苯乙胺类药物分析(2)

第七章苯乙胺类药物的分析R1CHCHNHR2OHR3第一节、苯乙胺类药物的基本结构*R1:苯环的3，4位上有2个邻位的酚羟基，属于儿茶酚胺，R2,:H、CH3、异丙基、叔丁基等，R3：H、CH3含H药物居多。HOHOCOHHCH2NHCH3肾上腺素常见的苯乙胺类药物HOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOHOHHHHOHOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素盐酸多巴胺ClH2NClCHOHCH2NHC(CH3)3HCl盐酸克仑特罗H2SO42HOCH2OHCHOHCH2NHC(CH3)3硫酸沙丁胺醇盐酸麻黄碱盐酸氨溴索结构与性质1.酚羟基，易氧化变色，可发生三氯化铁反应，可与金属离子配位成色,易被空气、光、热氧化，色泽变深，碱性溶液下易变色。2.具有脂烃氨基侧链，氨为仲氨氮，显弱碱性。3.手性碳原子，具旋光性，可用于分析鉴别。4.溶解性游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水5.紫外吸收特性具有苯环特征吸收带，根据吸收波长进行定性、定量。6.取代基：苯环上的取代基，如具芳伯氨基的盐酸克仑特罗，盐酸氨溴索；可用重氮化—偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。第二节鉴别试验1.三氯化铁反应（表7-2）3+3+eeF碱性F氧化酚羟基配位显色紫色或紫红色绿色2.氧化反应：多数具有酚羟基，易被I2，H2O2，K3Fe（CN）6等氧化而呈现不同颜色。Chp（2010）肾上腺素，盐酸异丙肾上腺素，重酒石酸去甲肾上腺素，均利用该反应作为定性鉴别反应。放置聚合肾上腺素红棕色多聚体酸性，I2氧化肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素红Na2S2O3淡红色HOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOHOHHHHO无色酸性，I2氧化酸性，I2氧化3.与甲醛—硫酸反应酚羟基取代的药物，可与甲醛在硫酸中反应，形成具有醌式结构的有色化合物。颜色:红色或紫红重酒石酸去甲肾上腺素:玫瑰红-橙红-深棕色甲醛反应硫酸介质肾上腺素药物醌式有色物质4.芳环侧链有氨基醇-双缩脲反应双缩脲试剂：0.1g/mlNaOH试剂A,0.01g/mLCuSO4试剂B检测蛋白质等物质的特异性反应，与双缩脲试剂作用,产生紫色反应.ChP(2010):鉴别麻黄碱和盐酸去氧肾上腺素盐酸麻黄碱NaOH+CuSO4紫色乙醚水层蓝色乙醚层紫红色盐酸去氧肾上腺素NaOH+CuSO4紫色乙醚乙醚层不显色水层蓝色水层紫色5.与亚硝基铁氰化钠反应（Rimini反应）脂肪族伯胺的专属反应红紫色丙酮亚硝基铁氰化钠重酒石酸间羟胺NaHCO3HOCHOHCHCH3NH2CH(OH)COOHCH(OH)COOH6.UV与IR(表7-3）紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。ChP收录利用UV鉴定苯乙胺类拟肾上腺素（表7-3）IR是专属性鉴别，作为此类药物的鉴别方法之一。紫外特征吸收药物溶剂浓度(mg/ml)λnm(nm)吸收度(A)重酒石酸间羟胺水0.10272盐酸异丙肾上腺素水0.052800.50盐酸多巴胺0.5%硫酸0.03280盐酸芬氟拉明0.1mol/L盐酸0.25263,270盐酸苯乙双胍水0.012340.60盐酸克伦特罗0.1mol/L盐酸0.03243,296硫酸沙丁胺醇水0.08274盐酸伪麻黄碱水0.50251,257,263红外特征吸收：上述药物还可采用红外吸收光谱鉴别。第三节、杂质检查(p226-228)杂质来源生产过程中存在酮体氢化还原制备工艺，氢化不完全易引入酮体残存。检查方法UV法（含量测定法）（一）酮体的检查检查原理利用酮体在310nm波长处有最大吸收，而药物本身在此波长处几乎没有吸收，规定一定浓度溶液在310nm波长处的吸收度限制酮体的量。药物检查的杂质溶剂样品浓度(mg/ml)测定波长(nm)A肾上腺素肾上腺酮HCl(9→2000)2.0310不得过0.05盐酸去氧肾上腺素酮体水2.0310不得大于0.20重酒石酸去甲肾上腺素去甲肾上腺酮水2.0310不得大于0.05盐酸异丙肾上腺素酮体水2.0310不得大于0.15盐酸甲氧明酮胺水1.5347不得大于0.06紫外分光光度法检查酮体的条件及要求（二）光学纯度的检查大多数苯乙胺类拟肾上腺素药物分子结构中存在手型碳原子，具有光学活性特征。需要做光学纯度检查。检查方法：比旋度值测定R1CHCHNHR2OHR3＊药物溶剂样品浓度(mg/ml)比旋度（。）肾上腺素HCl(9→2000)20-50.0~-53.5盐酸去氧肾上腺素水20-42~-47重酒石酸去甲肾上腺素水50-10.0~-12.0盐酸麻黄碱水50-33~-35.5盐酸伪麻黄碱水50+61.0~62.5对于手性药物光学纯度检查的最佳方法是实现对映体分离分析，常用色谱法和电泳法。（二）有关物质检查盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇,盐酸特布沙林等药物检查方法：TLCTLC法检查有关物质例：盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇－氯仿－浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查有关双胍取本品1.00g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录ⅤA）试验，精密吸取上述溶液0.2ml，分别点于两张色谱滤纸条(7.5cm×50cm)上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样点直径均为0.5～1cm；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙酯－乙醇－水(6:3:1)为展开剂，展开至前沿距下端约7cm处，取出，晾干，用显色剂（取10％铁氰化钾溶液1ml，加10％亚硝基铁氰化钠溶液与10％氢氧化钠溶液各1ml，摇匀，放置15min，加水10ml与丙酮12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为0.1），参照此色谱带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm，并分剪成碎条，精密吸取甲醇各20ml分别进行萃取后，照分光光度法（附录ⅣA），在232nm的波长处测定吸收度，不得过0.48。检查方法：HPLC法盐酸氨溴索的检查方法:流动相:0.01mol/LNH4H2PO4-乙腈(50:50);柱C18,检测波长:248nm检查方法：HPLC法盐酸氨溴索的检查方法:流动相:0.01mol/LNH4H2PO4-乙腈(50:50);柱C18,检测波长:248nm供试品溶液：1mg/ml对照品溶液：10μg/ml调灵敏度：对照品进样20μl,主峰高为满量程的20%～25%测定：进对照品和供试品各20μl，记录谱图的保留时间是主成分出峰时间的2倍，供试品各杂质峰的面积的和不得大于对照品溶液主峰的面积1/3。第四节含量测定（一）非水溶液滴定法(15种)原料药脂烃胺基侧链，显弱碱性，在水溶液中用酸直接滴定没有明显突跃；在非水酸性溶剂中，能被冰醋酸均化到溶剂醋酸根水平，相对碱强度显著增强。（一）基本原理BH+·A-+HClO4BH+·ClO4+HAHA的存在会干扰反应进行程度，需要采取措施，除去或降低滴定反应产生HA的酸性，可以通过加醋酸或者醋酸汞溶液。（二）一般方法精密称取供试品适量，加冰醋酸10~30ml溶解（可温热，放冷），加各品种项下规定的试液、指示剂1~2滴（或电位滴定法指示终点），用高氯酸滴定液滴定。需做空白试验。（三）问题讨论1.适用范围pKb8~10冰醋酸做溶剂10~12冰醋酸与醋酐混合溶液＞12醋酐做溶剂（三）问题讨论2.酸根影响醋酸介质中，酸性如下：HClO4＞HBr＞H2SO4＞HCl＞HNO3＞H3PO4＞有机酸有机弱碱的盐均用高氯酸滴定BH+·A-+HClO4BH+·ClO4+HA（三）问题讨论3.滴定剂的稳定性非水滴定所用醋酸，具有挥发性，温度和贮存条件会影响滴定剂的浓度。冰醋酸的体积膨胀系数为1.1×10-3/℃药典规定标定时和测定试样时温差超过10℃时，标准溶液应重新标定，若未超过10℃则可根据下式将高氯酸浓度加以校正：（三）问题讨论4.终点指示方法常用电位滴定法和指示剂法结晶紫(或萘酚苯甲醇),蓝绿色(黄绿色)5.其他干扰ChP2010硫酸沙丁胺醇含量测定（二）溴量法盐酸去氧肾上腺素及其注射液、重酒石酸间羟胺反应摩尔比为1∶3HOCHCH2NHCH3OHBr2+3BrBrHOBrCHCH2NHCH3OH+3HBrBr2＋2KI＝2KBr＋I2I2＋2Na2S2O3＝2NaI＋Na2S4O6203.70.0533.393/AaTmMbmgml0100%sTVVFm（）百分含量（三）亚硝酸钠法盐酸克伦特罗分子结构含有芳伯胺基，可用亚硝酸钠法滴定。反应摩尔比为1∶1（四）紫外分光光度法与比色法Ch.p(2010)UV法:盐酸甲氧明注射液,重酒石酸间羟胺注射液比色法盐酸克仑特罗栓，可发生重氮化—偶合反应AnmN测定盐酸克仑特罗盐酸克仑特罗栓乙二胺萘基）（、盐酸氯仿500max1HNaNO2对照法定量盐酸多巴胺测定:显色剂:硫酸亚铁-酒石酸盐测定波长:520nm分子结构中的酚羟基可与Fe2+配位显色（五）HPLC法盐酸肾上腺素注射液、重酒石酸去甲肾上腺素注射液、硫酸沙丁醇片、缓释片、盐酸氨溴口服、片剂、胶囊、缓释胶囊等【硫酸沙丁醇片测定】色谱条件:柱C18,流动相:甲醇-NaH2PO4(pH3.10)(15:85)检测波长:276nmn：大于3000取10片片剂,精密称定。称取其质量，流动相溶解定容至50ml，过滤，取续滤液10ml定容至50ml,得供试液,精密量取20μl进样,得AX.取浓度96μl/ml对照品溶液,同法测定,得AS.第五节体内药物分析盐酸克仑特罗:GC-MS测定1)提取:溶剂萃取(生物样品预处理)2)净化:固相柱,SPE萃取3)测定:GC-MS测定220oC-280oC衍生化:BSTFA(双三甲基硅烷三氟乙酰胺)SIM:(m/z)86,212,262,277例1.能和重酒石酸去甲肾上腺素发生颜色反应的试液为（）A.浓硫酸B.甲醛试液C.氨试液D.甲醛—硫酸试液E.茚三酮试液例2.盐酸异丙肾上腺素的检查项目是（）A.有关物质B.二苯酮C.盐酸D.醛E.酮体