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药药药理理理学学学实实实验验验指指指导导导TTThhheeeEEExxxpppeeerrriiimmmeeennntttaaalllGGGuuuiiidddiiinnngggooofffPPPhhhaaarrrmmmaaacccooolllooogggyyy主编叶春玲钟玲暨南大学药学院药理教研室二00三年八月十五日目录Index第一部分基本技能实验实验一实验动物的基本操作技术1实验二药理学实验常用仪器操作技术7实验三药典、药物剂型与处方学19第二部分总论实验实验一药物半数致死量(LD50)与半数有效量(ED50)的测定27实验二磺胺类药物的药代动力学测定29实验三量效关系曲线和有关药效学参数测定32第三部分验证性实验实验一传出神经系统药物对血压的影响37实验二传出神经系统药物对血流动力学的影响39实验三利多卡因对哇巴因诱发心律失常的拮抗作用41实验四普鲁卡因的浸润麻醉作用和肾上腺素对其作用的影响43实验五丁卡因和普鲁卡因粘膜麻醉作用的比较45实验六尼可刹米对呼吸抑制的解救45实验七度冷丁的镇痛作用46实验八西咪替丁对组胺诱导豚鼠胃溃疡的拮抗作用48实验九呋塞米对小鼠尿量及电解质的影响49实验十药物对毛细血管通透性的影响50实验十一氢化可的松对红细胞的保护作用51实验十二药物抗垂体后叶素致急性心肌缺血心电图变化52实验十三不同给药途径对药物作用的影响53实验十四药物剂量对药物作用的影响54第四部分指导性实验实验一作用于传出神经系统的未知药物的初步辨别56实验二药物抗戊四唑最大惊厥发作实验57第五部分设计性实验59第六部分实验方法介绍实验一抗癫痫药物筛选实验64实验二镇痛药物筛选法65实验三强心苷对家兔在体衰竭心脏的作用67实验四链霉素的毒性反应及氯化钙的对抗作用69实验五药物对组胺诱发豚鼠哮喘的作用70实验六药物对抗过敏性休克的作用71实验七糖皮质激素对单核巨噬细胞吞噬功能的影响72实验八药物的益智作用测定——避暗法73实验九氯丙嗪对大鼠体温调节的影响74第七部分实验考核76附录前言Preface药理学是基础医学与临床医学之间的一门桥梁科学。它不但在医学基础理论与临床实践、医学和药学以及各医学基础学科的紧密联系方面,甚至在中西医结合方面都起到重要作用。通过药理学的学习,可以了解和掌握与疾病作斗争的重要工具──药物的基本理论,并指导临床防治疾病。由于药理学是一门实验性科学,药理学的实验教学是学生掌握药理学基本理论的重要手段,也是培养和提高学生独立思考、科学思维、实验设计、分析和解决问题的能力以及对科学工作的严谨工作作风、严密工作方法的必要过程。随着我国教育体制改革的深入发展,教育思想由过去的应试教育开始向素质教育转变,传统的实验教育模式已经不能够适应时代的要求。因此,在完成教学工作的同时,为了提高学生开拓创新的能力,培养他们在校期间的学习能力和毕业后的工作能力,我们在2000年版《药理学实验指导》的基础上编写了这本实验教材。新的《药理学实验指导》在内容上做了大幅度的调整,采用三段式实验教学层次,即以验证性实验作为基础,使学生了解和掌握药理学实验的基本知识和技能;以指导性实验作为促进,提高学生学习的兴趣和科学思维的能力;以自选、自设、自做实验作为判断学生能力的标准,增强学生发现问题和解决问题的能力,授之以渔。通过此次药理学实验教学改革,希望能够达到以下目的:1.提高学生既动手又动脑的能力,并对药理学实验课产生浓厚的兴趣。2.使学生经历选题、设计、操作以及论文撰写的全过程,培养严谨的科学态度和科学思维的方法。3.加强教学实验与科研试验的联系,培养学生参与科研的兴趣和能力。4.掌握先进的生物机能实验系统。5.增加实验技术人员在实验过程中的技术讲授与指导。药理学实验改革的成功在于教与学双方的努力及各方面的支持。因此,我们希望教师与学生能够相互配合,同时对实验课的设计、操作及这本实验指导提出宝贵意见,以供改进。在此实验指导的编写过程中,承蒙吕俊华教授审阅,并得到任先达教授、吕艳青老师的大力支持,对此深表谢意。编者2003年8月15日第一部分基本技能实验BasicTechnicalExperiment实验一实验动物的基本操作技术Technicsforexperimentanimals一、实验动物的捉拿固定法正确掌握动物捉拿固定的方法,可以防止动物过度挣扎或受损伤而影响实验观察效果,并可避免实验者被咬伤,从而保证实验顺利进行。下面介绍药理学实验课中常用的几种动物的捉拿固定方法。1、小鼠小鼠性情温顺,一般不会主动咬人,但抓取时动作也要轻缓。抓取时先将小鼠放在粗糙物(如鼠笼)上面,用右手提起鼠尾,将小鼠轻轻向后拉,这样可使小鼠前肢抓住粗糙面不动,用左手拇指和食指捏住鼠头皮肤和双耳,其余三指和掌心夹住其背部皮肤及尾部,这样小鼠便可被完全固定在左手中(图1),此时右手可作注射图1小鼠的捉拿方法或其它实验操作,也可将小鼠固定在特制的固定器中。2、大鼠捉拿固定的方法基本上与小鼠相同。由于大鼠比小鼠牙尖性猛,不易用袭击的方式抓取,捉拿时较难一些,为防大鼠在惊恐或激怒时咬伤手指,实验者应带上棉手套或帆布手套,先用右手将鼠尾提起,放在粗糙物上,向后轻拉鼠尾,使其不动,再用左手拇、食指捏住头颈部皮肤,其余三指和手掌固定鼠体,使其头、颈、腹呈一直线(图2),这时右手可作注射,若需进行手术,则应对大鼠进行麻醉后固定于手术台上。如需尾静脉取血或注射,可将大鼠放入固定盒内或用小黑布袋图2大鼠的捉拿方法装大鼠,使其只露尾巴。3、豚鼠豚鼠胆小易惊,性情温和,不咬人,抓取幼小豚鼠时,只需用双手捧起来,对体型较大或怀孕的豚鼠,先用手掌迅速扣住鼠背,抓住其肩胛上方,以拇指和食指环握颈部,另一只手托住其臀部(图3)。图3豚鼠的捉拿方法4、家兔家兔比较驯服,一般不会咬人,但脚爪较尖,应避免抓伤。抓取时轻轻将兔提起,另一手托其臀部,使其躯干的重量大部分集中在该手上,然后按实验需要将兔固定成各种姿势(图4)。注意抓兔时不要单提两耳,因为兔耳不能承受全身重量,易造成疼痛而引起挣扎,因此单提兔耳,捉拿四肢,提抓腰部和背部都是不正确的抓法。图4家兔的捉拿与固定5、青蛙和蟾蜍用左手握住动物,以食指和中指夹住一侧前肢,大拇指压住另一前肢,用右手协助,将两后肢拉直,左手无名指和小指将其压住固定(图5)。注意在抓取蟾蜍时,切勿挤压其两侧耳部突起的毒腺,以免毒液喷出射入眼中。图5蟾蜍的捉拿与固定二、实验动物的编号方法在动物实验时,常常需要编号分组,将动物做上不同的标记加以区别。标记的方法很多,常用的编号标记方法有染色法、挂牌法和烙印法。家兔等较大动物可用特制的号码牌固定于耳上,而小动物则常用染色法。染色法是药理学实验课中最常使用的方法,通常用化学试剂涂染动物背部或四肢一定部位的皮毛,代表一定的编号,常用染色的化学试剂有:黄色:3%-5%苦味酸溶液咖啡色:20%硝酸银溶液红色:0.5%中性红或品红溶液黑色:煤焦油的酒精溶液(1)1-10号标记法:编号的原则是先左后右,从前到后,如将动物背部的肩、腰、臀部按左、中、右分为九个区,从左到右标记1-9号,第10图6大鼠、小鼠标记法号不作标记(图6)。(2)10-100号标记法:在上述编号的同一部位,用各种不同颜色的化学试剂擦上斑点,就可代表相应的十位数,例如涂上黄色的苦味酸代表1-10号,涂上红色的中性红代表11-20号,涂上咖啡色的硝酸银代表21-30号,以此类推。三、实验动物的给药方法(一)小鼠1、灌胃法以左手捉住小鼠,使其腹部朝上,右手持灌胃器(以1-2ml注射器上连接细玻璃灌胃管或把注射针头磨钝稍加弯曲制成的灌胃针头),灌胃管长约4-5cm,直径约1mm。操作时,先从小鼠口角将灌胃管插入口腔内,然后用灌胃管向后上方压迫小鼠头部,使口腔与食道呈一直线,再将灌胃管沿着上颚壁轻轻推入食道(图7),当推进约2-3cm时可稍感有阻力,表明灌胃管前部已到达膈肌,此时即可推进注射器进行灌胃,若注射器推注困难,应抽出重插,若误入气管给药,可使小鼠立即死亡,注药后轻轻拔出灌胃管,一次灌药量为0.1-0.3ml/10g体重。2、皮下注射法通常选择背部皮下注射,操作时轻轻拉起背部皮肤,将注射针刺入皮下,把针尖向左右摆动,易摆动说明针尖确已刺入皮下,然后注射药液,拔针时,以手捏住针刺部位,防止药液外漏(图8),注射药量为0.1-0.3ml/10g。3、肌肉注射法小鼠因肌肉较少,很少采用肌肉注射,若有需要可注射于股部肌肉,多选后腿上部外侧,一处注射量不超过0.1ml。图7小鼠灌胃法图8小鼠皮下注射法4、腹腔注射法以左手固定小鼠,腹部向上,注射部位应是腹部的左、右下外侧1/4的部位,因为此处无重要器官。用右手将注射器针头刺入皮下,沿皮下向前推进3-5mm,接着使针头与皮肤呈45度角刺入腹肌,继续向前推进,通过腹肌进入腹腔后感觉抵抗力消失,此时可注入药液,一次注射量为图9小鼠腹腔注射法0.1-0.2ml/10g体重(图9)。5、静脉注射法一般采用尾静脉注射,事先将小鼠置于固定的筒内或铁丝罩内,或扣于烧杯内,使尾巴露出,尾巴于45-50。C的温水中浸泡半分钟或用75%的酒精棉球擦拭,使血管充血,选择尾巴左右两侧静脉注射,如针头确已在血管内,图10小鼠尾静脉注射法推注药液应无阻力,注射时若出现隆起白色皮丘,阻力增大,说明未注入血管,应拔出针头重新向尾根部移动注射。注射完毕后,把尾巴向注射部位内侧折曲而止血。需反复静脉注射时,应尽可能从尾端开始,按次序向尾根部移动注射。一次注射量为0.05-0.1ml/10g体重(图10)。(二)大鼠1、灌胃法用左手以捉拿固定法握住大鼠(若两人合作时,助手以左手捉住大鼠用右手抓住后肢和尾巴),灌胃方法与小鼠相类似,仅采用安装在5-10ml注射器上的金属灌胃管(长6-8cm,直径1.2mm,尖端为球状的金属灌胃管)。一次灌药量为1-2ml/100g体重。2、皮下注射法注射部位可选择背部或大腿外侧,操作时轻轻拉起注射部位皮肤,将注射针刺入注射部位皮下,一次注射药量为1ml/100g体重。3、肌肉注射与腹腔注射法同小鼠。4、静脉注射法清醒大鼠可采用尾静脉注射,方法同小鼠,麻醉大鼠可从舌下静脉给药,也可将大鼠腹股沟切开,从股静脉注射药物。(三)豚鼠1、灌胃法用左手拇指和食指固定豚鼠两前肢,其余手指握住鼠身(两人操作时,助手以左手从动物的背部把后腿伸开,并把腰部和后腿一起固定,用左手的拇指和食指捏住两前肢固定),灌胃管与灌胃方法同大鼠。亦可采用插管灌胃法,用木或竹制开口器,把导尿管或塑料管通过开口器中央的小孔插入胃内,回注射器针栓,无空气抽回时即可注入药液。2、皮下注射法注射部位多选择大腿内侧、背部、肩部等皮下脂肪少的部位。通常在大腿内侧注射,一般需两人合作,一人固定豚鼠,一人握住侧后肢,将注射器针头与皮肤呈45。角方向刺入皮下,确定针头在皮下后注射,注射完毕后以指压刺入部位片刻,以防药液外漏。3、肌肉注射与腹腔注射法同小鼠。4、静脉注射法注射部位可选择前肢皮下头静脉、后肢小隐静脉、耳壳静脉、或雄鼠的阴茎静脉,偶尔亦可用心脏穿刺给药。一般用前肢皮下头静脉穿刺较用后肢小隐静脉成功率高,而后肢小隐静脉下部比较固定,比起明显可见但不固定的上部穿刺成功率要高。也可在胫前部将皮肤切开一小口,暴露出胫前静脉后注射,一次注射量不超过2ml。(四)兔1、灌胃法给家兔灌胃需要两人合作,助手就坐,将家兔的躯体夹于两腿之间,左手紧握双耳固定头部,右手抓住双前肢固定前身。术者将木或竹制的开口器横放在家兔的上下颌之间,固定于舌头之上,然后把合适的导尿管经开口器中小孔,沿上颚壁慢慢插入食道约15-18cm,此时可将导尿管图11家兔灌胃法外口端置于一杯清水中,若无气泡逸出,说明确已插入食道,这时可用注射器注入药液,然后用少许清水冲洗导尿管,灌胃完毕,应先捏闭导尿管外口,拔出导尿管,再取出开口器(图11)。2、皮下、肌肉、腹腔注射法基本方法与鼠类相同,选用的针头可以大一些。给药的最大容量分别为:0.5ml、1.0ml和5.0ml/kg。3、静脉注射法注射部位一般采取耳缘静脉(兔耳外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