土壤中分解尿素细菌的分离与计数经典练习

试卷第1页，总5页土壤中分解尿素的细菌的分离与计数班级姓名1．能够测定样品活菌数的方法是（）A．稀释涂布平板法B．直接计数法C．重量法D．平板划线法2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水3．分离土壤中分解尿素的细菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落，影响最大的是A．制备浸出液的土壤取自土壤的表层B．涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌C．牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源D．接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒4．下列有关微生物培养的叙述，不正确的是()A．测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数B．在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌C．酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源5．下列关于分解尿素的细菌，说法正确的是（）A．以尿素作为唯一碳源B．能分解尿素的原因是能合成并分泌蛋白酶C．环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性D．以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红6．关于生物技术实践中的有关检验，不正确的是（）A．在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸和重铬酸钾的混合液B．在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是用一组不接种或接种无菌水的培养基与接种培养物试卷第2页，总5页的培养基一起培养C．检验以尿素为唯一氮源的培养是否分离出了分解尿素的细菌，方法是在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，则说明分离成功D．检验胡萝卜素纯度的方法是纸层析法，原理是不同的色素分子在层析液中的溶解度不同，故随层析液在滤纸上扩散的速度不同，若样品中有杂质，则会出现不同的色素点（带）7．请选出下列正确的操作步骤（）①土壤取样②称取10g土壤取出加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中③吸取0.1ml进行平板涂布④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度8．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制选择培养基时（）A．葡萄糖在培养基中越多越好B．尿素分解菌有固氮能力，故培养基中只需无机氮C．尿素在培养基中越少越好D．尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为化合态氮9．下列就“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的有关叙述，不正确的是A.经高压蒸汽灭菌的培养基所倒平板和接种后培养时的平板均要倒置B.同一稀释度下至少要涂布三个平板并且要培养到菌落数稳定时计数C.在稀释度足够高时，所形成的单个菌落中所有细胞的遗传信息必定相同D.在相同培养条件下，未接种的培养基表面无菌落生长说明培养基没有被杂菌污染10．在以尿素作为唯一氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出()A．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌B．分解尿素的细菌、大肠杆菌、放线菌C．分解尿素的细菌、霉菌、放线菌D．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌11．下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是试卷第3页，总5页A．3号试管中的菌落稀释倍数为103倍B．4号中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号的10倍C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高123456789101112．有些科学家欲从污染的土壤中分离筛选出能够高效降解原油的菌株进行大规模培养并应用。请回答：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。筛选过程中，虽然土壤中微生物含量非常丰富，但在此培养基上长出的微生物菌落非常少，甚至有时一个培养皿中一个菌落都没有，这是因为。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即。（3）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有。13．在农业用地中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度一定，该除草剂的培养基不透明）。（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行________处理。（2）要从________的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基的特点是：________体培养基且以________。若需要调节培养基pH，应该在各种成分都溶化后且分装________（填“前”或“后”）进行。对培养基进行灭菌，常采用的方法是________。（3）若对活菌进行计数，常用的接种方法为_____________。（4）培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。试卷第4页，总5页（5）为了计数微生物的数量，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0．1mL，培养后菌落数分别为155、160、176、149个，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为___________。14．（10分）每生物兴趣小组为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：KH2PO41．4gNa2HPO42．1gMgSO4·7H2O0．2g葡萄糖1g尿素10g琼脂15g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL（1）简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂，细菌合成的________将尿素分解为________，pH升高，使指示剂变为红色。（2）培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌，这种培养基属于________培养基。（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的________和________，实验中需要振荡培养，原因是______________。（4）下图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。通常还可以________方法分离到一个细胞繁殖形成的菌落（5）关于上图的操作方法和结果，叙述正确的是________。A．操作时要将接种环放在火焰上灼烧灭菌B．划线操作须在火焰旁进行C．多次划线后培养才可以分离到一个细胞繁殖形成的菌落D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌16．（10分）：有2位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；乙同学在该浓度试卷第5页，总5页下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，并且取平均值163作为统计结果。请评价这两位同学的实验结果的合理性。（1）甲同学________，原因是____________________________________________。（2）乙同学________，原因是___________________________________________。（3）正确做法是________________________________________________________。（4）稀释涂布平板法所用培养基按物理性质划分属于________培养基；（5）倒平板前保证培养基无菌的常用方法是_________________________________。本卷由系统自动生成，请仔细校对后使用，答案仅供参考。答案第1页，总7页参考答案A．A．C．B．D．A．C．D．C．CB12．（1）原油选择大部分微生物无法分解原油（2）平板划线法稀释涂布平板法（3）干热灭菌法高压蒸汽灭菌法灼烧灭菌13．（1）稀释（2）富含（或长期使用）该除草剂固除草剂为唯一氮源前高压蒸汽灭菌（3）稀释涂布平板法（4）培养基中缺少这些细菌可利用的氮源（5）1．6×10914．（10分）（1）酚红脲酶氨（2）选择（3）尿素葡萄糖为目的菌提供氧气（4）平板划线聚集的菌种逐步稀释分散到固体培养基稀释涂布平板法（5）ABCD参考答案1．A【解析】利用稀释涂布平板法能够不影响生活的情况下将细菌个体从固体培养基上分离出来，并可以繁殖形成菌落，可根据菌落数测定出测定样品活菌数，故稀释涂布平板法可用于测定样品活菌数。答案是A。【考点定位】测定某种微生物的数量【名师点睛】知识拓展：统计细菌数量的方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数，在统计菌落数目时，采用（平板划线、稀释涂布平板法）来培养细菌。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个细菌，但菌落数往往比活菌的试剂数目低，为了保证结果准确，一般选择菌落数在．30-300的平板进行计数。另一种方法是直接计数法，这种方法要借助显微镜，且统计的数目也包括死亡的细菌。2．A【解析】能合成脲酶的细菌才能分解尿素,选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够本卷由系统自动生成，请仔细校对后使用，答案仅供参考。答案第2页，总7页生长。该选择培养基应只含尿素一种氮源并能让该类细菌生长,需有碳源。分离微生物要用固体培养基;分解尿素的细菌属于异养微生物,需要加葡萄糖作为碳源。B无氮源、C无碳源,D中牛肉膏、蛋白胨可作为氮源。答案是A。【考点定位】微生物的分离和培养3．C【解析】试题分析：土壤的表层含有细菌较少，但仍含有分解尿素的细菌，经过培养可以得到尿素分解菌，A错误；未灼烧灭菌的涂布器虽含有杂菌，但在以尿素为唯一氮源的培养基上不能生存，B错误；分离土壤中分解尿素的细菌应以尿素为唯一氮源，牛肉膏蛋白胨培养基中含有氮，实验不能得到分解尿素细菌的单菌落，C正确；未用酒精棉进行消毒的双手，可能将杂菌带入培养基，但杂菌在以尿素为唯一氮源的培养基上不能生存，D错误。考点：本题考查微生物培养和利用的相关知识，意在考查考生能理解相关实验的原理和方法，把握材料和试剂的选择，熟练完成相关实验的能力。4．B【解析】试题分析:对微生物进行灭菌就等于是直接杀死了微生物，也就没有培养的必要了。考点：本题考查微生物培养方面的相关知识，属于识记类考题，难度不大。5．D【解析】试题分析：由于只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，所以分离分解尿素的细菌时以尿素作为唯一氮源，A项错误；分解尿素的细菌能分解尿素的原因是能合成并分泌脲酶，B项错误；该细菌产生脲酶是受基因控制的，而不是环境中的尿素诱导的，C项错误；细菌合成的脲酶将尿素分解成的氨会使培养基的碱性增强，pH升高，所以在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养该细菌后会使酚红指示剂变红，但如果培养基中添加了酸碱缓冲剂，则不会使酚红指示剂变红，D项正确。考点：本题考查分解尿素的细菌的分离的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。6．A【解析】本卷由系统自动生成，请仔细校对后使用，答案仅供参考。答案第3页，总7页试题分析：先加硫酸形成酸性环境，再加重铬酸钾溶液检测酒精，A错。如果培养基污染，则不接种或接种无菌水的培养基会生成菌落，否则没有，B正确。细菌分解尿素生成氨，培养基PH上升，酚红指示剂变红，C正确。检验胡萝卜素纯度的方法是纸层析法，色素在层析液溶解度不同，扩散速度不同而分离开来，与标准样品比较，，若样品中有杂质，则分离后会出现不同的色素点（带），D