血清葡萄糖的测定

（GOD-POD法）实验九血清葡萄糖浓度的测定CONTENTS相关临床知识12实验目的3实验原理4实验器材与试剂5实验操作1.相关临床知识血液中的葡萄糖称为血糖。1.相关临床知识空腹血糖3.9-6.1mmol/L正常餐后两小时3.9-7.8mmol/L糖尿病空腹餐后两小时7.0mmol/L≦11.1mmol/L≦1.相关临床知识胰岛B细胞靶细胞胰岛素I型糖尿病（T1DM）别名：青年发病型糖尿病或胰岛素依赖性糖尿病。原因：胰腺产生胰岛素的细胞已经彻底损坏。易发病人群：年龄轻，大多30岁治疗：依赖胰岛素治疗II型糖尿病（T2DM）别名：非胰岛素依赖型糖尿病原因：自身能产生胰岛素，但细胞无法对其做出反应。易发病人群：中老年人，肥胖者治疗：需要胰岛素单独或与口服药联合应用的治疗有些患者血糖含量并不稳定，有什么办法进一步更准确诊断？1.相关临床知识口服葡萄糖耐量试验（OGTT）概念：是一种葡萄糖负荷试验，用以了解胰岛β细胞功能和机体对血糖的调节能力，是诊断糖尿病的确诊试验原理：正常人进食糖类后血糖会暂时升高，0.5~1小时后升到最高峰，但不超过8.9mmol/L，2小时后回到空腹水平。1.相关临床知识OGTT操作步骤1）.试验前3天内，每日碳水化合物摄入量不少于150g。2）.空腹取血后，5分钟内口服溶于250~300ml水内的75g无水葡萄糖粉的糖水，妊娠妇女用量为100g，儿童按1.75g/kg体重给予，不超过75g.3）.服糖后半小时、1小时、2小时、3小时分别在前臂采血测血糖,采血同时，每隔1小时取尿液作尿糖试验。试验过程中，受试者不喝茶及咖啡，不吸烟，不做剧烈运动4）.OGTT2小时后血糖≥11.1mmol／L可以确诊糖尿病OGTT诊断1.当静脉空腹血糖＜6.1mmol／L，OGTT2小时血糖＜7.8mmol／L，说明人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力正常。2.当静脉空腹血糖≥7.0mmol／L或OGTT2小时血糖≥11.1mmol／L，说明人体处理进食后葡萄糖的能力明显降低，可以确诊糖尿病。3.当静脉空腹血糖＜7.0mmol／L，并且OGTT2小时血糖介于7.8～11.1mmol／L之间，说明人体对葡萄糖的调节能力轻度下降，可以诊断糖耐量减低。4.当静脉空腹血糖介于6.1～7.0mmol／L之间，且OGTT2小时血糖≤7.8mmol／L，说明人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力尚好，但对空腹血糖调节能力轻度减退，可以诊断空腹血糖受损。1.相关临床知识2.实验目的1.掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理2.掌握血糖变化的临床意义3.实验原理血糖测定的方法有哪些？（一）无机化学法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的还原性（二）有机化学法：邻甲笨胺法，联笨胺法等（三）酶法Cu2+OH-GluCu+磷钼酸显色1.己糖激酶法（HK）2.葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）邻甲笨胺+Glu葡萄糖基胺蓝绿色化合物分子重排脱水希夫氏碱缩合特异性差3.实验原理葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸酶，同时释放过氧化氢。过氧化氢酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。葡萄糖+O2+H2O葡萄糖酸+2H2O2GOD2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚红色醌类化合物POD4.实验器材和试剂(一）器材5ml移液管，微量可调式移液管，721E分光计，37℃恒温水浴（二）试剂1.苯甲酸钠溶液（12mmol/L）2.酶酚混合试剂酶试剂+酚溶液1:13.葡萄糖标准工作液（5mmol/L）防止氧化，葡萄糖为单糖,含醛基,易氧化成羧基5.实验操作取试管3支，按表操作试剂/ml空白管（B）标准管（S）测定管（T）血清--0.020葡萄糖标准液-0.020-蒸馏水0.020--酶酚混合液3.003.003.00混匀，置37℃水浴中，保暖25min,在波长510nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管的吸光度。计算公式血清葡萄糖浓度=A测定A标准×5mmol/L参考值空腹血清葡萄糖浓度：3.89~6.11mmol/L临床意义1.生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。2.病理性高血糖①糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。②内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进，引起各自对抗胰岛素的激素分泌过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖现已归入特异性糖尿病中。①颅内压增高：可刺激血糖中枢，如脑膜炎，颅外伤，颅内出血等，引起血糖增高。②脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。3.生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动时。4.病理性低血糖特发性功能性低血糖最多见，其次是药源性，肝源性和胰岛素瘤等。注意事项1.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。这是因为尿液中的尿酸等干扰性物质浓度过高，可干扰过氧化氢酶反应，而造成假性偏低。2.对于血液样品需及时分离血细胞。因红细胞的酵解将导致测定结果偏低。建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。3.严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。THANKS