5-6 其它类成分中药制剂的分析

第六节木脂素类成分分析第七节其它类型成分分析熟悉木脂素类、有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、单萜类及二萜类成分、多糖的理化性质掌握木脂素类、有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、单萜类及二萜类成分、多糖的中药制剂定性鉴别、含量测定的原理和方法选择以及供试液的提取纯化方法第六节木脂素类成分分析（一）概述（了解）木脂素：两分子苯丙素衍生物（C6-C3）聚合而成的天然化合物。分布：存在于植物的木部和树脂中，如厚朴、五味子、连翘、牛蒡子、细辛等的主要化学成分结构：母核常具有醇基、酚羟基、亚甲二氧基、甲氧基、羧基和内酯结构1234567891'2'3'4'5'6'7'8'9'（二）理化性质功能团反应酚-OH：FeCl3试剂，重氮化试剂亚甲二氧基：Labat试剂-没食子酸浓硫酸Ecgrine试剂：变色酸-浓硫酸（二）理化性质性状：木脂素多为无色结晶，少数能升华溶解度：游离木脂素溶于乙醇、氯仿、苯等溶剂，难溶于水。木脂素苷水溶性增加。化学性质：具光学活性，遇酸碱易发生异构化作用OOOOHOOCH3OCH3ABC山荷叶素（A）式山荷叶素（B）式OOHOH3COABCH3COOOKMnO4/KOH(1)KMnO4/Me2O(2)CH2N2OOCOOHH3COH3COOOCOOMeO（二）理化性质理化性质：氧化反应：剧烈氧化----碱性KMnO4/H2O、NaBrO/H2O；缓和氧化---中性KMnO4/丙酮（二）理化性质提取与分离：提取：游离木脂素---石油醚、丙酮、乙醇等溶剂木脂素苷---苷类提取方法木脂内酯---碱溶酸沉法分离：溶剂萃取法、分级沉淀法、重结晶、色谱法等（三）定性鉴别色谱检识：薄层色谱吸附剂：硅胶展开剂：氯仿、氯仿-甲醇、乙酸乙酯-甲醇等显色剂：茴香醛浓硫酸，110℃加热5min5%或10%磷钼酸，120℃加热至斑点出现10%硫酸，110℃加热5min三氯化锑，100℃加热10min/UV碘蒸气，熏/UV（四）含量测定方法总木脂素成分：1、比色法酚类：三氯化铁试剂反应，重氮化试剂反应Ecgrine（变色酸浓硫酸）反应Labat（没食子酸/浓硫酸）反应2、二阶导数光谱法3、柱色谱比色法（四）含量测定方法单体木脂素成分：1、薄层色谱扫描法2、分光光度法3、高效液相色谱法（五）应用实例1、香砂养胃丸中厚朴酚、和厚朴酚的含量测定第七节其它类型成分分析一、有机酸类成分分析（一）概述分布：广泛分布于中药中，并参与机体的代谢，具有多种生理活性，大多与钾、钠、钙等阳离子或生物碱结合成盐或酯存在生理活性：蜂王酸-----王浆中提取，提高免疫力阿魏酸-----抑制血小板聚集齐墩果酸-----防治脂肪肝，抗动脉硬化绿原酸-----抑菌作用（茵陈）油酸------具有抗癌作用，是鸦胆子有效成分之一一、有机酸类成分分析（一）概述结构特征：含羧基-----与显色剂产生颜色反应用于鉴别和含量测定溶解性：游离有机酸易溶于有机溶剂难溶于水，低级脂肪酸一般易溶于水、乙醇等难溶于亲脂性有机溶剂，高级脂肪酸及芳香酸较易溶于有机溶剂而难溶于水；有机酸盐易溶于水难溶于有机溶剂。检识方法：1.与氢氧化钡、氢氧化钙生成钡盐和钙盐沉淀；与醋酸铅与碱式醋酸铅生成铅盐沉淀。2.薄层色谱一、有机酸类成分分析（一）概述提取和分离：一般先酸化使有机酸游离，再选择合适的有机溶剂提取一、有机酸类成分分析（一）概述提取和分离：一般先酸化使有机酸游离，再选择合适的有机溶剂提取人参蜂王浆含蜂王酸1.4%以上含量测定方法：薄层间接和直接定量法、高效液相色谱法和气相色谱法例：（1）薄层间接定量法：样品预处理—有机溶剂提取—聚酰胺薄膜上点样—展开—罗丹明B染色—深红色（10-HAD）--吹干，剪下洗脱—在λ=560nm处比色（一）人参蜂王浆中蜂王酸的测定人参蜂王浆—水溶解—盐酸pH=3.0—乙醚提取—回收乙醚—残留物溶于氯仿聚酰胺薄膜上点样—石油醚-乙醚-冰醋酸（3：2：0.5）展开—凉干后于醋酸中浸泡10-20min—浸于罗丹明B5-10min—吹干，剪下--95%乙醇-冰醋酸-水（45：5：50）洗脱30min–比色（一）人参蜂王浆中蜂王酸的测定（一）人参蜂王浆中蜂王酸的测定（2）薄层扫描法样品制备：精密取样—加甲醇—冷冻离心—取上清液，沉淀甲醇洗3次，合并上清液—回收甲醇—残渣酸化—水饱和的二氯甲烷萃取—回收—残渣氯仿定容—测定制备标准溶液、标准曲线（3）高效液相色谱法关键：样品预处理（甲醇沉淀蛋白、超声波提取或固相萃取柱净化），保持酸度（4）气相色谱法：甲酯化后用GC其它实例（二）桂皮浸膏中肉桂酸的测定桂皮：桂皮醛、桂皮酸（国外要求）高效液相色谱法测定：样品经超微过滤器处理，定容，进样,以外标法、峰面积计算含量（三）益心口服液中阿魏酸与桂皮酸的分析益心口服液：肉桂、川芎、丹参、三七等阿魏酸、桂皮酸（四）含绿原酸中药制剂的分析薄层层析---舒肝消积丸中绿原酸的测定高效液相色谱法---感冒舒中绿原酸的测定（五）抗病毒较囊中齐墩果酸的测定--薄层色谱扫描法二、含环烯醚萜类制剂的分析（一）概述环烯醚萜：一类特殊的单萜。生源途径：焦磷酸牻牛儿酯(GPP)为前体。生理活性：多种多样。分布：多科植物--栀子、地黄、龙胆，制剂----黄连解毒汤、温清瘾、六味地黄丸、龙胆泻肝丸二、含环烯醚萜类制剂的分析结构类型：特点：C1多有官能团，-OH(成苷)、-OCH3、C=O等；C3、C4多为双键，C4-CH3易为氧化物；C8-CH3易为氧化物；环戊烷呈不同氧化态，如双键、环氧、环酮等。分类：环烯醚萜及其苷,裂环环烯醚萜及其苷OO-glc123456789二、含环烯醚萜类制剂的分析溶解性：易溶于水和甲醇，成苷后苷键易被酸水解断裂显色反应：环烯醚萜类遇氨基酸并在加热下显蓝色---初步鉴定（二）含栀子中药制剂的分析栀子：茜草科，苦寒清降、凉血解毒化学成分---栀子苷（geniposide）、栀子苷酸（geniposidicacid）等栀子苷是致泻有效成分，常作为评价制剂质量的指标性成分1.定性鉴别：薄层色谱法例：清胃黄连丸：栀子、黄芩、黄柏、知母等组成对照溶液制备:栀子苷、黄芩苷对照品----加甲醇（二）含栀子中药制剂的分析样品溶液制备：样品研细----加甲醇----超声震荡提取30min----过滤、浓缩---加甲醇----供试液薄层鉴别：吸取对照液、供试液----硅胶G板点样---正丁醇-冰醋酸-水（7：2：1）展开----吹干5%香草醛硫酸-----栀子2%三氯化铁乙醇----黄芩2.含量测定：色谱、紫外分光光度法、高效液相色谱法（三）含龙胆中药制剂的分析龙胆：主要有效成分为龙胆苦苷（gentiopicroside）、当药苦苷和当药苷等水溶性苷，均为裂环烯醚萜类，性质不稳定，对光、热、酸、空气较为敏感。提取过程中如遇氨会转化为含N的化合物1.含龙胆中药制剂的鉴别：薄层色谱2.含龙胆中药制剂的含量测定：根据标准品的种类，结合剂型，进行样品的预处理，设定方法：β－环糊精单分子胶束荧光法、高效液相色谱（一）概述香豆素：一类邻羟基桂皮酸的内酯。生理活性：抗菌消炎、扩张冠脉、抗凝血。分布：多科植物—白芷素、蛇床子素、秦皮中七叶内酯和七叶苷等三、含香豆素类制剂的分析结构类型：邻羟基桂皮酸的内酯，由苯环和吡喃酮环组成。分类：简单香豆素类、呋喃香豆素类、吡喃香豆素类、其它香豆素类溶解性：苷元分子量小的随水蒸气蒸发，可升华；易溶于乙醇、甲醇、氯仿和乙醚，可溶于热水，难溶于冷水。苷能溶于水、乙醇、甲醇，难溶于氯仿和乙醚等三、含香豆素类制剂的分析三、含香豆素类制剂的分析显色反应：1、异羟肟酸铁反应：红色2、与酚羟基反应：FeCl3试剂、Gibbs试剂、重氮化试剂光谱特征：uv300nm，多有蓝色荧光（二）定性分析1、化学反应法例：青叶胆片的鉴别2、荧光法例：白芷的鉴别3、TLC法例：七宝美髯颗粒的鉴别（三）定量分析1、分光光度法利用颜色反应、如重氮化试剂本身有紫外吸收例：消痔液的补骨脂素2、TLCS法例：千金止带丸中补骨脂素、异补骨脂素的汗测3、HPLC法例：辛芩冲剂的欧前胡素4、GC法例：乌蛇止痒丸的蛇床子素四、含单萜及二萜类制剂的分析（一）概述单萜：2个异戊二烯单位的萜烯及其衍生物二萜：4个分子异戊二烯单位聚合而成。生源途径：二萜以牻牛儿醇基牻牛儿醇为前体；分布：单萜广泛存在于高等植物中二萜多以树脂、内酯或苷等存在于多科植物中；含氧衍生物具有多方面的显著生理活性，如：芫花、雷公藤、穿心莲、冬凌草含二萜内酯类化合物。分类：单萜种类较多二萜分为链状二萜、单环二萜、双环二萜、三环二萜、四环二萜四、含单萜及二萜类制剂的分析单萜类：芍药苷：芍药的主要活性成分，为单萜的衍生物，水溶性大，具易吸湿性，不稳定制剂分析：例：脏连丸的分析、化毒丸的分析、复方白芍片的含量测定含单萜及二萜类制剂的分析五、含多糖类制剂的分析（一）概述多糖类：单糖等通过苷键连接而成，如常见的菊糖、淀粉、树胶、粘液质等。生理活性：抗肿瘤、提高免疫、降糖等。分布：多科植物—灵芝多糖、茯苓多糖、南瓜多糖、大黄多糖、当归多糖、党参多糖等结构类型：单糖等通过苷键连接而成溶解性：可溶于水、低浓度乙醇、甲醇，难溶于氯仿和乙醚等。五、含多糖类制剂的分析五、含多糖类制剂的分析显色反应：多采用酸水解后进行：醛酮糖可用银镜反应等淀粉遇碘显兰色（二）定性分析1、TLC法多采用酸水解后进行：主要有硅胶、纤维素、硅藻土、氧化铝色谱等。例：菟丝子多糖的鉴别2、纸色谱法多采用酸水解后进行例：南瓜多糖的鉴别（二）定性分析3、电泳法滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳4、HPLC法示差折光检测器5、GC-MS法（三）定量分析1、总多糖（1）3，5-二硝基水杨酸（DNS）比色法：试用：还原糖试剂：3，5-二硝基水杨酸颜色：棕红色（2）苯酚-硫酸比色法：试用：游离糖、多糖中己糖、糖醛酸试剂：苯酚、硫酸颜色：棕黄色（三）定量分析（3）蒽酮-硫酸比色法：试用：糖类试剂：蒽酮、硫酸颜色：蓝绿色2、单体多糖高效凝胶液相色谱法应用实例：黄芪多糖人参多糖五、含多糖类制剂的分析