药物分析第二章药物的鉴别试验

药物的鉴别试验Identificationtestofdrug第二章药物的鉴别试验药物的杂质检查药物定量分析与分析方法验证药品检验工作的基本规律BasicregularityofdruginspectionIdentificationtestofdrug鉴别试验的内涵鉴别试验的项目鉴别试验的方法鉴别试验的条件药物的鉴别试验根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或生物学方法来判断其真伪。鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物的鉴别。鉴别试验方法应专属，每个品种一般2～3条。鉴别试验的内涵Testmeaning•ChP(2010)凡例中对药物的鉴别的定义为：鉴别项下规定的实验方法，仅反应该药品某些物理、化学或生物学等性质特征，不完全代表对该药品化学结构的确证。性状项和物理常数确认鉴别项下规定的试验原料药鉴别制剂鉴别鉴别试验的项目Testitems性状（Description）定义：反映药物特有的物理性质，如外观、溶解度和物理常数等。外观溶解度物理常数外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。如二巯基丁二钠的描述为“本品为白色至微黄色的粉末；有类似蒜的特臭”。溶解度：一定程度上反映了药品的纯度。药品在不同溶剂中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。物理常数：用于药品鉴别，反映其纯杂程度。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。性状（Description）熔点性状---固体熔化成液体的温度熔融同时分解的温度自初熔至全熔的一段温度物理常数•ChP(2010)收载三种熔点的测定方法：•第一法测定易碎固体药品•第二法测定不易粉碎固体药品（脂肪酸、石蜡）•第三法测定凡士林或其他易碎物要求报告初熔和终熔的温度比旋度：在一定波长(589.3nm)与温度(20℃)下，偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度。用表示。性状---物理常数CLD20dLD20•例如：维生素C的比旋度测定：取本品，精密称定，加水溶解，并定量稀释成C为0.10g/ml的溶液，依法测定旋光度为+2.05°至2.15°，求=？•吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。中国药典收载是。这两种物理常数可用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。%1cm1E吸收系数吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度摩尔吸收系数溶液浓度ε液层厚度百分吸收系数溶液浓度液层厚度L/mol1cm1cm1ml/g%1%11cmE•A=ECL•E=A/CLC=1%或1mol/L例如盐酸甲氧明“取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释成每1ml含30ug的溶液，照分光光度法，在290nm波长处测定吸收度，吸收系数（为133-141）%11cmE依据：某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊反应或典型的有机官能团反应。中国药典附录收载一般鉴别试验：无机金属盐类、无机酸盐、有机酸盐、丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类等Generalidentificationtest一般鉴别试验无机物有机物阴阳离子的特殊反应酸根名称检验试剂现象反应方程式SO42-BaCl2溶液白色↓加酸不溶SO42-+Ba2+→BaSO4CO32-稀酸，Ca(OH)2气体使石灰水变混CO32-+2H+→CO2↑+H2OCa2++CO32-→CaCO3↓HCO3-稀酸，Ca(OH)2气体使石灰水变混Cl-AgNO3试液白↓溶于氨水不溶稀硝酸Cl-+Ag+→AgCl↓Br-AgNO3试液黄↓微溶氨水不溶稀硝酸Br-+Ag+→AgBr↓阴阳离子的特殊反应离子鉴别方法鉴别原理现象Na+焰色反应光谱主要谱线589nm可见光区鲜黄色（实例见⑧）K+焰色反应光谱主要谱线766nm，769nm紫色（实例见⑧）Ca2+焰色反应光谱主要谱线622nm可见光区砖红色Ba2+焰色反应光谱主要谱线553nm，500nm黄绿色Li+焰色反应光谱主要谱线670nm胭脂红色NH4+NaOH石蕊试液NH4++OH-→NH3↑+H2O有刺鼻气味，湿石蕊试纸变兰有机氟化物样品经氧瓶燃烧法进行有机破坏后，用水和碱氢氧化钠溶液吸收为无机氟化物，与茜素氟蓝和硝酸亚铈在PH=4.3溶液中形成蓝紫色络合物。反应原理F+OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOHCe3++PHOOOHCH2NOCH2COOCH2COOCeFOHFeCl3反应加稀HCl，沉淀分解，生成游离COOH白色COONa73FeCl32OH-中性溶液COO6Fe3(OH)2OOC7NaCl2Cl-碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀）酒石酸盐•取供试品的中性溶液于试管中，加氨制硝酸银溶液几滴，于水浴中加热，有银镜生成。OHOHCOOHCOOHAg(NH3)OH+2OHOHCOONH4COONH4NH3+22Ag++2H2O综上所述，一般鉴别试验只能证实是哪一类药物，而不能证实是哪一种药物依据：每种药物的化学结构的差异及引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏的定性反应鉴别药物的真伪。是证实某一种药物的依据。Specificidentificationtest专属鉴别试验例子巴比妥类药物：苯巴比妥含有苯环，司可巴比妥含有双键，硫喷妥钠含有硫原子。根据取代基的不同，采用各自专属的反应进行鉴别。例子•甾体激素类药物含有环戊烷并多氢菲母核，主要差别在A环和D环的取代基不同，可利用这些结构特征确证。四、鉴别方法化学鉴别法光谱鉴别法生物学法HPLC、GC鉴别法薄层色谱鉴别法纸色谱鉴别法呈色反应鉴别法紫外光谱鉴别法红外光谱鉴别法沉淀生成反应鉴别法色谱鉴别法气体生成反应鉴别法测定生成物的熔点荧光反应鉴别法1.呈色反应鉴别法指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。（1）三氯化铁呈色反应：用于酚羟基或水解后产生酚羟基（2）异羟肟酸铁反应：多用于芳酸及其酯类、酰胺类（3）茚三酮呈色反应：用于结构中含有脂肪氨基药物（4）重氮化-偶合显色反应：用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基（5）氧化还原显色反应及其它颜色反应2.沉淀生成反应鉴别法（1）与重金属离子的沉淀反应（2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应（3）其它沉淀反应。多用于生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐。常用的荧光发射形式：（1）药物本身可在可见光下发射荧光；（2）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光；（3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；3.荧光反应鉴别法（4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。（1）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气。（2）化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体。（3）含碘有机药物，经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。4.气体生成反应鉴别法紫外光谱鉴别法对比吸收光谱特征参数比较吸收度比值一致性对比吸收光谱一致性•紫外法在指定溶剂中测定2-3个特定波长处的吸收度比值（峰值与峰值比，峰谷与峰谷比），以提高专属性。例地蒽酚的鉴别取含量测定下的溶液，照分光光度法测定，于240-400nm的波长范围测定吸收度,在257,289,356处有最大吸收.规定A257/=A289为1.06-1.10A356/=A289为0.90-0.94.紫外光谱鉴别法•(1)最大吸收波长和最小吸收波长•(2)-A•(3)-吸收系数•(4)-A1/A2•(5)化学处理后测定产物的吸光度值λλλλ不同国家测定方法略有不同•USP(32)采用对照品法,把样品与对照品按同法处理,在200-400nm波长范围扫描，要求相同波长处有最大吸收，最小吸收，相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。•JP(15)与ChP(2010)的UV测定方法相似。•BP(2009)规定在一定波长范围内扫描，寻找最大吸收，测定吸收系数。•红外光谱法是一种专属性很强，应用较广（固、液、气）的鉴别方法，主要应用于组分单一，结构明确的原料药，特别适合于其他方法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类、半合成抗胜素。红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法对比供试品红外吸收光谱与药品标准红外光谱的一致性，尤其是指纹一致性。•ChP和BP均采用标准图谱法例中国药典对某药物的鉴别：本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集XX图）一致。USP采用对照品法例阿莫西林的鉴别试验：取本品，经干燥后用溴化钾压片法测定，所得的图谱与USP阿莫西林参考标准品图谱一致。•JP采用规定条件下测定一定波数处的特征吸收峰例氯羟去甲安定的测定：取本品，干燥后用KBr压片法测定，其红外吸收光谱图中3440cm-1,3220cm-1,1695cm-1,1614cm-1,1324cm-1,1132cm-1,828cm-1处有吸收。试样制备方法：1、压片法----用于固体2、糊法----用于固体3、膜法----用于液体4、溶液法----用于液体制剂的鉴别（2005版增加）•（1）辅料无干扰，与原料药标准图谱对照•（2）辅料干扰不能完全消除，用指纹区特征峰鉴别药物鉴别方法新动向•仪器用于药物鉴别的数量大大增加，尤其是红外和HPLC法。•英美采用仪器鉴别法和化学鉴别法的比例为2:1。•制剂广泛采用IR法鉴别，采用提取分离后再压片绘谱。•鉴别条目简练，选择专属的方法鉴别，平均每个品种收2条左右。（一）溶液的浓度（二）溶液的温度（三）溶液的酸碱度（四）试验时间（五）干扰成分的存在鉴别试验条件1、反应灵敏度和空白试验六、鉴别试验的灵敏度（sensitivity）最低检出量（minimumdetectablequantity）最低检出浓度（minimumdetectableconcentration）空白试验（blanktest）：在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。（二）提高反应灵敏度的方法1.加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集在鉴别试验中，如生成物具有颜色并颜色很浅时，可利用加入少量与水互不相溶的有机溶剂，浓集有色生成物，使其在有机溶剂中颜色变深，易于观测。2.改进观测方法如将目视观测溶液的颜色，改为可见分光光度法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。中国药科大学药分教研室