鸡场抗体水平检测与解读

鸡场抗体检测与解读PVM动保中心--出栏肉鸡抗体检测周报(第47周11月16日--11月22日)公司序号客户日龄项目HIELISA免疫计划-4-5H9NDIBVIBDREO天津1陈久长41dsMAX301104699455345561日龄公司首免MIX100238811688789日龄新支妥瑞普点眼GMT1.81.01.04.31579.17672296.21919.2557CV%2702124571.4165454151.5496562李家来42dsMAX20192291256728221日公司首免MIX000416414322377日龄新支妥瑞普点眼GMT1.41.01.05.91070.51851.21152.421日龄新威灵梅里亚饮水CV%1000173275322523刘广利43dsMAX30671657569827461日龄公司首免MIX10122331404729日龄新支妥瑞普点眼GMT1.31.01.73.6512.13131.6532.0CV%58091426937101抗体检测周报血凝（HA）和血凝(HI)抑制试验-以新城疫为例血凝试验（HA），目的：滴定病毒的血凝效价；原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。病毒颗粒红细胞4血凝效价测定步骤1234567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×红细胞对照生理盐水505050505050505050505050抗原5050505050505050505050弃50红细胞505050505050505050505050结果＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水2.在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟5.结果判定结果判定标准：1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集；2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集；3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集；4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集；5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。以100%凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝集单位。上表看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:32，则l:32为1个血凝单位，1:16、l:8分别为2、4个血凝单位，或将32/4=8，即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位。根据判定结果，吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释，即为4个血凝单位的标准抗原，以备凝血抑制试验使用。++++++++++-血凝试验（HA）结果判定血凝抑制试验（HI），目的，确定抗体水平；原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。Iamlate！抗体抗原71、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水；2、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50ul；3、第1－12孔内加入4个单位血凝抗原50ul（第12孔为病毒对照）；4、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul；5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟6、结果判定血凝抑制试验步骤1234567891011122×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×病毒对照生理盐水505050505050505050505050血清5050505050505050505050弃504单位抗原505050505050505050505050红细胞505050505050505050505050结果－－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－血凝抑制试验（HI）结果判定结果判定标准同血凝试验（HA）。将反应板倾斜成45度角，沉于管底的细细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价，用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数(10g2)表示。如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：4或HI效价为2(10g2)。稀释倍数2×4×8×16×32×64×128×256×512×1024×2048×血清对照结果——＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋—(1)一般认为鸡的免疫临界水平为1:8(成年)或1:16(雏鸡)，随地区不同而稍有差异。(2)鸡血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫免疫的时间，HI抗体效价在1:16以下，须进行新城疫疫苗接疫种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提高。(3)鸡群的HI抗体水平（血凝抑制滴度）是以抽检样品的HI抗体效价(log2)的几何平均值表示的。如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价(log2)为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品，它们的平均值为：（8×3＋7×5＋6×2）/（3＋5＋2）＝7.1;平均水平在4(10g2)以上，说明该鸡群为免疫鸡群。若在检样中HI抗体效价的最高值与最低值相差太大时，则不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品数在全部样品中所占的百分比决定免疫与否。(4)大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0.1％一0.5％，小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为2.0％。(5)鸡群接种新城疫疫苗后，经2～3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功；若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。（6）若有10%以上的鸡群出现11(log2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒感染。若监测鸡群的免疫水平，用血凝抑制滴度在4(log2)的鸡群保护率为50%左右；在4(log2)以上保护率达90-100%；在4(log2)以下的非免疫鸡群保护率约9%，免疫过的鸡群为43%。公司序号客户日龄项目HI-4-5H9ND天津1陈久长41dsMAX30110MIX1002GMT1.81.01.04.3CV%270212452李家来42dsMAX2019MIX0004GMT1.41.01.05.9CV%1000173273刘广利43dsMAX3067MIX1012GMT1.31.01.73.6CV%5809142如上表所示：MAX为多个样品中的HI抗体滴度最大值；MIX为HI抗体滴度最小值；GMT为多个样品的HI几何平均滴度；CV%为变异系数或离散度。酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（ELISA）,其基本过程是将抗原或抗体吸附于同相载体，在载体上进行免疫酶反应，底物显色后用肉眼或分光光度计判定结果。整个反应都必须在抗原结合抗体的最适条件下进行。每次试验时都需设阳性和阴性对照。ELISA的核心是利用抗原抗体的特异性吸附，在固相载体上一层层的叠加，可是是两层、三层甚至多层，犹如搭积木一样。双抗体夹心法ELISA结果表示1、用阳性“+”与阴性“-”表示若样本的OD值超过规定吸收值判为阳性，否则为阴性。（规定吸收值=一组阴性样本的吸收值之均值+2倍或3倍SD,SD为标准差）。2、以P/N比值表示样本的OD值与一组阴性样本OD值均值之比即为P/N比值，若样本的P/N值≥1.5、2或3倍，即判为阳性。3、以终点滴度（即ELISA效价，简称ET）表示将样本倍比稀释，测定各稀释度的OD值，高于规定吸收值（或P/N≥1.5、2或3倍）的最大稀释度即仍出现阳性反应的最大稀释度，即为样本的ELISA滴度或效价。可以做出OD值与效价之间的关系，样本只需做一个稀释度即可推算出其效价。4、定量测定事先用标准抗原制备一条OD值与浓度的相关标准曲线；测出样本的OD值，根据曲线查出抗原浓度。序号检测项目检测结果分析备注1ND（新城疫）1、蛋/种鸡群：ND抗体在正常检测离散范围应为6log2—12log2，离散范围越小越能说明鸡群免疫应答反应好，如抗体滴度＞13log2，且离散范围大如：6log2—15log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。2、肉鸡群：ND抗体正常检测离散范围在0log2-10log2之间，如抗体滴度≥11log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。提示：两者离散范围大小是评价鸡群免疫应答反应效果和野毒感染的评价的重要指标。发病前后7—14天抗体滴度升高2log2—4log2基本可以确定。2H9（禽流感）1、蛋/种鸡群H9抗体正常的检测离散范围应为4log2—10log2，鸡群持续接种疫苗后，鸡群抗体离散范围出现4log2—12og2也属于正常，离散范围越小越能说明鸡群免疫应答反应好，如抗体体滴度＞13log2，且离散范围大如：6log2—15log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。2、肉鸡群：同ND相似。3H5（禽流感）1、蛋/种鸡群H5抗体正常检测离散范围应为4log2—10log2，鸡群感染后，抗体异常上升，且离散范围大。2、肉鸡群：因该病感染和死亡涉及非常快，且病变典型，抗体对比意思不大。序号检测项目检测结果分析备注4IB（传支）1、蛋/种鸡群：IB免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗体较免前抗体有所上升（500—2000），并且变异系数缩小，说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。从大量的检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。鸡群在产蛋期抗体滴度大于10000的鸡群在我们长时间检测中也有发现，鸡群无疾病表现，目前不能说明什么，有待进一步的认识。2、肉鸡群：肉鸡IB抗体在30日龄-40日龄之间，在3000以下为正常范围，大于4000且变异系数＞100%，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。提示：三者均可以给商品肉鸡提供较高的母源抗体，保护雏鸡前期不受外界毒影响。5IBD（法氏囊）1、蛋/种鸡群：IBD免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗体较免前抗体有所上升（500—3000），并且变异系数缩小，说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。从大量检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。鸡群在产蛋期抗体滴度大于15000的鸡群在我们长时间检测中也有发现，抗体诊断几乎用不着，因典型症状较为明显。2、肉鸡群：以琼脂扩散试验(AGP)方法检测免后三周抗体≥50%为免疫合格。6REO（病关）REO免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗体较免前抗体均有大幅度上升（5000—15000），并且变异系数缩小，说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。从大量的检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。