶法一、血糖的测定（一）无机化学法（氧化还原法）方法类型原理用途及备注班氏法半定量G+Cu+——→Cu2O↓尿糖测定（Benedict）磷钼酸法定量G+Cu+——→Cu2O↓历史意义（Folin-Wu）分光Cu+磷（砷）钼酸盐操作复杂、需制滤液、砷钼酸法同上蓝色络合物特异性差、新铜试剂法（660nm）受还原物质影响结果偏高10%碱性高铁同上G+Fe(CN)6-3→Fe(CN)6-4历史意义氰化物法黄色无色Technicon曾用（二）有机化学法（缩合法）•方法类型原理用途及备注•邻甲苯胺定量G+邻甲苯胺→G基胺操作简便、法（630nm）无需滤液、特异性较高，中小医院使用普遍，很少用于自动邻甲苯胺法（三）酶法•方法类型原理用途及备注•己糖激酶定量G+ATP→G-6-P+ADP血清尿液脑脊液、（HK）法分光G-6-P+NADP+公认参考方法动态→GA-6-P+NADPH操作简便，特异终点（340nm）性和灵敏性均高手工、自动化分析•葡萄糖氧同上G+O2→GA+H2O2推荐常规方法化酶（POD）H2O2+染料→有色染料偶联法（还原型）（氧化型）可制试纸片定量（Trinder）（4-氨基安替比林+酚半定量筛选试验→红色琨类化合物505nm）•方法类型原理用途及备注•葡萄糖氧定量G+O2→GA+H2O2与HK法有最佳化酶氧消电化学用O2电极作极谱测定，相关性耗法动态求O2的消耗量（CX3生化仪）终点•葡萄糖脱定量G+NAD+→GA+NADH偶有使用氢酶（GDH）分光（340nm）可自动化分析法动态葡萄糖氧化酶法已糖激酶法方法学评价与临床意义①生理性或暂时性高血糖②病理性高血糖③生理性或暂时性高血糖④病理性低血糖⑤药物的影响二、糖耐量试验•耐糖现象：•糖耐量下降：•糖耐量试验：•口服葡萄糖耐量试验（OGTT）：（一）葡萄糖耐量试验口服葡萄糖耐量试验（OGTT）•适应症①空腹血糖水平在临界值而又疑似糖尿病患者②空腹或餐后血糖水平正常，但有发展为糖尿病的可能。③以前糖耐量试验异常的危险人群④妊娠性糖尿病的诊断⑤临床上出现肾病、神经病变和视网膜病而无法解释者⑥流行病学研究的手段•标准化•参考范围三、血清糖化血红蛋白测定糖化血红蛋白A1CHbA1aHbA1a1*HbA(97%)HbA1a2*HbHbA2(2.5%)HbA1bHbF(0.5%)HbA1c糖化血红蛋白A1C为血红蛋白A中2条ß链N端的缬氨酸与葡萄糖非酶化结合而成,其量与血糖浓度呈正相关,且为不可逆反应.GHb测定方法阳离子树脂交换层析法*：常规方法，精密度高、操作简便、受HbF正干扰；GHb5-8%亲和层析：常规方法，灵敏度高、操作简便、高度特异、干扰少；GHb5-8%、GHbA13-6%HPLC：参考方法四、糖化血清白蛋白(GSP)形成机制与糖化血红蛋白相似，蛋白质的糖化主要发生在赖氨酸的ε-氨基上，糖化的白蛋白和其他蛋白质即称为果糖胺。•层析法：柱层析、亲和层析•比色法：–果糖胺环状衍生物有色化合物强酸硫代巴比妥酸果糖胺–四氮唑蓝（氧化型）四氮唑蓝（还原型）–紫红色530nm五，六、血浆胰岛素和C-肽测定•血胰岛素测定对评价B细胞功能有重要意义.(RIA,ELISA)•C肽和Insulin以等分子数生成及释放,由于C肽清除率慢,肝对C肽摄取率低,且不受外源胰岛素影响,故能较准确反映胰岛β细胞功能.•血浆胰岛素和C肽水平测定有助于了解β细胞功能和指导治疗,但不作为诊断糖尿病的依据.七、尿糖测定(一)定性测定1.班氏定性试验2.葡萄糖氧化酶试纸法(二)尿中糖的鉴别(三)定量测定:邻甲苯胺法最为方便八、脑脊液测定•脑脊液葡萄糖含量受下列因素影响：①血浆葡萄糖浓度②血脑屏障的通透性③脑脊液中葡萄糖的酵解程度•参考范围•临床意义THEEND