ELISA检测的操作要点

ELISA检测中造成结果偏差的原因分析酶免疫技术酶免疫组织化学技术：抗原定位检测酶免疫测定技术：均相（液相）非均相（固相）固相酶免疫测定Enzymelinkedimmunosorbentassay原理：将待测抗原或抗体通过吸附或特异性抗体或抗原的捕捉使其固定于固相支持物表面，再用酶标抗体或抗原的酶在液相中催化底物显色，来测定待测抗原或抗体的含量ELISA检测的技术要点试剂是前提操作是关键质量控制是保证ELISA检测的操作特点1.多反应、多试剂、多步骤2.严格按操作说明仔细操作3.基本步骤：加样、温育、洗涤、比色ELISA检测中出现假阳性的常见原因1.标本分离不完全2.标本严重溶血或脂血3.加样时间过长4.样品与稀释液未充分混匀5.酶标抗体（抗原）吸附于孔壁或表面6.反应与显色时未加盖封口膜7.温育时间（反应时间、显色时间）过长或温度过高8.洗涤液污染或洗涤不彻底9.工作环境温度过高*全自动酶免检测仪HBsAg特异性从87%提高到91%ELISA检测中出现假阴性的原因分析1.试剂未平衡至室温2.加样的量不足或样品过度稀释3.加样时有气泡4.抗原、抗体反应时间或显色时间不够5.过度洗涤6.环境温度过低7.试剂盒过期*全自动酶免检测仪HBsAg灵敏度从92%提高到93%乙肝标志物的检测ELISA检测CLIA检测MEIA检测定性半定量/定量半定量/定量定性/半定量/定量定性测定常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果半定量测定虽介于定性和定量之间，严格意义上来说，其仍属于定性测定，只不过其对定性测定中的“阳性”作了进一步的分级，即所谓的强阳性·阳性·弱阳性的区别定量测定的结果则以浓度（如IU/L、ug/L等）的方式表达。ELISA检测的结果报告——定性检测类型结果报告HBsAg双抗体夹心法正比HBsAb双抗原夹心法HBeAg双抗体夹心法HBeAb竞争法HBcAb竞争法正比正比反比反比Cutoff阴性阳性MEIA检测的结果报告——半定量/定量检测类型MEIA结果报告HBsAg双抗体夹心法HBsAb双抗原夹心法HBeAg双抗体夹心法HBeAb竞争法HBcAb竞争法MEIA正常参考2S/N1S/CO10mIU/ml1S/CO1S/COS/N=SampleRate/IndexCalibratorMeanRateusingthecalibrationcurve0~1000mIU/mlS/CO=SampleRate/IndexCalibratorMeanRateS/CO=SampleRate/(IndexCalibratorMeanRate/2.5)S/CO=SampleRate/(IndexCalibratorMeanRate/2)CLIA检测的结果报告——半定量/定量检测类型CLIA结果报告HBsAg双抗体夹心法HBsAb双抗原夹心法HBeAg双抗体夹心法HBeAb竞争法HBcAb间接法CLIA正常参考0.05IU/ml1S/CO10mIU/ml1S/CO1S/COusingthecalibrationcurve0~250IU/mlusingthecalibrationcurve0~1000mIU/mlS/CO=SampleRate/IndexCalibratorMeanRateS/CO=SampleRate/(IndexCalibratorMeanRate/2.5)S/CO=SampleRate/(IndexCalibratorMeanRate/2)结果的报告认真阅读试剂盒说明书，按照其要求报告结果如出现临界结果，应明确是否需对患者进一步追踪观察（建议随访）清楚说明结果对特定疾病诊断意义（可能性高或不可能）和/或需进一步检测（建议检测：……）如果已在进行进一步的检测，应在报告中予以说明（此结果已复查）结果的解释结果解释的责任属于临床实验室，应根据所检测的人群解释结果临床解释的责任属于临床医生，其应根据临床信息解释结果临床实验室与临床医生的对话对适当利用实验室数据非常重要