第四章_中药制剂的含量测定

中药制剂的含量测定大纲要求掌握中药制剂含量测定的目的特点掌握含量测定样品处理的作用掌握方法学考察试验内容熟悉色谱法分离净化样品常用填料及其特点用适当的化学方法或仪器分析方法对制剂中有效成分或有效部位进行的定量分析。以其测定结果是否符合药品标准的规定来判断药品的优劣，是控制和评价药品质量的重要方法。中药制剂含量测定的定义中药制剂含量测定的特点含量测定内容中药制剂化学药品对象不同供试品溶液制备待测成分确定组成及成分复杂方法繁琐，大多需要净化分离先根据中医药理论选择药味，再综合选择待测成分成分单一方法简单成分明确，一般选择主要成分中药制剂与化学药品含量测定区别1977198519901995200020050.00%10.00%20.00%30.00%40.00%50.00%60.00%70.00%80.00%中药及其制剂的含量测定所占比例1977198519901995200020050.00%10.00%20.00%30.00%40.00%50.00%60.00%70.00%80.00%中药及其制剂的含量测定所占比例第一节含量测定样品的处理作用：将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分析测定的稳定试样。除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准确度。富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选择性。使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。步骤：样品的粉碎样品的提取样品的分离净化第一节含量测定样品的处理目的：1.保证所取样品均匀而有代表性，提高测定结果的精密度和准确度。2.加速被测定组分的提取完全。样品的粉碎第一节含量测定样品的处理注意：1.避免过细2.避免样品受污染3.避免粉尘飞散及挥发性成分的损失4.避免丢弃不易通过筛孔的部分颗粒设备：粉碎机、研钵、高速匀浆机、玻璃匀浆器细粉：全部通过5号筛（80目），并含能过6号筛（100目）不少于95％的粉末样品的粉碎第一节含量测定样品的处理冷浸法回流提取法连续回流提取法超声法超临界流体提取法关键——提取完全样品的提取第一节含量测定样品的处理称取一定量样品置于带塞容器内，摇匀后放置，浸泡提取，溶剂用量为样品重量的10～50倍，并称重。浸泡时间12～24小时，浸泡期间应注意经常振摇。取浸泡后的溶液测定有效成分。冷浸法样品的提取第一节含量测定样品的处理浸泡提取法中供试品的制备方式1.部分测定法（等量法）：即将浸泡后的溶液，用适宜滤器滤过，精密量取一定体积，进行测定注：此法不适宜挥发性较大的提取溶剂冷浸法样品的提取第一节含量测定样品的处理2.全部测定法（即总量测定法）：将浸泡后的溶液滤过，滤渣充分用溶剂洗涤至提取完全，合并滤液及洗液，浓缩或蒸干，残留物用另一溶剂溶解，定量转入量瓶中，稀释至刻度，摇匀，进行测定注意：转移完全冷浸法样品的提取第一节含量测定样品的处理灵宝护心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量测定取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油醚（60-90℃）4ml，浸泡1小时，滤过，滤渣及滤纸挥去溶剂，放回锥形瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液（1→10）15ml，摇匀，密塞，称定重量，浸泡12小时，再称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（1→10）补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。特点优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少缺点：费时（12-24h）、费溶剂（10-50倍）冷浸法样品的提取第一节含量测定样品的处理将冷浸法中的带塞容器换成回流装置，用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热回流提取，其余操作方法同冷浸法。万应胶囊（黄连等）中盐酸小檗碱测定在HCl-70%乙醇溶液，加热回流1h回流提取法样品的提取第一节含量测定样品的处理回流提取法样品的提取第一节含量测定样品的处理1、提取效率高于冷浸法；2、每次提取时间为0.5～2小时，直至提取完全为止。1、提取杂质较多；2、不适于对热不稳定或具有挥发性的成分。优点缺点第一节含量测定样品的处理样品置索氏提取器中，利用遇热可以挥发的溶剂进行反复提取（相当于总是在使用新鲜溶剂提取），一般提取数小时方可完全。保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定+甲醇，加热回流至提取液无色为止连续回流提取法样品的提取•优点：1）无需过滤，提取完全后取下虹吸回流管，就可回收溶剂，再用适宜溶剂溶解，定容，进行测定。2）提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少。•缺点：受热易分解的成分不宜使用。第一节含量测定样品的处理连续回流提取法样品的提取第一节含量测定样品的处理样品置适当的容器中，加入提取溶剂，放入超声振荡器（超声波清洗器）中进行提取。一般样品30分钟内即可完成，最多不超过1小时。保济丸（厚朴等）中厚朴酚测定+石油醚（30-60℃），超声处理（功率500W，频率33kHz）2次，每次30min超声提取法样品的提取•优点：超声提取能使样品粉末更好地分散于溶剂中提高提取效率和提取速度。（超声的助溶作用）•缺点：促使化学反应发生（如氧化还原反应、大分子化合物的降解和解聚合作用等）。※注明超声波的频率、功率，以保证重现性第一节含量测定样品的处理超声提取法样品的提取以超临界流体作溶剂的样品提取新技术。当压力和温度超过气体的临界点时所形成的单一相态超临界流体——特殊的物质状态密度~液体→溶解能力强粘度~气体→传质快，有利于待测组分的扩散表面张力几乎为0→渗透性好密度受压力、温度的影响大→改变对溶质的溶解能力第一节含量测定样品的处理超临界流体萃取法（SFE）样品的提取•最常用的SF是CO2，它的性质稳定，使用安全，价格低廉，临界点低（Tc=31℃和Pc=7.4MPa），易于操作。•加入甲醇、氯仿、苯等改变极性→提取不同极性的成分第一节含量测定样品的处理超临界流体萃取法（SFE）样品的提取SFE具有优点：速度快萃取效率高、选择性较高、节省溶剂、可避免使用易燃，有毒的有机溶剂SFE不仅常用于热不稳定成分或挥发性成分的萃取，而且也越来越多地用于热稳定性成分的萃取。缺点：对设备要求高。第一节含量测定样品的处理超临界流体萃取法（SFE）样品的提取沉淀法蒸馏法液-液萃取法A直接萃取法B离子对萃取法色谱法消化法关键——保留有效成分第一节含量测定样品的处理样品的分离净化原则：从提取液中除去对测定有干扰的杂质，而又不损失被测定成分依据：被测定成分和杂质在理化性质上的差异，结合测定方法的要求第一节含量测定样品的处理样品的分离净化沉淀法原理：它是基于某些试剂与被测成分或杂质生成沉淀，分离沉淀或保留溶液以得到精制的方法。这种方法须注意：1）过量的试剂若干扰被测组分的测定，则应设法除去；2）大量杂质以沉淀形式除去时，被测成分不应产生共沉淀而损失；3）被测组分生成沉淀时，其沉淀经分离后可重新溶解或直接用重量法测定。复方益母草口服液中水苏碱的含量测定利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。第一节含量测定样品的处理样品的分离净化蒸馏法原理：利用某些被测成分具有挥发性,收集馏出液进行含量测定.目前以水蒸气蒸馏法应用较多。1）可分为共水蒸馏法（即直接加热法）、通水蒸汽蒸馏法和水上蒸馏法。如中药制剂中的挥发油，某些小分子生物碱（麻黄碱、槟榔碱）及丹皮酚等，都可用蒸馏法提取和分离净化。2）为了使挥发性成分更完全地蒸馏出来，有时也可用盐析作用，即在蒸馏液中加入一定量的无机盐，常用NaCl、NaSO4、MgSO4等。例六味地黄颗粒中丹皮酚含量测定取本品约2g，研细，精密称定，用水蒸汽蒸馏，收集馏出液约450ml，置500ml量瓶中，加水稀释至刻度。…274nm波长处测定吸收度…。直接萃取法原理：利用试样中被测成分与干扰成分在有机溶剂中的溶解度不同，通过多次萃取来达到分离净化的目的。萃取剂的选择如苯、氯仿或乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等多次萃取（3-4次）调整水相酸度，提取有机酸、有机碱(非离子化)第一节含量测定样品的处理样品的分离净化液－液萃取法常用的是有机溶剂直接萃取法和离子对萃取法。BH+（水相）+In-(水相)BH+·In-（水相）BH+·In-（有机相）适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取（生物碱）水相酸度的控制离子对试剂的选择离子对萃取法原理：在适当pH中，某些有机酸（碱）性物质形成的离子与带相反电荷的离子定量地结合成为弱极性的离子对，易溶于有机溶剂，使之萃取分离。第一节含量测定样品的处理样品的分离净化液－液萃取法溴百里酚蓝溴甲酚绿分离的原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱按操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱微柱色谱，也称固相萃取或液—固萃取（LSE）柱的大小：长5～15cm，内径0.5～1cm第一节含量测定样品的处理样品的分离净化色谱法当目标物与填料极性相似时，样品流过柱后，目标物在填料上有较好的保留，而极性与填料相差较远的杂质直接流出，再用适当洗脱液把目标物洗脱、收集，分析；或使杂质保留于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。中药制剂教研室硅胶、氧化铝键合相硅胶大孔树脂聚酰胺硅藻土、纤维素离子交换树脂第一节含量测定样品的处理样品的分离净化色谱法——柱色谱常用的填料第一节含量测定样品的处理样品的分离净化色谱法——硅胶、氧化铝硅胶作用机制：溶质在吸附剂表面的极性吸附作用。非极性或极性低的杂质先被洗出色谱柱，再用适当极性的溶剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。特点：通常适于酸性和中性物质的分离；如分离碱性物质，可在展开剂中加入少量稀碱。如测定益母草浸膏中总生物碱含量时，使用中性氧化铝柱，以乙醇洗脱生物碱，黄酮类成分则保留在柱上。第一节含量测定样品的处理样品的分离净化色谱法——硅胶、氧化铝氧化铝分离机制：溶质在吸附剂表面的极性吸附作用碱性氧化铝适于碱性和中性物质的分离酸性氧化铝适于分析酸性和中性物质中性氧化铝能将黄酮类成份吸附在柱上，可用于生物碱、苷的分离。八宝坤顺丸中国药典2005年版一部，P311对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备取重量差异项下的本品，剪碎，取约2g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml，通过中性氧化铝柱（100~200目，2g，内径1cm，用50%甲醇湿法装柱），收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脱，收集洗脱液至近刻度，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液10ul与供试品溶液10~15ul，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每丸含白芍以芍药苷计，不得少于2.6mg。第一节含量测定样品的处理样品的分离净化色谱法——键合相硅胶借助化学反应方法将固定液的官能团键合在硅胶的表面而构成键合相硅胶。有机硅烷与硅胶表面化学键合反应，形成的-Si-O-Si-C-键是对溶剂、热和化学稳定的结构。常用的有十八烷基键合相键合相硅胶（简称C18或ODS）第一节含量测定样品的处理样品的分离净化色谱法——大孔树脂极性大孔树脂：为丙稀酰胺聚合物，对极性化合物有相对强的吸附力非极性大孔树脂：为苯乙烯和二乙烯苯的共聚物，对非极性水溶性成分有吸附力特点：表面积大，传质速率较高，具有不同的极性及适于吸附较大分子测定复方归芪剂中的黄芪甲苷用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再用30%乙醇洗脱黄芪甲苷。第一节含量测定样品的处理样品的分离净化色谱法——聚酰胺机制：主要通过与溶质形成氢键而产生吸附作用用于含酚、酸、醌类药物样品液的净化分离。测定黄酮时，用样品的乙醇提取液上聚酰胺柱，水洗去部分杂质，以95%乙醇洗脱总黄酮后测定。第一节含量测定样品的处理样品的分离净化色谱法——硅藻土、纤维素亲水性填料机制：分配作用应用：多以水基质液为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相，较亲脂的成分从固定相转移到流动相，而被洗脱。萃取率