食品中乳酸菌的检测

食品中乳酸菌的检测1.1乳酸菌lacticacidbacteria•一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。本标准中乳酸菌主要为•乳杆菌属（Lactobacillus）、•双歧杆菌属（Bifidobacterium）•链球菌属（Streptococcus）。•5培养基和试剂•5.1MRS（ManRogosaSharpe）培养基及莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS培养基：见附录A中A.1。•5.2MC培养基（ModifiedChalmers培养基）：见附录A中A.2。•5.30.5%蔗糖发酵管：见附录A中A.3。•5.40.5%纤维二糖发酵管：见附录A中A.3。•5.50.5%麦芽糖发酵管：见附录A中A.3。•5.60.5%甘露醇发酵管：见附录A中A.3。•5.70.5%水杨苷发酵管：见附录A中A.3。•5.80.5%山梨醇发酵管：见附录A中A.3。•5.90.5%乳糖发酵管：见附录A中A.3。•5.10七叶苷发酵管：见附录A中A.4。•5.11革兰氏染色液：见附录A中A.5。•5.12莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）：化学纯。实验器具吸管8×6支(1mL)８×１支（10mL）移液样平皿8×20个MRS培养基8×1瓶内含150mL左右改良MRS培养基8×1瓶内含150mL左右MC培养基8×1瓶内含150mL左右试管8×20生理盐水8×1瓶内含225mL4×1瓶内含200mL（2组共用）保加利亚乳杆菌阳性对照（全班）实验原理相关标准注意事项操作步骤试验流程7操作步骤•7.1样品制备•7.1.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。•7.1.2冷冻样品可先使其在2℃～5℃条件下解冻，时间不超过18h，也可在温度不超过45℃的条件解冻，时间不超过15min.•7.1.3固体和半固体食品：以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液；或置于225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1:10的样品匀液。•7.1.4液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1:10的样品匀液。。实验原理相关标准注意事项操作步骤试验流程稀释选择稀释度倒平板涂布观察计数乳酸菌(稀释度X2)双歧杆菌(稀释度X2)嗜热链球菌(稀释度X2)乳酸菌总数双歧杆菌数嗜热链球菌数乳杆菌数10-410-510-6培养基阳性对照组和空白试验实验原理相关标准注意事项操作步骤试验流程GB16321-2003项目指标未杀菌乳酸菌饮料杀菌乳酸菌饮料乳酸菌、(cfu/ml)≥1X106有活菌检出--7.2.3乳酸菌计数•7.2.3.1乳酸菌总数•根据待检样品活菌总数的估计，选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板，使用L形棒进行表面涂布。36±1℃℃，厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。7.2.3.2双歧杆菌计数•根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL样品匀液于莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS琼脂平板，使用灭菌L形棒进行表面涂布，每个稀释度作两个平板。36±1℃℃，厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。7.2.3.3嗜热链球菌计数•根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MC琼脂平板，使用L形棒进行表面涂布。36±1℃℃，需氧培养48h±2h后计数。嗜热链球菌在MC琼脂平板上的菌落特征为：菌落中等偏小，边缘整齐光滑的红色菌落，直径2mm±1mm，菌落背面为粉红色。从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。7.2.3.4乳杆菌计数•7.2.3.1项乳酸菌总数结果减去7.2.3.2项双歧杆菌与7.2.3.3项嗜热链球菌计数结果之和即得乳杆菌计数。实验原理相关标准注意事项操作步骤试验流程•注意倒培养基时要适量，避免因培养基不够影响实验。•稀释转移好后要震荡均匀。•从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。•注意1mL移液管的使用,不要交叉污染。菌落计数、结果表述和报告•参见项目四：菌落总数的测定第一法。•参见GB478935-2010。••9乳酸菌的鉴定（可选做）•9.1纯培养•挑取3个或以上单个菌落，嗜热链球菌接种于MC琼脂平板，乳杆菌属接种于MRS琼脂平板，置•36℃±1℃厌氧培养48h。9.2鉴定•9.2.1双歧杆菌的鉴定按GB/T4789.34的规定操作。•9.2.2涂片镜检：乳杆菌属菌体形态多样，呈长杆状、弯曲杆状或短杆状。无芽胞，革兰氏染色阳性。•嗜热链球菌菌体呈球形或球杆状，直径为0.5μm～2.0μm，成对或成链排列，无芽胞，革兰氏染色阳性。•9.2.3乳酸菌菌种主要生化反应见表1和表2。••THEEND