菌落总数

菌落总数测定相关概念菌落（colony）：单个微生物在适当固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的细胞群体。相关概念菌落总数（AerobicPlateCount）：食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培基、温度、时间、pH、需氧性质等）所得1mL（g）检样中形成菌落的总数。只包括一群在平板技术琼脂上生长发育的嗜中温需氧或兼性厌氧菌的菌落总数。细菌总数？相关概念CFU（菌落形成单位，ColonyFormingUnits）:一个微生物细胞在平板计数琼脂上生长后形成的肉眼可见的菌落，是计算细菌或真菌数目的单位。卫生学意义反映食品被细菌污染的程度,预测食品耐放程度和时间,估测食品腐败状况及时反映食品加工过程是否符合卫生要求，为被检食品卫生学评价提供依据实际上是把检样中的致病菌、非致病菌、酵母菌、霉菌都计算在内的微生物杂菌总数由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验条件下不生长，故计数结果要比实际值低现行有效的标准GB4789.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定SN0168-2015出口食品平板菌落计数SN/T1897-2007食品中菌落总数的测定PetrifilmTM测试片法GB4789.2-2010菌落总数测定流程检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质计算菌落总数报告10倍系列稀释选择2～3个适宜稀释度各取1mL分别加入灭菌培养皿内每皿加入15~25mL平板计数琼脂培养基，混匀培养计算各平板菌落数36±1℃48±2h营养琼脂与平板计数琼脂成分：营养琼脂蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15~20g蒸馏水1000mL平板计数琼脂胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mL菌落总数操作流程图水产品30±1℃培养72±3h菌落计数方法选取菌落数在30~300cfu之间，无蔓延生长的平板计数低于30的记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计，每个稀释度采用两个平行的均数菌落蔓延原因之一：检样中存在易造成蔓延的细菌，如芽孢杆菌等。原因之二：琼脂培养基造成，如表面水分过多，未及时倒置或倾注时培养基内温度不均匀等。应以无蔓延菌落的平板作为该稀释度菌落数。若片状菌落不到平板的一半，另一半菌落分布均匀，可计算半个平板后乘以2出现菌落间无明显界线的链状生长时，将每条单链作为1个菌落计数。计数结果的计算若只有一个稀释度平板在30~300CFU，则计算两平行平板的平均数，再乘以稀释倍数报告之。若有连续两个稀释度符合计数要求则按下公式：例1：10-2=232，24410-3=33，35例2：10-1=232，24410-2=33，29N=(232+244+33+35)(2+2×0.1）×10-2菌落总数所有符合计数要求的平板菌落数之和较低稀释度有效平板数较高稀释度有效平板数较低稀释度的稀释倍数dnnCN)1.0(21+=若各平板菌落数均300CFU，则取稀释度最高者平均数报告，余计为多不可计若各平板菌落数均30CFU，则取稀释度最低者平均数报告。若各平板均无菌落生长，则记为1乘以最低稀释倍数报告之。若各平板均不在30~300CFU，且一部分30CFU一部分300CFU，则以最接近30或300CFU者报告之。计数结果的计算例稀释液及菌落数菌落总数cfu/g(ml)报告方式cfu/g(ml)10-110-21多不可计168，1602300，28548，443多不可计310，306429，2512，1050，00，06308，30216，141640016000或1.6×10430773100或3.1×1033080031000或3.1×104270270或2.7×1021×101030503100或3.1×103新计数公式的统计学依据平板菌落数越多，结果越具有代表性（不考虑稀释倍数和培养基的营养状况等）取样量越大，结果越具有代表性（同等取样条件、排除其他方面的干扰因素）不同的取样量赋予不同的权重，而不是简单的取平均值。新旧方法计算同一结果会有所不同例外情况报告方式菌落数在100CFU内时按四舍五入修约，采用整数报告大于或等于100时，第三位数四舍五入修约，取前两位数字，例：205043210000or2.1×105所有平板均为蔓延菌落而无法计数者报告菌落蔓延若空白对照有菌落则此次检测结果无效固体样品以cfu/g，液体以cfu/mL为单位方法重现性和再现性-SN/T1800/ISO4833重现性：同一个人同一实验室，短时间内重做，差距在对数值±0.25认为结果可以接受（95%）。再现性：不同的人不同实验室，短时间内重做，差距在对数值±0.45认为结果可以接受（95%）。例子：第一结果：105=100000第二结果：log10差值≤0.25log10差值≤0.45104.75=56000104.55=36000105.25=178000105.45=280000如何减少误差的产生无菌操作称样准确，均质充分使用吸管要准确1mL；吹或不吹；移液枪+一次性吸头稀释要充分、均匀，不产生气泡调节PH值空白对照从制备样品到接种完成，不得超过15min食品颗粒与小的菌落难以区分，加TTC，与未加TTC对照TTC（氯化三苯四氮唑）-显色剂，使菌落显红色，与食品颗粒明显区分。美国3M公司的PetrifilmTM测试片SN0168-2015本标准与原标准SN0168-1992相比，主要变化如下：——将原标准名称《出口食品平板菌落计数》修订为《进出口食品菌落总数计数方法》，英文名称也做了相应的修改；——按照GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则增加了“术语和定义”“数字修约和计算”等标准编写要素及相关内容。——5.1中的样品制备程序对原标准有所改动。——APC的计算方法和计算公式做了修改。