API细菌鉴定系统

API微生物鉴定系统——全球金标准细菌鉴定的重要性-疾病的评估-找出食物变质的原因，从而制定预防的步骤-确保用药治疗洽当-环境控制-流行病学的基础常规鉴定所遇的困难-分类学复杂及进化-涉及很多生化项目-工业微生物容易出现变异-结果处理及计算麻烦所引用的分类学方法国际认可-InternationalJournalofSystematicBacteriology资料库＝整个系统的心脏API系统API系统•美国FDA的细菌鉴定标准•欧洲药典的细菌鉴定标准•国标-标准化，简易化-在制造过程中，进行质控-FDA标准-用户可用ATCC菌种进行质控-系统化-操作简易-快速报告-30多年的经验，拥有菌种资料＞25000，鉴定系统的发源生化测试＞750-＞1500多篇使用文献API的优点API鉴定原理生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析，并将结果转化成软件可以识别的数据，进行聚类分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终对未知菌进行鉴定的一种技术。API微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础,借助微生物信息编码技术,为微生物检验提供了简易、方便、快捷、科学的鉴定程序。微生物鉴定完整的鉴定谱球菌杆菌接触酶革兰氏氧化酶革兰氏杆菌球菌庞大资料库15种试条600种细菌可被鉴定研究用试条：乳酸杆菌，芽胞菌，弯曲菌API鉴定范围API试剂类别•API20E/RapiD20E革兰氏阴性杆菌鉴定•API20NE非发酵菌鉴定•APISTAPH葡萄球菌及微球菌•APISTREP链球菌鉴定•API20CAUX酵母菌•API20A厌氧菌•APILISTERIA李斯特菌•APICAMPY弯曲菌属•APICORYNE棒状杆菌•APICH芽胞杆菌/乳酸杆菌API系统-构成:试条由特別选择的生化反应小管API试条有多种类各有相应的数据库所有生化结果以同时间一并阅读API套件API试剂盒及其配套试剂培养盒保持潮湿环境石腊油(容量:125ml)覆盖在指定小孔上悬浮液(容量:5ml)用於调菌液附加试条加进指定的生化孔内API试条每个小孔载有风乾的底物PSIpettes接种管挑菌落，混匀及接种安培架操作步骤1(API20E)分离单个菌落挑单个可疑菌落尽量避免使用高度选择性培养基调制菌液悬浮液(容量:5ml)操作步骤2(API20E)将菌液接种到小管或小管及小杯(CIT,VP和GEL)将试条放进培养盒内将5ml无菌水放进培养盒里利用石腊油覆盖指定的生化孔(有划线的孔)ADHODCH2SURE把培养盖盖上操作步骤3(API20E)把试条放进孵育箱内，利用指定温度及时间API20E:35-37oC，18-24小时按操作说明书规定，将附加试剂加进适当小孔内api20E试剂18-24小时後API试剂条24小时出结果阅读结果利用编码手册或APILABPLUS软件进出分析根据说明书上，或彩图的指示，记录结果於报告单上。全Windows操作界面，多种语言。API结果跟据T值及%Id的组合，作出评语：(i)极好的鉴定结果%Id99.9及T0.75(ii)很好的鉴定结果%Id99.0及T0.50(iii)好的鉴定结果%Id90.0及T0.25(iv)可以接受的鉴定结果%Id80.0及T0(v)可疑的生化谱不断更新的数据库：-分类学的进化-新的菌种发现-生化反应的演进-鉴定菌种需要的改变API与日俱进定向试验-在细菌学里最普遍的染色方法革兰氏染色液步骤G()G()-染色前，所有细胞是透明的-结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合-乙醇从G()菌体洗脱结晶紫-用番红液复染，革兰氏阴性菌呈粉红色，革兰氏阳性菌呈兰紫色革兰氏染色原理:检查细菌细胞壁的渗透性单层厚钛聚糖细胞壁不紧密外壁层(透乙醇)+薄内壁层钛聚糖革兰氏阳性革兰氏阴性革兰氏染色液2(ColorGram2)-特性稳定化的碘液PVP(聚氯乙烯吡咯烷酮)可以防止因碘挥发而变质，同时也增强了媒染效果。更容易分别G()及G(-)菌高质量的结晶紫和番红，无沉淀。接触酶试验接触酶试验用于分辨葡萄球菌及链球菌葡萄球菌革兰氏阳性球菌链球菌接触酶接触酶-+接触酶H2O2H2O+O2接触酶试验传统方法:=接触酶(+)+=接触酶(+)+原理:试管法玻片法H2O2O2菌落接触酶显色剂玻片法试管法IDColorCatalase接触酶试剂容许於平板(包括血平板)上作直接检测组成:-增稠剂:高粘度集中所产生的气泡,防止试剂扩散-Evans兰:兰色使结果更容易阅读-玻片法-直接在平板上测试IDCOLORCATALASE接触酶试剂–玻片法:将待检菌落乳化於一滴试剂中–直接平板测试:将一滴试剂直接滴於平板上的菌落步骤:或即时产生气泡(5秒内)代表阳性结果。鉴定用接触酶显色剂接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应。由於传统方法的弱阳性结果，这个试验没有得到充分应用。ID显色接触酶传统方法(H2O2)现成试剂有无稳定化试剂有(稳定期1年)无显色剂有(Evans兰)无粘度试剂可保持在测定的菌落上滴加於琼脂上敏感性高低实用性:用於包括血平板在内各种培养有无IDColorCatalase产品规格名称IDColorCatalase货号55561试剂2瓶5ml滴瓶(~100测试量)储存2-8°C於暗处有效期一年或6个月(於室温)氧化酶试验氧化酶试验用于分辨肠道杆菌及非发酶菌非发酵菌革兰氏阴性杆菌阳道杆菌氧化酶氧化酶-+氧化酶试验-原理:TMPD氧化TMPD氧化酶(TMPD=2甲基一对一苯撑二胺)(深紫色)(透明)2个方法:纸片法液体试剂氧化酶纸片法液体API氧化酶试剂试剂方法:-用2个试管载1-2ml无菌水-第一管为阴性对照:加一滴OX试剂-第二管为测试管:加可疑菌落然後再加二滴OX试剂-比较二支管的颜色:阴性对照:透明,浅紫色结果:OX(-):透明,浅紫色OX(+):紫色,深紫色(+)结果阅读:菌落等待10到30秒钟阳性:紫色,深紫色OXIDASE氧化酶试剂原理:对葡萄糖(Glucose)的发酵(F)或氧化(O)代谢的产酸试验.显色剂会把培养基从绿色转为黄色OF培养基操作规程:步骤1:接种前把OF培养基在沸水浴溶解.步骤2:在室温冷却后,每试验分装2个安培的固体OF培养基.步骤3:利用接种针挑单个菌落,穿刺到OF培养基(深度约1cm.)步骤4:把其中一个已接种好的安培(OF.F),用石爉油覆盖1cm.把两个安培盖上朔料帽,培养35-37°C,24–48小时.OF培养基结果阅读:O+F+O+F-O-F-oil发酵菌非发酵菌低活性OF培养基原理:使用半固体培养基(含低瓊脂+明胶)让高活力的微生物在穿刺线周围扩散生长.操作规程:步骤1:接种前把M培养基在沸水浴中溶解(最长5分钟).步骤2:在室温冷却后,利用挑单个菌落,穿刺M培养基.步骤3:培养35-37°C,24–4小时(部分细菌孵育22-25°C).M培养基结果阅读:有动力+无动力-M培养基用于分辨Staphaureus(金葡球菌)Staphhyicus(猪葡萄菌)Staphintermedius(中间)...COAGULASECOAGULASEPOSITIVE(凝固酶+)NEGATIVE(凝固酶-)其他葡萄球菌凝固酶实验革兰氏阴性杆菌分类革兰氏阴性杆菌乳糖发酵-乳糖发酵+氧化酶+非发酵菌鉴定API20NE氧化酶-肠道杆菌鉴定API20EAPI20E及API20NE革兰氏阴性杆菌例子(大肠杆菌x1000)革兰氏阴性弧菌例子(x1000)革兰氏阳性杆菌分类革兰氏阳性杆菌触酶-触酶+短小脱色含有异染颗粒slightdiscoloration(granulations)短球杆菌延长状杆菌细小不透光菌落20-25°C有动力37°C无动力李斯特菌鉴定APIListeria乳酸菌鉴定API50CHL棒状杆菌鉴定APICoryne大体积产芽孢杆菌芽孢菌鉴定API50CHBAPIListeria及API50CHB革兰氏阳性产芽孢杆菌例子(炭疽杆菌x1000)革兰氏阳性短杆菌例子(李斯特菌x1000)APICampy革兰氏阳性棒状杆菌例子革兰氏阴性弯曲菌例子APICoryne革兰氏阳性球菌分类革兰氏阳性球菌游离凝固霉APISTAPH触酶-触酶+萄葡球菌凝固酶(-)金黄色萄葡球菌溶血链球菌鉴定APISTREPAPISTAPH及APISTREP革兰氏阳性葡萄球菌例子(金黄色葡萄球菌x1000)革兰氏阳性链球菌例子