HIV实验室检测

HIV实验室检测实习生：叶贝2017/4/28HIV病原学及流行病学特点HIV实验室检测方法罗氏第四代HIV检测试剂特点目录HIV病原学•HIV人类免疫缺陷病毒，由包膜及核心组成，为RNA病毒•HIV核心部分包括两条单股RNA链，核心结构蛋白及复制所需酶类（蛋白酶、逆转录酶、整合酶）•HIV病毒逆转录酶无校对功能，故病毒变异性强，导致检测结果假阴性HIV病原学•病毒识别易感细胞膜表面受体，在逆转录酶作用下由RNA逆转录为DNA•经DNA转录及翻译后形成蛋白外壳，将病毒RNA包裹其中，生成新的HIV•主要侵入T淋巴细胞及神经细胞，导致细胞免疫功能缺陷，增加机会性感染HIV流行病学•全国呈低流行态势，部分地区疫情严重•HIV主要分为两种HIV-1和HIV-2两型；•HIV-1类为全球主要流行类型，分为M、O、N三个亚型组HIV传播途径1、传染源：病人及无症状携带者•血液、精子、子宫和阴道分泌物、唾液、眼泪和乳汁等传播2、传播途径•性传播：同行、异性、双性性接触•母婴传播：经胎盘、分娩及哺乳时传播•血液制品传播：共用针具静脉注射毒品，介入性医疗操作，纹身，耳洞等HIV感染自然史急性期艾滋病期无症状期•初次感染HIV2-4周，传染性最强•主要以发热、关节痛、淋巴结肿大为特征•可检出HIV及p24抗原，CD4+/CD8+倒置•可持续6-8年，HIV在感染者体内不断复制，具有传染性•可检测HIV及抗体，CD4+T淋巴续保逐渐下降•HIV感染最终阶段，HIV血浆病毒载量明显升高，CD4+T淋巴细胞200个/ul•主要表现为各种机会性感染及肿瘤血清学检测备注HIV抗体筛查试验：ELISA,CIA,ECLIA确证试验：WB,RIBA仅测抗体HIVp24抗原早期灵敏度更高HIV抗原+抗体HIVAg/AbcombiPT:ELISA,ECLIA,CIA核酸检测备注HIVRNA定性辅助确证试验Taqman荧光实时PCR试剂HIVRNA定量辅助确证试验，监测治疗效果与疾病进展靶核酸扩增试剂淋巴细胞检测备注CD4+和CD8+HIV感染分期，抗病毒治疗指针CD4+/CD8+比值下降HIV实验室指标初筛试验+确证试验HIV检测流程•全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程初筛试验筛查复检HIV检测流程•全国艾滋病检测技术规范-2015年修订版检测流程确证试验确证•仅能检测HIV-1，不能检测HIV-2和HIVAg，灵敏度有限，窗口期长，易错过早期感染样本•试剂成本高，操作繁琐，结果判定主观HIV检测流程•初始反应必须使用抗原和抗体联合检测的第四代免疫学方法，这类方法可以同时检测HIV-1抗体、HIV-2抗体和HIVp24抗原，检测出HIV-1、HIV-2感染和急性HIV-1感染，初始检测无反应性则无需进行进一步检测•初始反应阳性标本需经过FDA批准的抗体鉴别试剂进行HIV-1和HIV-2抗体鉴别试验，结果以HIV-1抗体阳性、HIV-2抗体阳性、HIV抗体阳性或无法鉴别来解释•初始检测有反应，抗体鉴别检测无反应性或不明确标本须经HIV-1核酸检测，HIV-1NAT有反应性而抗体鉴别无反应性为急性HIV-1感染；HIV-1NAT有反应性而抗体鉴别试验不明确为HIV-1感染；HIV-1NAT无反应性而抗体鉴别不明确为假阳性结果联合试验鉴别试验核酸试验•美国CDC推荐HIV检测流程2014修订版HIV检测•HIV感染后首先检测到HIVRNA•第四代HIV检测试剂检测到HIVp24抗原，为抗原抗体联合检测•第三代及其以前的试剂均为只检测HIV抗体HIV-1/2/O抗体HIV-1/2/O抗体+HIVp24抗原3rd代抗体检测核酸检测方法4th代抗原抗体检测周年243567891012435601789p24抗原检测p24抗原检测从初始感染后的时间无症状期急性期第一个血清转换窗口期核酸检测方法第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys®HIVcombiPT罗氏HIV试剂艾滋病期缩短检测窗口期，早期诊断2nd代抗体检测SeroconversionpanelElecsysHIVcombiPTElecsysHIVcombiADVIACentaurHIVAg/AbcomboARCHITECTHIVAg/AbcomboVIRONOSTIKA®HIVUniv-FormIIplusOZhuhaiLivzonanti-HIVSerodia®HIV1/2PRB9300440888PRB9588NANA8NANANANabi07590000NA48Nabi143600NA0999Nabi40090NA003NANANabi900366NA610610Nabi251650000NA44第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys®HIVcombiPT罗氏HIV试剂缩短检测窗口期，早期诊断•ElecsysHIVCombiPT阳转时间较PCR方法平均晚2天，早于或等于其它方法•与三种第三代检测方法相比，ElecsysCombiPT是1.2days，优于ElecsysHIVcombi(2.0days),ZhuhaiLivzonanti-HIV(6.2days)andSerodia®HIV1/2(7.8days).•与ADVIACentaur相比,theElecsysHIVcombiPT’s的检出时间是0days，ADVIACentarur’s(1.0days).•与VIRONOSTIKA®HIVUniv-FormIIplusO相比，ElecsysHIVcombiPT’s是1.5days，VIRONOSTIKA®HIVUniv-FormIIplusO’s(7.5days).罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys®HIVcombiPT缩短检测窗口期，早期诊断5.478days(Roche,dataonfile)罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys®HIVcombiPT=诊断相关蛋白p24gp120gp41/gp36p17（基质蛋白）RT(逆转录酶)RNAP24抗原是HIV病毒的核心蛋白HIV-Ag的检测HIV-Ab的检测膜蛋白罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys®HIVcombiPT包含检测物功能抗原检测p24module1p24Ag早期检测HIV感染及终末期感染p24module2p24Ag检测O亚型以及HIV-2抗体检测gp41module1HIV-1IgMandIgG确保HIV-1的检测高灵敏gp36module1HIV-2IgMandIgG确保HIV-2的检测高灵敏HIV-1RTHIV-1IgG确保检测所有HIV亚型的安全性HIV-2RTHIV-2IgG检测所有HIV亚型的安全性gp41module2HIV-1subtypeO确保检测O亚型的灵敏度gp36module2HIV-2IgG确保检测HIV-2的备份缓冲液添加抗干扰物质避免干扰可识别所有亚型罗氏HIV试剂可识别所有亚型第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys®HIVcombiPT6198472罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys®HIVcombiPT9min9min9min预处理裂解出p24抗原Ag-Ab复合物磁珠加入共27min孵育,测量池检测夹心法形成免疫复合物罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys®HIVcombiPT早期感染血清转换期的检测不同时期HIV感染病人的检测高灵敏度不同亚型的检测Elecsys®HIVcombiPTARCHITECT®HIVAg/AbcomboADVIACentaur®HIVAg/AbcomboElecsys®HIVcombiZhuhaiLizhuanti-HIVEIAVIRONOSTIKA®HIVUniv-FormIIplusOTotalnumber4,4652,7511,039675675703IR(≥1s/co)51505102Confirmedpositive45440002Numberoffalsepositives*665100Specificity(IR,≥1s/co)99.86%99.78%99.52%99.85%100.00%100.00%95%confidencelimit(IR,≥1s/co)99.71–99.9599.52–99.9298.88–99.8499.18–100.0099.45–100.0099.48–100.00罗氏HIV试剂第四代HIV抗原抗体联合检测法Elecsys®HIVcombiPT高特异性罗氏HIV试剂排除类风湿因子、自身抗体、单克隆丙种球蛋白、EB病毒抗体、巨细胞病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体、流感疫苗等非特异性干扰、抗干扰能力强高特异性Case分享RENXXMen29YDayssincefirstbleedHIVCombiPT(COI)HIVCombi(COI)ELISA(S/CO)HIVRNA（高精分析）WB0102011/08/01/4.41/4.05(POS)0.04(NEG)/P24(不确定)021342011/12/12/4.49(POS)0.01(NEG)HIVRNA(NEG)P24(不确定)•罗氏HIVCombi试剂2次均出现阳性结果，P24抗原也均出现条带，但HIV-RNA分析病毒为阴性，最终报告为阴性，该患者实为淋巴瘤，分析时注意干扰因素•淋巴瘤患者、孕妇、肿瘤病人、透析患者4种病人都可能出现HIV初筛阳性，需特别对待•华西案例分析CASE1Case分享•华西案例分析CASE2WUXXMen30YDayssincefirstbleedHIVCombiPT(COI)HIVCombi(COI)ELISA(S/CO)HIVRNA（高精分析）WB0102012/02/1051.15(POS)2.59(POS)0.04(NEG)/P24(不确定)021052012/05/25302.7(POS)/11.09(POS)1.8X105(POS)p24,p31，p51,p66,gp120，gp160•该患者第1次检测罗氏HIVCombiPT和HIVCombi均为阳性、ELISA为阴性、HIV-Ag检测阳性，患者不同意做确证实验，在105天后第2次采血，罗氏HIVCombiPT和国产ELISA法检出阳性，WB分析检出较多抗原亚类，实验室作HIV-RNA高精分析证实病毒阳性，最终报告为阳性总结HIV感染自然史有急性期、无症状期、艾滋病期三个时期HIV检测需初筛试验和确证试验共同确认HIVRNA检测为最早识别HIV感染及辅助确诊的重要手段罗氏第四代HIV检测试剂缩短检测窗口期，可识别所有亚型Doingnowwhatpatientsneednext