全文-上海中医药大学-教学实验中心

染发剂对幼年小白鼠肾功能的影响130染发剂对幼年小白鼠肾功能的影响徐佳虞莉青夏延明赵影张馥晴指导老师：陆雄（上海中医药大学03针英七，上海201203）[摘要]目的：研究染发剂对幼年小白鼠肾功能的影响。方法：用市售染发剂给20只昆明种幼年小白鼠染毛（即实验组，雄鼠M1组n=10，雌鼠M2组n=10），另20只小鼠做空白对照（即正常组，雄鼠N1组n=10，雌鼠N2组n=10）。染毛第18天经摘眼球取血，测血肌酐和血清尿素氮，并取肾组织作肾脏病理切片观察。结果：外观上来看，M1组的脱毛现象较明显；数据显示，实验组的血肌酐明显低于正常组（P0.05），有统计学意义。M2组的血清尿素氮明显高于N2（P0.05），有统计学意义。而M1组与N1组的血清尿素氮比较无统计学差异（P0.05）。形态学观察结果没有发现病理形态学改变。结论：目前市售常用染发剂短期内可以导致雄性小鼠脱发现象，但对雄性小鼠肾功能及肾组织形态没有明显的损伤；对雌性小鼠，可以导致血清尿素氮的升高，但不影响血肌酐以及肾组织病理形态。提示短期染发毒性较轻微，其造成的毒性可能有性别差异。[关键词]染发剂，幼年小白鼠，血肌酐，血清尿素氮，病理形态爱美之心人皆有之。随着社会的发展，色彩丰富的染发剂已不再单用于遮盖白发，它成为了一种流行的象征，并且这一现象正越发趋向于年轻化。但是染发剂对人体的危害却不容我们忽视。染发剂主要是由对苯二胺构成，据CCTV每周质量报告指出，这些有毒的化学品主要通过皮肤毛囊进入血液到达骨髓对染发者造成肝、肾的损害，从而诱发各种癌症。目前可查研究基本上局限于血液骨髓的破坏及部分癌症的研究，肾毒性的确切性研究尚无。因此，本实验旨在确定短期内染发剂对肾脏是否造成毒性反应。1．材料和方法1.1材料1.1.1实验动物：昆明刚断奶小白鼠共40只，平均体重为9.8g，雌雄各半，随机分为染发剂组（即实验组，M1组雄鼠10只，M2组雌鼠10只），以及正常对照组（N1组雄鼠10只，N2组雌鼠10只）。实验动物均由上海中医药大学动物实验中心提供。（批号SCXK(沪）2003-0003上海斯莱克实验动物有限公司)1.1.2染发剂：市售常用氧化型染发剂二种颜色（随机选为：红色和黑色），染发剂均购自超市。（批号768128-D，上海章华保健化妆品有限公司，卫妆特字（2003）第0728号）1.1.3实验器材：刷子、弯镊、剪刀、镊子、微量吸管TGL-16G台式高速离心机（上海医用分析仪器厂）染发剂对幼年小白鼠肾功能的影响131TP1020自动脱水机（德国Leica公司）EG1160自动包埋机（德国Leica公司）RM2135切片机（德国Leica公司）HI1210摊片机（德国Leica公司）HI1220烘片机（德国Leica公司）多头显微镜（香港徕卡仪器有限公司）BTS-370全自动生化仪（西班牙sysmex公司）1.1.4试剂：10%中性福尔马啉。肌酐试剂（批号：070263；上海丰汇医学科技有限公司）血清尿素试剂（批号：070260；上海丰汇医学科技有限公司）1.2方法1.2.1饲养：40只小鼠分为四笼：实验组雌雄各一笼，每笼10只；正常对照组雌雄各一笼，每笼10只。各笼小白鼠均给与正常食物量与饮水量。1.2.2染发剂染毛：按商品说明给实验组小鼠背部毛发染色：先用清水湿润小鼠背部毛发，将等量1号颜色和2号颜色的染发剂调匀，均匀刷于毛发上，用电吹风吹干。正常对照组则用清水均匀刷与毛发上，平均每3天染一次，共染6次。1.2.3摘眼球取血[1]：染毛第18天所有动物用弯镊摘除小鼠一侧眼球，将1.0ml血滴入离心管中。1.2.4肾功能检测：取血后，室温放置15分钟，将离心管放入离心机中经3000转/10min离心后，取上层血清用全自动生化仪检测血肌酐（Cr）和血清尿素氮（BUN）。1.2.5肾脏解剖：脱颈椎处死小鼠后，解剖动物尸体，取左侧肾脏经常规取材，固定，脱水，透明，包埋，切片和HE染色，在光学显微镜下观察肾组织的病理形态学改变。1.2.6统计学：血肌酐和血清尿素氮用X±SD表示，组间比较用校正的t检验（n30）,P值小于0.05为有统计学意义差别。2．结果2.1四组动物生存情况良好，无死亡。模型1组（M1组）背部有明显脱毛现象，面积较大。2.2与正常组比较，M1及M2组血肌酐均降低（P0.05）；M2组血清尿素氮明显升高（P0.05），而M1组升高不明显（P0.05）。具体数据比较见表1。2.3光镜下观察，正常小鼠肾组织形态学没有明显的性别差异。肾脏皮质部结构形态正常。肾小球与肾小管无明显病理变化。肾小球呈小球团状。分布于肾小球周围的近曲小管，管径较粗，管腔小，不平整。管壁较厚，由单层上皮组成，细胞锥形，界限不清，染发剂对幼年小白鼠肾功能的影响132胞质强嗜酸性，染成深红色，游离面有刷状缘（为红色线状结构）。近曲小管在切片上有各种不同的断面。分布于肾小球周围的远曲小管，切片上断面比近曲小管少，与近曲小管比较其管径较细，管壁薄（单层立方上皮），管腔大且腔面较平整，无刷状缘，细胞染色较浅。实验组与正常组相比，肾组织未见明显的病理改变。（详见附图1-4。）表1幼鼠正常组与染发剂模型组血肌酐和血清尿素氮的变化性别组别血肌酐（umol/l）血清尿素氮（mmol/l）雄正常组N138.96±3.578.47±0.74模型组M132.17±3.348.51±0.811雌正常组N236.02±1.548.58±1.02#模型组M232.96±2.0710.36±1.16注：＃P0.05附图图1.N1组肾脏病理切片，放大倍数：40×10图2.M1组肾脏病理切片，放大倍数：40×10染发剂对幼年小白鼠肾功能的影响133图3.N2组肾脏病理切片，放大倍数：40×10图4.M2组肾脏病理切片，放大倍数：40×103．讨论在现今文明社会里，染发已是一种时尚，事实上头发的功能除了为了维护头部的健康，还能衬托个人的美姿。随着生活质量的不断提高，外表越来越被人们所重视，走在大街小巷上不难发现，染发特别是染彩发已经成为一种消费时尚。绝大部份的老年人染发的目的是为了能挽留青春的外观，但现代年轻人染发则希望拥有一炫丽漂亮傲人的头发。可是，我们不可忽视这美丽背后所存在的危害。根据各研究报导[2-5]，染发剂容易造成皮肤过敏反应，如轻微的头皮发痒、鼻腔和眼睛有肿胀感、皮肤湿疹等等。严重的会引起哮喘、鼻炎、慢性支气管炎等等。且染发剂的强氧化剂具有很强的腐蚀性，其急、慢性刺激会影响头发中水分失衡，和大量蛋白质的变性和减少等。最终导致头发脱落。如果染发剂不慎流入眼内会造成眼球损伤，可引起角膜混浊、虹膜炎等，严重者可导致失明。不仅如此，染发剂还会诱发各种癌症。据现有研究结果表明，染发剂成分在体内蓄积量超过1％时，就会引起细胞突变，从而导致皮肤癌、膀胱癌、白血病、淋巴癌等多种癌症。渐渐地，有关损伤肝、肾功能的病案报道引起了人们更大的关注，由于很多染发剂中含有铅、银等有毒物质，其含量是家用油漆、颜料的5－10倍。一旦进入肝肾，就会破坏这些器官的功能，引起各种疾病[6-10]。但目前，尚未见染发剂肾毒性的确切的实验研究报道。血肌酐和血清尿素氮的测定是反映肾功能的主要指标。血肌酐与体内肌肉总量关系密切，基本上不受饮食、高分解代谢等肾外因素影响，在外源性肌酐摄入量稳定，体内生成量恒定的情况下，血肌酐浓度主要取决于肾小球滤过功能。通常情况下，当肾小球滤过率下降到正常的50％以上时，血肌酐才开始迅速上升，因此当血肌酐明显高于正常时，常表示肾功能已严重损害。肌肉萎缩时血肌酐可降低。本实验组的血肌酐降低明显，其病理意义有待进一步研究。通常情况下血肌酐和血清尿素氮同时测量。若两者同时升高，说明肾脏已严重受损。本实验仅见M2组血清尿素氮明显升高，提示染发剂对小鼠肾功能的影染发剂对幼年小白鼠肾功能的影响134响较小，并且可能有性别差异；M1组小鼠大面积脱发是否会造成经皮吸收染发剂的数量降低，因而雄性小鼠的血清尿素氮升高不如雌性明显有待进一步验证。另外，各组小鼠的肾脏病理切片经观察比较，并没有发现明显的损害变化，可以初步认为短期内使用有害化学物质染毛尚不足于造成小鼠肾脏形态学上的直接改变。提示有害化学物质造成肾脏代谢机能的变化一般要早于病理形态学的改变。4.结论：目前市售常用染发剂短期内可以导致雄性小鼠明显的脱毛现象，但对雄性小鼠肾功能的影响不大，且对其肾组织形态也没有明显的损伤；对雌性小鼠，可以导致血清尿素氮的升高，但不影响肾组织病理形态。提示短期染发毒性较轻微，其造成的毒性可能有性别差异。致谢感谢动物中心老师对我们实验的支持。感谢陆雄指导老师这几个月来对我们的细心教导，以及林敏老师和宋哲平老师在实验过程中的帮助和指导。感谢各有关方面老师对本次实验的支持。参考文献1.NottHW.SystemicPoisoningbyhairdye.BrMedJ.1924;1:421-22.EIAnsayEH,AhmedMEK,ClagueHW.SystemicToxicityofPPD.Lancet1983;1:13413.SoodAK,YadavSP,SoodSetal.HairdyePoisoning.JAPI.1996;44:69.4.KallelH,ChellyH,DammakH,BahloulM,KisibiH,HamidaCBetal.Clinicalmanifestationofsystemicparaphenylene-diamineintoxication.JNephrol.2005;18:308-115.MotaouakkilS,ChaariB,Hachimia,EzzouineH,GuedariH,NejmiHatal.RhabdomyolysisandParaphenylene-diaminepoisoning.AnnFrAnesthReanim.2006;25:708-13.6.AshraFW,DawlingS,FarrowLJ.SystemicParaphenylene-diaminepoisoning;Acasereportandreview.HumExpToxicol.1994;13:167-1707.AnuradhaS,AroraS,MehrotraSetal.AcuterenalfailurefollowingPPDpoisoning;Acasereportandreview.Renfail.2004;26:329-32.8.ChughKS,MalikGH,SinghalPC.Acuterenalfailurefollowingparaphenylenediamine[hairdye]poisoning:reportoftwocases.JMed.1982;13(1-2):131–137.[PubMed]9.SulimanSM,HomeidaM,AboudOI.Paraphenylenediamineinducedacutetubularnecrosisfollowinghairdyeingestion.HumToxicol.1983Oct;2(4):633–635.[PubMed]10.BernisP,HamelsJ,QuoidbachA,MahieuP,BouvyP.RemissionofGoodpasture'ssyndromeafterwithdrawalofanunusualtoxic.ClinNephrol.1985Jun;23(6):312–317.[PubMed]