实验室常用技术参数资料_百度文库(精)

常见实验用溶液的配制方法一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine:溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。1mol/L精胺(Spermine:溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。10mol/L乙酸胺(ammoniumacetate:将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA:加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。1mol/L二硫苏糖醇(DTT:在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassiumacetate:溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。1mol/L氯化钾(KCl:溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠(sodiumacetate:溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。0.5mol/LEDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L,混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。1mol/LHEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2,然后用水定容至100ml。1mol/LHCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/mlIPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。100mmol/LPMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。20mg/ml蛋白酶K(proteinaseK:将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。10mg/mlRnase(无DNase(DNase-freeRNase:溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH5.0。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套5mol/L氯化钠(NaCl:溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。四.常用抗生素氨苄青霉素(ampicillin(100mg/ml溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素(carbenicillin(50mg/ml溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林(methicillin(100mg/ml溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素(kanamycin(10mg/ml溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯霉素(chloramphenicol(25mg/ml溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。链霉素(streptomycin(50mg/ml溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸(nalidixicacid(5mg/ml溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素(tetracyyline(10mg/ml溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。实验室常用技术参数资料见上述配制30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。3.放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D(分子量为1255纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP溶液【配制方法】在0.8ml水中溶解60mgATP,用0.1mol/LNaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃5.10mol/L乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。6.10%过硫酸铵溶液【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。7.BCIP溶液【配制方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP溶解于10ml100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃8.2×BES缓冲盐溶液【配制方法】用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基-2-氨基乙磺酸]、1.6gNaCl和0.027gNa2HPO4,室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。9.1mol/LCaCl2溶液【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54gCaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。【注意】制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径过滤除菌,然后骤冷至0℃。10.2.5mol/LCaCl2溶液【配制方法】在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2·6H2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT溶液【配制方法】用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2溶解3.09gDTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。【注意】在100ml水中加入1g溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中,保存于室温。【注意】小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面罩。15.2×HEPES缓冲盐溶液【配制方法】用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/lNaOH调节pH值至7.05,再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌,分装成5ml小份,贮存于-20℃。16.IPTG溶液【配制方法】IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为238.3,在8ml蒸馏水中溶解2gIPTG后,用蒸馏水定容至10ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。17.1mol/L乙酸镁溶液【配制方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁,用水定容至1L过滤除菌。18.1mol/LMgCl2溶液【配制方法】在800ml水中溶解203.4gMgCl2·6H2O,用水定容至1L,分装成小份并高压灭菌备用。【注意】MgCl2极易潮解,应选购小瓶(如100g试剂,启用新瓶后勿长期存放。19.β-巯基乙醇(BME溶液【配制方法】一般得到的是14.4mol/L溶液,应装在棕色瓶中保存于4℃。【注意】BME或含有BME的溶液不能高压处理。20.NBT溶液【配制方法】把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。21.酚/氯仿溶液【配制方法】把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris·HCl(pH7.6抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的0.01mol/lTris·HCl(pH7.6液层,保存于4℃。【注意】酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF溶液【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L,分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液(100mmol/L。【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时,20μmmol/lPMSF水溶液的半寿期大约为85min,这表明将PMSF溶液调节为碱性(pH8.6并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。23.磷酸盐缓冲溶液(PBS溶液【配制方法】在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。24.1mol/L乙酸钾(pH7.5溶液【配制方法】将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中,用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L,保存于-20℃。25.乙酸钾溶液(用于碱裂解【配制方法】在60ml5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。26.3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0溶液【配制方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠,用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0,加水定容到1L,分装后高压灭菌。27.5mol/LNaCl溶液【配制方法】在800ml水中溶解292.2gNaCl加水定容至1L,分装后高压灭菌。28.10%十二烷基硫酸钠(SDS溶液【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS,加热至68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分装备用。【注意】SDS的微细晶粒易扩散,因此称量时要戴面罩,称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS,10%SDS溶液无须灭菌。29.20×SSC溶液【