猪圆环疫苗讲课

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司时凯猪圆环病毒疫苗的研制及应用【中国首创-专利产品】公司实力•哈维科公司新区于2008年落成，新区投资4亿元以上，占地面积62000平方米，建筑面积50000平方米，净化面积15838平方米，目前是国内“生产能力最强大、生产设施最完善、生产设备最先进”的一流企业，也是亚洲最大的“兽药GMP车间群”。•国家兽用生物制品高新技术产业化示范基地也于2008年落户维科新区。•2009年7月4日—6日，我公司细胞毒活疫苗等17条生产线全面通过兽药GMP验收。技术创新基地–1986，伪狂犬病活疫苗（Ｂａｒｔｈａ-Ｋ６１株)的引进和试验研制，农业部科技进步一等奖–2006，猪传染性胃肠炎流行性腹泻二联苗研制与应用，国家科技进步二等奖–2008，猪繁殖与呼吸综合征防治技术的研究与应用，国家科技进步二等奖连续4年获国家级奖，连续6年获省一等奖哈兽研近年取得的科研成就二十世纪中国动物医学四大成就牛瘟牛肺疫马传贫猪瘟疫苗禽流感猪繁殖与呼吸综合症猪圆环病毒生物安全四级实验室建立•哈兽研对国家的贡献—成立最早—水平最高---贡献最大•新时期哈兽研对国家生物安全体系贡献•非典攻关战的特殊贡献•P4----投资4.5亿人民币---世界最高等级病原概况引起的相关疾病病理变化发病机制实验室诊断疫苗研制防制措施报告内容•病毒粒子最小（17nm)，无囊膜，二十面体；•基因组简单（PCV1＝1758nt；PCV2＝1767或1768nt)；•环状单股DNA，滚环复制模型；•一个结构蛋白（30KDa），二个复制酶（Rep&Rep’)•抵抗力最强：65℃1h，70℃10min;无血凝性；•二个基因型：PCV1与PCV2，低水平交叉反应；•PCV1无致病性，PCV2可引起不同临床疾病；PCV病原概况PCV病毒形态特征17nm；无囊膜；二十面体对称PCV病毒基因组构成多系统衰竭综合征（PMWS）猪皮炎肾病综合征(PDNS)猪呼吸道综合征(PRDC)母猪繁殖障碍（RF）仔猪先天性震颤（CT）引起的相关疾病多系统衰竭综合征（PMWS）•断奶2～3周发病，发育迟缓、消瘦，呼吸困难、咳嗽、气喘，贫血、被毛粗乱、皮肤苍白或黄染，体表淋巴结肿大，腹泻。•发病率8～40％；死亡率4～41％。多系统衰竭综合征（PMWS）猪皮炎肾病综合征(PDNS)•多发生在育肥阶段。•在会阴部、四肢、胸腹部及耳部皮肤出现圆形或不规则红紫色病变斑点或斑块。•中度感染猪只可康复，重度感染康复率较低。猪呼吸道综合征(PRDC)常见保育期和育肥猪：咳嗽，流鼻汁，呼吸加快，精神沉郁，食欲不振，生长缓慢。伴随PRRS、肺炎支原体、猪流感混合感染。母猪繁殖障碍（RF）母猪流产、死胎、弱仔、木乃伊，受胎率低或不孕，断奶前仔猪死亡率高，达10％左右。所产仔猪呈心肌炎症状，心脏检出PCV2抗原。PCV2可通过胎盘垂直传播，哺乳期由母源抗体提供保护而不显示临床症状。仔猪先天性震颤（CT）发病仔猪站立时震颤，由轻变重，卧下或睡觉时震颤消失，受刺激时严重。如精心护理，多数仔猪3周可康复。PCV2与多种病原混合感染情况病原混感种类阳性数/总数百分比％PCV2+PRRS164/48433.8%PCV2+PRRS+霉形体77/48415.9%PCV2+PRRS+猪流感10/4842.1％PCV2+巴氏杆菌105/48421.6%PCV2+霉形体92/48419.0%PCV2+猪流感13/4842.6%PCV2+猪流感＋霉形体3/4840.6%PCV2单独9/4841.8%病理变化全身淋巴结肿大；脾脏轻度肿胀；胃大片溃疡；盲肠和结肠粘膜充、出血；继发感染有胸膜炎、腹膜炎、心包积水、心肌炎、心脏变形、质地柔软。病理变化间质性肺炎和黏液脓性支气管炎；肺脏肿胀、间质增宽、质地坚硬似橡皮样肺，散在褐色实变区。肾脏水肿、皮质有灰白色病灶。肝变硬、发暗，呈花斑状。组织病理学变化淋巴组织－淋巴细胞滤泡区减少，淋巴细胞耗损严重；肺上皮细胞脱落，伴有纤维增生；肾皮质和髓质萎缩；肝细胞坏死及肿胀。PCVD发病机制PCV2PCV2PCV2全身淋巴组织淋巴细胞耗损毒株差异共同感染免疫刺激动物品种低毒血症高毒血症与白细胞减少症5～25％血清阳转＋/-血清阳转不全感染被清除亚临床感染病毒感染传播临床发病，死亡率达70-80％20-24dPCV-2PPVPRRSStres?Imunostimulace实验室诊断病原学诊断血清抗体检测免疫荧光PCR检测IPMAELISAPCVD诊断标准1）有相关临床症状2）有相关病理学变化3）免疫组化检测病毒抗原血清抗体阳性＋PCR检测弱阳性不能作为PCVD发病诊断判定标准猪圆环病疫苗1.病毒灭活疫苗:病毒细胞培养液灭活，与佐剂乳化制备的疫苗。2.亚单位疫苗：重组杆状病毒表达的PCV2Cap蛋白产物制备的疫苗。3.弱毒疫苗：细胞传代获得致弱毒株，制备弱毒冻干疫苗。4.嵌合型病毒疫苗：PCV2与PCV1的ORF2基因互换获得的嵌合病毒。5.活病毒载体疫苗：用腺病毒、伪狂犬病毒表达PCV2Cap蛋白。6.DNA疫苗：构建PCV2ORF2基因克隆到真核表达载体制备疫苗。国外猪圆环病毒疫苗的应用情况1.富道的PCV2灭活疫苗：6个猪场育肥猪接种，未接种疫苗组死亡率为7.7%，接种后死亡率下降为1.8%。2.勃林格的PCV2亚单位疫苗:对保育猪接种,未接种疫苗为死亡率为9.5%；疫苗接种后死亡率下降为2.4%。3.法国梅里亚的PCV2灭活疫苗：在母猪使用，保育猪的死亡率从4.4%下降到2.6%；育肥猪死亡率从6.6%下降到5.1%。疫苗研制第一集团公司疫苗名称抗原成分类型佐剂免疫猪群富道／辉瑞Suvaxyn®PCV2PCV1-2嵌合病毒嵌合疫苗水质佐剂４周龄以上勃林格IngelvacCircoFLEX®PCV2aCap蛋白亚单位疫苗水质佐剂３周龄以上英特威Circumvent®PCV2aCap蛋白亚单位疫苗水质佐剂３周龄以上先灵葆雅Porcilis®PCVPCV2aCap蛋白亚单位疫苗水质佐剂３日龄以上梅里亚Circovac®PCV2a全病毒灭活疫苗矿物油佐剂母猪及３周龄以上仔猪海利／哈维科圆毕净／PCV2灭活疫苗（LG株）PCV2a全病毒灭活疫苗水包油佐剂母猪及３周龄以上仔猪南农高科／普莱柯圆克清／圆健（SH株）PCV2b全病毒灭活疫苗水包油包水双向佐剂母猪及３周龄以上仔猪现有主要毒株南农高科圆环疫苗病毒含量106.0TCID50保护期3个月14-211ml间隔21日1ml图1PCV2/LG株传代毒价测定曲线1.752.7533.53.754.255.455.6666.36.66.501234567151015202530354045505560代次毒价（Log10对数）疫苗种毒的培育与传代疫苗免疫剂量试验结果剂量0.1ml0.5ml1ml2ml4ml对照组猪号1234567891011121314151617180w2525252525252525252525252525252525251w10010020010020040020010025502005025100252525252w40040040020020040020020050800200100504002002525253w200200200200800800200800400160020040010080016002525254w100100200200160016002001600800800400160020016003200252525攻毒攻毒攻毒攻毒攻毒攻毒5w50400100100160016001008001600800400800400400320010050256w100400200100800320020016001600160080080016004003200502001007w200160020040016006400800160032001600320032003200160012800100400400批号-代次生产日期纯净检验支原体检验外源病毒检验病毒含量灭活检验结果判定200701-56代20070601合格合格合格105.9合格合格200702-57代20070604合格合格合格106.0合格合格200703-58代20070609合格合格合格106.3合格合格200704-59代20070612合格合格合格106.3合格合格200705-60代20070617合格合格合格106.2合格合格猪圆环病毒疫苗的中间试制疫苗种毒的繁殖动力学120h12h24h48h72h96h120h猪圆环病毒2型灭活疫苗（ZJ/C株）发布时间：2013-10-25【兽药名称】通用名猪圆环病毒2型灭活疫苗（ZJ/C株）商品名圆捷英文名PorcineCirovirusType2Vaccine,Inactivated(StrainZJ/C)汉语拼音ZhuYuanhuanbingduErxingMiehuoyimiao（ZJ/CZhu）【主要成分与含量】疫苗中含灭活的猪圆环病毒2型ZJ/C株，灭活前每毫升病毒含量≥107.3TCID50。【性状】淡黄色乳状液。【作用与用途】用于预防由猪圆环病毒2型感染引起的疾病。免疫期为4个月。【用法与用量】颈部肌肉注射。14日龄以上猪，每头2.0ml。【不良反应】一般无不良反应。【注意事项】（1）本品仅适用于健康猪群预防接种。（2）用前应使疫苗温度升至室温，应充分摇匀。（3）疫苗瓶开启后限当日用完。（4）本品严禁冻结，破乳后切勿使用。（5）疫苗瓶及剩余的疫苗应以燃烧或煮沸方式做无害化处理。（6）猪只接种过程中出现过敏反应，可用肾上腺素救治疫苗免疫佐剂的筛选02000400060008000100001200014000抗体效价Antibodytiters0W1W2W3W4W5W6W7W周数(Weeks)国产白油ISA206ISA15VGIMS1315铝胶佐剂PBS对照A油包水B水包油包水C水剂型D纳米佐剂E铝胶FPBSLG佐剂特点水相９０油相１０一毫升＝两毫升通针性好可以打０．５毫升吸收好见效快不会激发圆环病毒发病免疫原性好二免７天后抗体达到１；８００－１０００灭活剂的区别疫苗安全性试验疫苗批号试验猪头数接种剂量单剂量疫苗接种临床观察结果结果判定采食消瘦局部反应热反应过敏反应抗体阳转200701114ml无影响无无无无11/11安全200702104ml无影响无无无无10/10安全20070394ml无影响无无无1/99/9安全200704104ml无影响无无无无10/10安全20070584ml无影响无无无无8/8安全对照组10未注无影响无无无无0/10正常免疫次数效力检测方法试验方法包括试验前检查、疫苗的实验室安全检验、免疫效果检测和临床免疫试验四个方面。(1)试验前检查:对疫苗进行外观、剂型、稳定性、粘度和汞类含量进行测定。检测试验猪PCV2抗原和PCV2抗体,选取PCV2抗原、PCV2抗体均为阴性的猪用于本试验。(2)实验室安全检验:14-21日龄健康仔猪4头,肌肉注射疫苗2.0ml,观察14日。(3)实验室免疫效果检测:14-21日龄健康仔猪15头。随机分为3组,每组5头。第1组为免疫组,注射灭活苗,14日后加强免疫1次。第2组为攻毒对照组,接种圆环病毒。第3组为空白对照组,不免疫不攻毒。3组猪隔离饲养。二免后第21日,用DBN-SX07株病毒液(含105.0TCID50/ml)对第1、2组猪攻毒,逐日测定体温并观察25日。二免后第21日,对所有猪采血,测定血清中的PCV2抗体效价。攻毒到期后对所有猪进行病理剖检。疫苗免疫效力试验疫苗批号试验猪数免疫剂量间隔日数攻毒剂量抗体效价检测免疫保护率评价保护率免疫前效检前临床保护病理保护200701111+1ml21d1×105.0≤1:501:200～80011/1110/1190