月季的花药培养2

种子有果皮包被着，（胚珠有子房壁包被着）被子植物裸子植物种子无果皮包被着，（胚珠无子房壁包被着）种子花的结构被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分。雌蕊雄蕊雌蕊的结构花粉粒花粉管精子(2个)卵细胞极核（一）、被子植物的花粉发育花丝花药：囊状结构，内有很多花粉粒雄蕊：一、基础知识药隔：由薄壁细胞构成，内有维管束花药花粉囊（4或2）囊壁花粉粒药隔药隔花粉囊囊壁花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞②花粉粒的形成①经历时期：四分体时期、单核期、双核期四分体时期(小孢子)有丝分裂单核靠边期(小孢子)单核居中期(小孢子)花粉母细胞（小孢子母细胞）减数分裂精子精子有丝分裂花粉管细胞核生殖细胞核生殖细胞营养细胞双核期两个精子和一个营养细胞的基因型相同1个花粉母细胞4个小孢子减分有分4个花粉管细胞核4个生殖细胞核有分8个精子(二)、产生花粉植株的两条途径（三）、影响花药培养的因素1、材料的选择①时期－－－初花期②选择合适的花粉发育时期是－－提高诱导成功率的重要因素只有某一个时期对离体刺激敏感。最适合花药培养的小孢子发育时期为单核靠边期措施？？2、培养基的组成花药培养所采用的培养基因植物的不同而有所变化3、其他因素亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响六、实验操作（一）材料的选取②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。①最常用的方法有醋酸洋红法1、方法①醋酸洋红法染色机理醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色。②醋酸洋红的配置2、醋酸洋红法将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。③染色操作3、焙花青—铬钒法将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀①卡诺氏固定液的配制方法将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。②焙花青—铬钒溶液的配制方法花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。③染色操作（二）材料的消毒1、酒精处理①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。②无菌水清洗③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分2、消毒液处理①放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）②无菌水冲洗3~5次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。（三）接种和培养在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成1、剥取花药①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织注意：立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。2、接种①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。3、培养②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的）4、鉴定和筛选5、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：项目相同点不同点植物组织培养技术离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。外植体为体细胞，染色体数无需加倍。花药培养技术取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。