药都仁和XXXX年版抗生素药品和微生物(无菌)检查新增修订情况-zwtP_

《中国药典》2010年版抗生素药品和微生物限度（无菌）检查新增修订情况江西省食品药品检验所张文婷E-mail:[e-mail]:0791-8158796•2010年版《中国药典》为建国以来的第九版药典。•2007年底开始工作，2010元月正式出版，2010年10月1日起实施（中华人民共和国卫生部公告（第5号））•国家局、国家药典委员会、120多家参与单位、数百位专家江西省食品药品检验所（）无菌检查的新增修订江西省食品药品检验所（）前言部分•1、新增规定：“防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。”•2、新增规定：“日常检验还需要对环境进行监控。”•3、新增规定：“无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。江西省食品药品检验所（）培养基部分•1、删除：1.硫乙醇酸盐流体培养基后括号（用于培养好氧菌、厌氧菌）的说明•2、删除：2.改良马丁培养基后括号（用于培养真菌）的说明江西省食品药品检验所（）•3、删除：3.选择性培养基项下加入适量中和剂或表面活性剂后面的“如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供试品）或β-内酰胺酶（用于β-内酰胺类供试品）”等说明。修订为：在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。(中和剂、灭活剂见微生物限度检查法中表1）Continue…江西省食品药品检验所（）干扰物可选用的中和剂或灭活方法戊二醛酚类、乙醇、吸附物醛类季铵类化合物（QACs）、对羟基苯甲酸酯汞类制剂双胍类化合物碘酒、洗必泰类卤化物乙二胺四乙酸（EDTA）磺胺类ß-内酰胺类抗生素亚硫酸氢纳稀释法稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐卵磷脂、聚山梨酯亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐卵磷脂聚山梨酯硫代硫酸盐镁或钙离子对氨基苯甲酸ß-内酰胺酶表1常见干扰物的中和剂或灭活方法江西省食品药品检验所（）•4、将原第6.0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）修订排列为第4.——按顺序排列归类培养基1.～4.均为直接用于无菌检查的液体培养基。Continue…江西省食品药品检验所（）培养基灵敏度检查部分•1、修订了黑曲霉的孢子悬液制备方法：规定应使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，洗脱孢子及稀释孢子液，制成每1ml中含孢子数小于100cfu的孢子悬液。删除了：（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）吸出孢子悬液的操作方法江西省食品药品检验所（）•2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限：“菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2℃～8℃，在验证过的贮存期内使用。”Continue…江西省食品药品检验所（）稀释液、冲洗液及其制备方法部分•在原有1.0.1%蛋白胨水溶液2.pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的基础上新增加：“可根据供试品的特性，选用其他经验证的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。”江西省食品药品检验所（）方法验证试验部分•1、验证试验用菌种及菌液制备在培养基灵敏度所用菌种的基础上，删除了铜绿假单胞菌，增订了大肠埃希菌。——是因在验证试验的实践中，发现作为革兰氏阴性杆菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中对大部分抗生素不敏感，而大肠埃希菌对抗革兰氏阴性杆菌为主的抗生素敏感性较好。江西省食品药品检验所（）●2、验证试验中样品用量的规定：删除了原：“将规定量供试品按…”修订为：薄膜过滤法验证试验样品量：“取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤。”直接接种法验证试验样品量：“…其中1管接入每支培养基规定量的供试品量，“——明确了验证试验所需样品量是供试品的检验量而不是供试品的检验数量。Continue…江西省食品药品检验所（）供试品的无菌检查部分阳性对照用量原：“若采用直接接种法，应增加供试品1支（或瓶）作阳性对照用。”修订为：若采用直接接种法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。——因若是液体制剂，应该采用薄膜过滤法，若是固体制剂每管接种量可能不止1支（或瓶），应按验证的方法确定。江西省食品药品检验所（）薄膜过滤法•1、新增规定：抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜•2、新增规定：对每片滤膜的总冲洗量不得过1000ml•3、新增规定：所用冲洗量、冲洗方法同验证试验Continue…江西省食品药品检验所（）薄膜过滤法·4、增、修订无菌气（喷）雾剂供试品的检验方法：——规定冰室的温度应至少为-20℃，新增了开启容器后“将供试品转移至无菌容器中”的操作步骤。Continue…江西省食品药品检验所（）薄膜过滤法·5、增、修订：装有药物的注射器供试品的检验方法——删除“装上无菌针头（非包装中所配带的）”修订为“取规定量，排出注射器中的内容物，若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，直接过滤，Continue…江西省食品药品检验所（）直接接种法·删除原直接接种法中ß-内酰胺类或黄胺类供试品项。——因该两类供试品的无菌检查应采用薄膜过滤法加中和剂更好。江西省食品药品检验所（）培养及观察•对于培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生长时，删除了：“或划线接种于斜面培养基上”的规定。•同时删除了可根据斜面是否有菌生长而判断的规定。江西省食品药品检验所（）结果判断部分•新增订阳性对照管和阴性对照管的实验结果对于整体实验结果判断的作用：——“阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。”江西省食品药品检验所（）表1、表2和表3部分表1•将表1第3列的表题原“每种培养基最少检验数量”修订为：“接种每种培养基所需的最少检验数量”——更明确指出接种到培养基中去的检验量。•修订了表1下的注:对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。江西省食品药品检验所（）表2•将表2原名称：“上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量”修订为：“液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量”。——明确液体制剂最少检验量见表2的第2列，供试品最少检验数量见表2的第3列。·修订了表2下的注:——对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。江西省食品药品检验所（）表3•将表3原名称：“上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量”修订为：“固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量”————明确固体制剂最少检验量见表3第2列；供试品最少检验数量见表3的第3列。·修订了表3下的注:——对供试品容器装量不够接种两种培养基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。江西省食品药品检验所（）微生物限度检查的新增修订江西省食品药品检验所（）总则•1、表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明对微生物的生长和存活无影响无毒性•2、控制菌培养温度：35～37℃30～35℃•3、结果报告中增加：特殊品种可以最小包装单位报告江西省食品药品检验所（）检验量•要求检查沙门菌的供试品：其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。江西省食品药品检验所（）供试液制备•1、增加“贴（膏）剂供试品”取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有灭活剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）的稀释剂中，用力振荡至少30分钟，或以其他方法制备成供试液。江西省食品药品检验所（）•2、离心沉淀法•500转/分钟离心3分钟，取全部上清混合。用于细菌检查。Continue…江西省食品药品检验所（）细菌、霉菌及酵母菌计数•1、增加“计数培养基的适用性检查”•（1）培养基种类：成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查；•（2）菌种：同2005年版计数方法的验证用菌种（5种）；•（3）菌液制备：黑曲霉稀释液由0.9%无菌氯化钠溶液含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液江西省食品药品检验所（）•（4）菌液使用时间：菌悬液制备后应在2小时内使用，若保存在2～8℃的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉也可制成稳定的孢子悬液保存在2～8℃，在验证过的贮存期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用；•（5）检查方法及结果判断：按培养基种类用相应的试验菌采用平皿浇注法与对应的对照培养基比较，菌落数相比大于70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。Continue…江西省食品药品检验所（）2、计数方法的验证中增加“常见干扰物的中和剂或灭活方法”干扰物可选用的中和剂或灭活方法戊二醛亚硫酸氢钠酚类、乙醇、吸附物稀释剂醛类稀释剂、甘氨酸、硫代硫酸盐季铵类化合物（QACs）、对羟基苯甲酸酯卵磷脂、聚山梨醇酯汞类制剂亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐双胍类化合物卵磷脂碘酒、洗必泰类聚山梨醇酯卤化物硫代硫酸盐乙二胺四乙酸（EDTA）镁或钙离子磺胺类对氨基苯甲酸ß-内酰胺类抗生素ß-内酰胺酶Continue…江西省食品药品检验所（）•3、增加了“没有办法消除供试品中的抑菌作用的情况及相关规定”若没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用，那么验证试验中微生物回收的失败可看成是因供试品的抗菌活性引起的，同时表明该供试品不能被试验菌污染。然而，供试品也可能仅对试验用菌株具有抑制作用，而对其他菌株没有抑制作用。因此，根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的供试液进行方法验证试验。若验证试验符合要求，应以该稀释级供试液作为最低稀释级的供试液进行供试品检验。Continue…江西省食品药品检验所（）供试品检查•1、将“取按验证的方法制备的均匀供试液”“按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备”；•2、删除“采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续2～3个稀释级的供试液”；•3、菌落培养和计数时间：细菌：由48小时3天，霉菌、酵母菌：由72小时5天，延长培养时间：由5～7天7天江西省食品药品检验所（）4、平皿法菌数报告规则：•细菌、酵母菌：由30～300之间小于300cfu•霉菌：由30～100之间小于100cfu•增加：以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1mL或10cm2供试品中所含的菌数。如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。•删除：比值计算等计数详细规定Continue…江西省食品药品检验所（）•5、增加了有关滤膜直径的规定：采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45μm，直径约一般为50mm，若采用其