动物细胞工程

衡东二中生物组制作：张先华动物细胞工程第一轮复习课件1.动物细胞培养2.核移植技术3.动物细胞融合4.单克隆抗体高考考点解读例1.动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。下图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。由此获得的不正确结论是A.正常细胞与癌细胞的增殖速率相同B.有无血清对正常细胞培养的影响不同C.培养基中补充血清有助于正常细胞的培养D.培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大考点一：动物细胞培养1.概念：从动物有机体中取出相关的组织，将它分散成，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2.动物细胞培养的条件：①无菌、无毒的环境(无菌处理：)②营养（加等）③温度和pH（36.5、7.2—7.4）④气体环境（）单个细胞抗生素动物血清O2和CO23.过程取动物组织块胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎单个细胞配制细胞悬浮液细胞贴壁原代培养分瓶培养传代培养10~50代细胞细胞核型发生变化有癌变特点获得不死性接触抑制4.动物细胞培养技术的应用：⑴生产有价值的蛋白质制品（如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）⑵培养基因工程的受体细胞⑶检测有毒物质⑷用于生理、病理、药理等研究5.植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目原理培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的植物组织培养细胞的全能性固体培养基蔗糖、植物激素植物体快速繁殖培育无病毒植株等动物细胞培养细胞增殖液体培养基葡萄糖、动物血清细胞群体获得细胞或细胞产物等相同点：①无菌无毒条件②合成培养基③适宜的温度和PH考点二：动物体细胞核移植技术和克隆动物1、动物核移植的概念：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移如入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。（克隆动物）2、动物核移植的类型：体细胞核移植（难度高）受体细胞：胚胎细胞核移植MⅡ期的卵母细胞3、动物核移植的过程：高产奶牛（供体）从屠宰场收集牛卵巢，采集卵母细胞，在体外培养到减数第二次分裂中期MⅡ期卵母细胞用物理或化学方法（如电脉冲、钙离子载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等）激活受体细胞，使其完成减数分裂和发育进程生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛将胚胎移入受体（代孕）母牛体内从供体高产奶牛身体的某一部位（如耳）上取体细胞（供体）去核的卵母细胞核移植“多莉羊”的诞生早期胚胎培养苏格兰黑面母羊芬兰白面母羊去核卵细胞卵核乳腺细胞早期胚胎电脉冲融合核4、体细胞核移植技术的应用前景（1）改良动物品种（2）保护濒危动物（3）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白（4）治疗人类疾病，作为异种移植的供体5、体细胞核移植技术存在的问题：a.成功率非常低b.绝大多数克隆动物存在健康问题c.对克隆动物食品的安全性问题也存在争议例：现有A和B两个肉牛品种，A品种牛的细胞组成可表示为A细胞核、A细胞质，B品种牛则为B细胞核、B细胞质。（1）如果要获得一头克隆牛，使其细胞由A细胞核和B细胞质组成，基本步骤是，从A品种牛体内取出体细胞，进行体外培养。然后再从培养细胞中取出_______注入B品种牛的_____卵母细胞，经过刺激和培养后，可形成胚胎，该胚胎被称为_______，将该胚胎移入代孕母牛的______中，通过培育可达到目的。细胞核去核重组胚胎子宫（2）一般来说，要想大量获得这种克隆牛比较难，原因之一是卵母细胞的数量______，为解决这一问题，可以用______激素处理B品种母牛。（3）克隆牛的产生说明具有全能性。克隆牛的性状主要表现品种牛的特征。由A、B两品种杂交得到的牛与克隆牛相比，杂交牛细胞核的遗传物质来自______个亲本，细胞质来自______性亲本，克隆牛和杂交牛的遗传物质组成______（相同，不同）。不足促性腺A两雌不同动物体细胞核考点三：动物细胞融合1、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导融合方法物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒5、过程6、意义：（1）突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。（2）成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段（3）特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。7、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目原理植物体细胞杂交动物细胞融合融合前的处理用途诱导融合方法细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性(酶解法)使细胞形成单个细胞去掉细胞壁分离出原生质体（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株例1:右图为细胞融合的简略过程，请据图回答：（1）若A、B是动物细胞，一般自，然后用，使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不用于植物细胞的手段是，所形成的D称为。动物胚胎或幼龄动物的组织、器官杂种细胞胰蛋白酶灭活的病毒诱导（2）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了。注射后小鼠身体产生了相应的生成了。图中的B是。骨髓瘤细胞抗原免疫反应浆细胞、抗体、记忆细胞（3）若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有种，用来培养的D的细胞应该是。从中选择出它的方法是培养，获得D后，常用的培养方法是体外培养液中培养和。小鼠腹腔增殖3杂交瘤细胞用特定的选择培养基考点四：单克隆抗体1、传统的抗体制备方法及问题：反复注射先把抗原做成乳剂小鼠体内有多种B淋巴细胞可分泌不同抗体-a-b-c-d-a-b-c-d不足：产量低、纯度低、特异性差2、单克隆抗体的概念单个B细胞通过无性繁殖形成的细胞群分泌的化学性质单一、特异性强的抗体。3.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：（1）作为诊断试剂：优点：准确、高效、简易、快速。（2）用于运载药物：制成“生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量特异性强、灵敏度高、产量大。4、制备过程思考：将抗原注射到老鼠体内的目的，两次筛选的目的？例2:制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植A．①②B．①③C．②③D．③④例3：利用细胞工程方法，以SARS病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体B.体外培养单个效应B细胞可以获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体C.将等量效应B细胞和骨髓瘤细胞混合，经PEG诱导融合后的细胞均为杂交瘤细胞D.利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者例4：下图表示用生物工程制备人抗A抗体的过程。请回答下列问题:（1）人的红细胞膜表面有被称为凝集原的特异_____，从免疫学角度看，这种凝集原是_____。糖蛋白抗原（2）图中细胞中1是小鼠体内注入人A型血红细胞后而获得的_____细胞，这种细胞具有产生_____的特点，但难以在体外培养。甲培养皿中培养的细胞2，是从患骨髓瘤的小鼠体内获取的骨髓瘤细胞，这种细胞在体外培养时能____，但不会产生抗体。浆特异性抗体快速大量增殖（3）为了能充分发挥上述两种细胞各自的特点，经特殊处理，在促细胞融合因子的作用下，使两种细胞发生融合，形成图中的细胞3，这种细胞称为。把它在乙培养皿中进行培养，则能产生大量的细胞群，这种方法称为。（4）过程①的主要目的__________________。通过过程②或③的培养方法能产生大量抗体。杂交瘤细胞(单)克隆筛选出能产生单一抗A抗体的杂交瘤细胞群.抗A单克隆