紫外分光光度法

紫外可见分光光度法UV-visiblespectrophotometry小组成员：王晓岚杨艳秋2012年12月21日•一、紫外可见分光光度法简介•二、紫外可见分光光度计•三、紫外可见分光光度计类型•四、紫外可见分光光法应用目录一、紫外可见分光光度法简介•1、检测原理紫外可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，可用于定性分析，无机与有机物质的定量分析。2.紫外可见分光光度法特点灵敏度高，可用于测定试样中1%～0.001%的微量组分，甚至可测定低至10-6～10-7的痕量成分；准确度较高，测定的相对误差为2%～5%，采用精密的分光光度计测量，相对误差可减少到1%～2%；分析速度快，操作简便；价格低廉，应用广泛。二、紫外可见分光光度计一、仪器的基本部件光源——单色器——吸收池——检测器——显示器按波长范围划分：可见分光光度计（400-780nm）紫外可见分光光度计(200-1000nm)三、紫外可见分光光度计类型按光路划分：单光束分光光度计双光束分光光度计双波长分光光度计单波长双光束分光光度计单色器分光后，经光束分裂器分解为强度相等的两束光，一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动消除光源强度变化所引起的误差。四、紫外可见分光光度法应用（一）定量分析1.定量分析理论基础-朗伯比尔定律公式：A=lgI0/I=bcI0，I分别为入射光和通过样品后的透射光强度，A为吸光度，b为光程，c为溶液浓度，为比例常数或吸光系数的物理意义在数值上等于1mol/L的吸光物质在1cm光程中的吸光度，=A/CL，与入射光波长、溶液的性质及温度有关（1）——吸光物质在特定波长和溶剂中的一个特征常数，定性的主要依据（2）值愈大，方法的灵敏度愈高104强吸收=103~104较强吸收=102~103中吸收102弱吸收2、定量分析方法•绝对方法•标准方法•比吸收系数法•标准曲线法•解联立方程法（不常用）•最小二乘法•示差分光光度法（不常用）3.定量分析应用举例生命科学领域•蛋白质的定量检测：280nm处有最大吸收•核酸的定量检测：260nm处有最大吸收•氨基酸的定量检测：230nm处有最大吸收•糖的定量检测：218nm处有最大吸收（二）定性分析(1）比较吸收光谱法根据化合物吸收光谱的形状、吸收峰的数目、强度、位置进行定性分析待测样品相同条件样品谱标准物质标准谱(2)纯度检查如果一化合物在紫外区没有吸收峰，而其杂质有较强吸收，就可方便的检出该化合物中的痕量杂质。例如要鉴定甲醇和乙醇中的杂质苯，可利用苯在254nm处的B吸收带，而甲醇和乙醇在此波长范围内几乎没有吸收。又如四氯化碳中有无二硫化碳杂质，只要观察在318nm处有无二硫化碳的吸收峰即可。•用紫外可见吸收光谱鉴定未知物的结构较困难，因谱图简单，吸收峰个数少，主要表现化合物发色团和助色团的特征。•利用紫外可见吸收光谱可确定有机化合物中不饱和基团，还可区分化合物的构型、构象、同分异构体（三）结构分析Theend！Thankyouforattention！