生药中各类成分及定性定量分析方法

生药中各类成分及定性定量分析Whichcompoundsoccurinherbaldrugs?Howtoqualifyandquantifythesecompounds?一、黄酮类(flavonoids)具有2-苯基色原酮(flavone)结构的化合物OO12346785色原酮OO123467851'4'6'2'5'3'2-苯基色原酮一、黄酮类(flavonoids)O123467851'4'6'2'5'3'ACBC6-C3-C61、结构类型（Structures）OO123467851'4'6'2'5'3'OO黄酮(flavone)黄酮醇(flavonol)二氢黄酮(dihydroflavone)二氢黄酮醇(dihydroflavonol)OOOHOOOH异黄酮(isoflavone)二氢异黄酮(dihydroisoflavone)查耳酮(chalcone)橙酮(aurones)OOOOOOHOOCH黄烷(flavanes)花色素(anthocyanidins)双黄酮(biflavone)[]2OOOO+2、黄酮类的分布与活性(distribution&bioactivity)•豆科：葛根、甘草、槐米、大豆•唇形科：黄芩•菊科：水飞蓟、红花、苍耳子•鸢尾科：射干、鸢尾•小檗科：淫羊藿•香蒲科：蒲黄•松科、柏科、银杏科：银杏叶（双黄酮）3、理化性质(physico-chemicalproperties)性状：结晶性固体颜色：黄色，与分子中交叉共轭体系及助色团类型、数目、及取代位置有关溶解度:苷易溶于热水，能溶于水、醇、碱水;苷元易溶于醇、EtOAC、乙醚、碱水酸碱性酸性，因有酚-OH7，4’-二-OH7或4’-OH一般-OH5-OHNaHCO3Na2CO31％NaOH5％NaOH微弱碱性(吡喃环上的1-位氧原子的未共用电子对)OO74’5••HCl-Mg还原反应：生药粉末醇提滤液橙红-紫色金属盐络合反应：邻二酚羟基；3-羟基，4酮基；5-羟基，4酮基镁盐、铝盐、锆盐、铅盐反应有色络合物HCl、Mg粉显色反应Bright-yellowcomolescompoundOOOOOOAl3+Al3+4、黄酮类主要定量方法（Majorquantitativemethods）•总黄酮测定（UV法）原理：黄酮类化合物常可与某些试剂（如硝酸铝和亚硝酸钠等）形成稳定的有色络合物•应用：紫外-可见分光光度法（山楂叶中总黄酮-药典方法）药材提取物＋亚硝酸钠＋硝酸铝＋氢氧化钠500nm处测定4、黄酮类主要定量方法（Majorquantitativemethods）•单体黄酮测定•薄层扫描法(TLCS)•高效液相色谱法（HPLC）•对照品芦丁(rutin)(1)；金丝桃苷(hyperoside)(2)；木犀草素-7-O-β-D-半乳糖苷(luteolin-7-O-β-D-galactoside)(3)；忍冬苷(lonicerin)(4)；tricin-7-O-β-D-glucopyranoside(5)；chrysoeirol-7-O-neohesperidoside(6)；tricin-7-O-neohesperidoside(7)和槲皮素(quercetin)(8)1OHHGlc(6-1)rhaH2OHHGalH3OHHHGal4OHHOHGlc(6-1)rha5OMeOMeHGlc6OMeHHGlc(2-1)rha7OMeOMeHGlc(2-1)rhaR1R2R3R48OHHOHHOOR3R4OOHR1OHR2•应用：HPLC法测定金银花中木犀草苷和芦丁min01020304050mAU02040608010012345678min01020304050mAU020406080100120123478AB金银花黄酮类化合物色谱图(A)对照品;(B)L.japonica二、蒽醌类(anthraquinones)蒽醌(anthraquinones)1、结构类型（Structures）氧化蒽酚(oxanthranol)蒽酚(anthranol)二蒽醌(dianthraquinones）二蒽酮(dianthrone)蒽酮(anthrone)12346785OOOOHOHOOOOOOHOOCH3OHOHH3COH2、蒽醌苷的分布与活性(distribution&bioactivity)蓼科：大黄、何首乌、虎杖豆科：番泻叶、决明子百合科：芦荟茜草科：茜草、巴戟天•颜色：多显黄色或橙红色，多具荧光•性状：结晶体，具升华性•溶解度：苷元溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿，几不溶于水；苷易溶于水、稀醇,可溶甲醇、乙醇，难溶于苯、乙醚等。3、理化性质(physico-chemicalproperties)•酸性：酸性强弱与酚羟基数目及位置有关-COOH（NaHCO3）2个以上β-酚OH（Na2CO3）1个β-酚OH（1%NaOH）2个以上α-酚OH（5%NaOH）Borntrager反应含蒽醌的乙醇溶液+碱水溶液红色溶液黄色+乙醚振摇分取醚层，乙醚层黄色水层红色，醚层无色H++碱水•鉴别反应醋酸镁络合反应样品乙醇液滴于滤纸上喷0.5%Mg(Ac)2–MeOH试液显色△4.蒽醌衍生物主要定量分析方法•总蒽醌:UV法测定原理：与醋酸镁络合反应•应用：UV法测定番泻叶中总番泻苷含量药材番泻苷提取物FeCl3HCl△△乙醚提取物0.5%Mg(Ac)2–MeOH515nm4.蒽醌衍生物主要定量分析方法•单体蒽醌:薄层扫描法和高效液相色谱法OOCOOHOOHCOOHOglcglcHHOHsennosideAsennosideBOOCOOHOOHCOOHOglcglcHHOH番泻叶中番泻苷A和B的色谱图1.结构类型•三萜皂苷（triterpenoidsaponins）：皂苷元为30个碳原子组成的三萜类衍生物(酸性皂苷)1235789101112131415161718192021222325262728293024HOHHHR1R2五环三萜(pentacyclictriterpenoids)四环三萜(tetracyclictriterpenoids)123578910111213141516172046HOOHHHRHHO三、皂苷类(saponins)•甾体皂苷(steroidalsaponins)甾体皂苷的皂苷元由27个碳原子组成(中性皂苷)OOABCDFE123578111215174621222324252720螺甾烷醇(spirostanol)型异螺甾烷醇(isospirostanol)型呋甾烷醇(furostanol)型变形螺甾烷醇(pseudo-spirostanol)型2.皂苷的分布与活性•甾体皂苷：百合科（麦冬、知母）、薯蓣科•三萜皂苷：五加科（人参、三七）、豆科（甘草、黄芪）、桔梗科（党参、桔梗）、葫芦科（土贝母、丝瓜根）、石竹科（太子参）、鼠李科（酸枣仁）3.皂苷的理化性质•吸湿性：多为白色的无定形粉末，具吸湿性。•溶解性：可溶于水、甲醇、乙醇，不溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂;易溶于水饱和的丁醇或戊醇。•泡沫试验•醋酐-硫酸反应(Liebermann-Burchard反应)•鉴别反应4.皂苷主要定量分析方法•总皂苷:《中国药典》用重量法测定桔梗中三萜总皂苷。4.皂苷主要定量分析方法•单体皂苷：HPLC-UV：人参中三萜皂苷类成分人参皂苷Rg1、Re、Rb1的测定，检测波长为203nm；重楼中重楼皂苷I、II的测定，检测波长为210nm。HPLC-ELSD：黄芪中三萜皂苷类成分黄芪甲苷；知母中甾体皂苷类成分菝葜皂苷元。山银花中皂苷类成分的高效液相色谱分析R1R21ara(2-1)rha(3-1)glc(4-1)glcglc(6-1)glc2ara(2-1)rha(3-1)glcglc(6-1)glc3ara(2-1)rhaglc(6-1)glc4Hglc(6-1)glc5ara(2-1)rha(3-1)glc(4-1)glcH6ara(2-1)rha(3-1)glcH7ara(2-1)rhaH色谱柱：ZorbaxSB-C18(2504.6mm，5.0µm)；柱温：25℃；流动相：A乙腈-醋酸(95:0.5)，B0.5%醋酸；梯度洗脱：29%A(0-10min)，29-46%A(10-25min)，46%A(25-30min)；检测器：蒸发光散射检测器；漂移管温度：106℃；氮气流速：2.6L/min。R1OCOOR2CH2OHmin01020mAU406080100A1234567min01020mAU406080100A1234567min01020mAU406080100B1234567min01020mAU406080100B1234567山银花中皂苷类成分的高效液相色谱图A:混合对照品B:山银花L.confusa1.生物碱结构类型NHNONHH3CNNNHNNHNN吡咯烷类(pyrrolidine)吡啶类(pyridine)喹啉类(quinoline)异喹啉类(isoquinoline)喹唑酮类(quinnazolidone)吲哚类(indole)莨菪烷类(tropane)亚胺唑类(imidazole)嘌呤类(purine)四、生物碱类(alkaloids)2.生物碱的分布•毛茛科：乌头、黄连•防己科：防己、北豆根•罂粟科：罂粟、延胡索•茄科：蔓陀罗、洋金花•百合科：百合、贝母•豆科：山豆根、苦参黄连素（小檗碱）抗菌毛果芸香碱治疗青光眼山莨菪碱（654－2）抗胆碱高三尖山酯碱抗白血病长春新碱抗肿瘤延胡索乙素镇痛苦参碱抗癌利血平降压石杉碱甲抗老年痴呆秋水仙碱抗痛风麻黄碱平喘吗啡镇痛。。。。。。AlkaloidsEffectOOHONCH3HHHO3.生物碱理化性质•多数生物碱为结晶状固体,一般无色;•多数生物碱具左旋光性;•多数生物碱具碱性。•溶解度：游离生物碱极性较小，不溶或难溶于水，能溶于氯仿、乙醚、苯、丙酮、乙醇等有机溶剂，也能溶于稀酸的水溶液而生成盐类。生物碱盐类易溶于水和乙醇，不溶或难溶于有机溶剂。•生物碱的沉淀反应碘化铋钾：生物碱+Dragendorff试剂（BiI3KI）桔红、红棕↓碘化汞钾:生物碱+Mayer试剂(HgI2·KI)白、淡黄↓贝母生物碱薄层色谱图1、2阴性对照3.西贝素苷对照品4.西贝素对照品5.样品9907166.样品9907187.样品9907208、9伊贝母药材对照Ⅰ:展开系统为乙酸乙酯：丙酮：甲酸：水（5：3：0.5：1）Ⅱ：展开系统为氯仿-甲醇-水（40：10：1）III罂粟壳薄层色谱（1-11罂粟壳）展开剂：甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（20：20：3：1）显色：依次喷碘化铋钾试液和亚硝酸钠试液吗啡可待因罂粟碱4.生物碱含量测定•总生物碱：酸性染料比色法。酸碱滴定法，如《中国药典》对制川乌中酯型生物碱的测定。4.生物碱含量测定•单体生物碱：薄层扫描法：两面针生物碱测定--《中国药典》高效液相色谱法:通常采用离子对色谱或离子抑制色谱法贝母生物碱的高效液相色谱分析对照品：贝母辛（peimissine）、鄂贝啶碱（ebeiedine）、去氢鄂贝啶碱（ebeiedinone）、湖贝甲素（hupehenine）、异浙贝甲素（isoverticine）、贝母素甲（verticine）、贝母素乙（verticinone）和西贝素（imperialine）贝母生物碱高效液相色谱图min051015202530mAU200225250275300325350375A46123578ISmin051015202530mAU200225250275300325350375B12356ISmin051015202530mAU200225250275300325350375CIS41对照品浙贝母伊贝母五、强心苷类(cardiacglycosides)•是一类对心肌有兴奋作用，具有强心生理活性的甾体化合物1.结构类型1918142223OOHOHOABC强心甾烯型蟾