001 马钱子药材检验方法确认方案

马钱子检验方法确认方案类别：检验方法确认文件编号：VAP-FF-2016-001起草人：审核人：批准人：一简介本品为马钱科植物马钱Strychnosnux-vomicaL.的十燥成熟种子。冬季采收成熟果实，取出种子，晒干。苦，温；有大毒。归肝、脾经。通络止痛，散结消肿。用于跌打损伤，骨折肿痛，风湿顽痹，麻木瘫痪，痈疽疮毒，咽喉肿痛。二验证目的马钱子质量标准收载在《中华人民共和国药典》2015版一部,为保证生产出的产品符合检验标准的要求,确认该检测方法是否适用于本公司生产的产品检验。现对质量标准分析方法进行确认验证，确保检验结果的准确可靠。三验证范围3.1鉴别（士的宁、马钱子碱薄层鉴别）3.2含量测定四验证小组成员及职责五确认验证实施步骤5.1为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施5.1.1仪器：己经过校正并在有效期内5.1.2人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器5.1.3对照品：购自陕西省药品检验所5.1.4材料：均符合检验要求5.1.5参考资料《中华人民共和国药典》2015版一部《药品GMP指南》（2010年版）《质量控制实验室与物料系统》5.2鉴别（2）5.2.1试验A：取本品粉末0.5g，加三氯甲烷-乙醇(10：1)混合溶液5ml与浓氨试液0.5ml，密塞，振摇5分钟，放置2小时，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各lOul，分别点于同姓名职务责任人质量部部长（确认小组组长）检验仪器确认总负责；组织相关的设备确认培训；批准确认方案；审批确认报告。QC主管审核确认方案；督促并监督确认的正常进行；审核确认报告，对整个确认验证项目负责。QC按照预定方案进行确认；并做好相关记录；出现异常情况及时汇报和记录；起草确认报告。一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(4：5：0.6：0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。5.2.2试验B：取三氯甲烷-乙醇(10：1)混合溶液5ml与浓氨试液0.5ml，密塞，振摇5分钟，放置2小时，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取士的宁对照品、马钱子碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各lOul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(4：5：0.6：0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。5.2.3确认验证标准:试验A供试品色谱中应检出士的宁、马钱子碱。试验B供试品溶液中不得检出士的宁、马钱子碱。5.2.4检测结果及评价类别检验结果试验A试验B操作人：复核人：日期：年月日结果及评价：马钱子原药材中检出士的宁、马钱子碱，而空白溶剂样中未检出士的宁、马钱子碱，本方法可以作为马钱子鉴别中士的宁、马钱子碱鉴别的指导方法使用。□评价人：评价日期：年月日5.3含量测定照高效液相色谱法测定。5.3.1验证方法色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈0.Olmol/L庚烷磺酸钠与0.02moI/L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值2.8）(21：79)为流动相；检测波长为260nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于5000。对照品溶液的制备取士的宁对照品6mg、马钱子碱对照品5mg，精密称定，分别置1Oml量瓶中，加三氯甲烷逶量使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2ml，置同一10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含士的宁0.12mg、马钱子碱0.1mg)。供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化钠试液3ml，混匀，放置30分钟，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷液，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液3ml，置lOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。空白溶液的制备取氢氧化钠试液3ml，置具塞锥形瓶中，放置30分钟，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，置水浴中回流提取2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷液，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液3ml，置lOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOul，注入液相色谱仪，测定，即得。5.3.2含量计算A供×C对×稀释倍数公式：含量%=────────────×100%A对×m供5.3.3确认验证标准A供试品溶液应检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰；空白溶液中不得检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰。B连续进供试品6次测定含量，RSD≤2%。5.3.4检测结果及评价A保留时间确认操作人：复核人：日期：年月日B重复性确认次数123456含量项目对照品溶液供试品溶液空白溶液保留时间平均含量RSD操作人：复核人：日期：年月日结果及评价：供试品溶液中检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰；空白溶液中未检出与对照品溶液中士的宁、马钱子碱相同保留时间的色谱峰。连续进供试品6次测定含量，RSD≤2%。本方法可以作为马钱子含量测定的指导方法使用。□评价人：评价日期：年月日六验证总体评价及建议评价人：评价日期：年月日