第四章含量测定方法与验证(7版)

第四章药物的含量测定方法与验证定量分析方法的分类与特点样品的前处理方法药品分析方法的验证第一节定量分析方法的分类与特点定量分析方法的计算–药典对药物的含量限度的表示方法•原料药：多以%表示，有二种情况–①按原料药本身形式计算其含量–例：阿司匹林（P.11）按干燥品计不得少于99.5%–对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于99.0%–凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量上限不得超过101.0%。–②由于药物组成不定，需以另一种稳定形式计算含量–例：氢氧化铝[Al(OH)3]以含三氧化二铝（Al2O3）计，不得少于48.0%•制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情况–①按标示量计算–标示量即规格量，生产厂家的处方量。它是以标示量为100%，将测得含量与之相比较，求出相对于标示量的百分含量。–例：维生素B1注射液含维生素B1应为标示量的95.0%～105.0%–干酵母片含蛋白质不得少于标示量的40.0%–②直接用%含量规定范围（主药含量微）–例：复方碘溶液–含I应为4.5%～5.5%–含KI应为9.5%～10.5%–复方氯化钠注射液–含总Cl-量0.52%～0.58%–含KCl量0.028%～0.032%–含CaCl2·2H2O0.031%～0.035%–③以重量规定含量范围（多为复方制剂）–例：复方炔诺酮片–炔诺酮0.54～0.66mg/片–炔雌醇31.5～38.5μg/片–复方磺胺甲噁唑片–SMZ0.360～0.440g/片–TMP72.0～88.0mg/片2020/2/256一、容量分析法——滴定法aA+bBcC+dD（A——被测药物；B——滴定液）（一）、滴定度的概念–T---与1ml规定浓度的标准溶液所相当的被测物的mg数。（二）、滴定度的计算–T=MA×mB×a/b（mg/ml）（三）含量计算1、直接滴定法原料药以%表示的制剂样品%=V×F×T/W×100%F=N实/N理2、间接滴定法（1）、剩余滴定法中须做空白样品%=（V空白－V测)样×F×T/W×100%（2）、生成物滴定法aA+bB=cC（生成物）+dD，cC+eE=fF+gG找到A与E的关系，计算滴定度（p.146）（自学）•相当于标示量%的计算公式–片剂：–V×F×T/W×平均片重/标示量×100%–针剂：–V×F×T/W/标示量（g/ml）×100%•以重量/片计的计算公式–V×F×T/W×平均片重=重量/片司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25mL，再加盐酸5mL，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分钟后，加碘化钾试液10mL，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L，F=0.992）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）17.05mL，空白试验消耗25.22mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的司可巴比妥钠。计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g，20粒胶囊内容物重2.7506g）？(p.90－生成物滴定法)2020/2/2510司可巴比妥钠的滴定度计算1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴相当T=MA×mB×a/b＝260.2×0.05×1/1＝13.01mg/mlNNHNaOCH3OOCH2CH3Br2NNHNaOCH3OOCH3CH2BrBrBr2KIKBrI2I2Na2S2O3NaINa2s4o6+(过量定量)+2(剩余)2++22+(25.22－17.05)×13.01×0.992×2.75060.1385×0.1×1000×20×100%精密量取维生素C注射液4mL（相当于维生素C0.2g），加水15mL与丙酮2mL，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液显蓝色，并持续30秒钟不退。已知：注射液规格2mL:0.1g，消耗0.05mol/L碘滴定液（F=1.005）22.45mL，维生素C的分子量为176.12，问：（1）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？（2）每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相当于多少mg的维生素C？（3）求本品相当于标示量的百分含量？2020/2/2513维生素C1摩尔维生素C与1摩尔碘相当T＝0.05×176.12×1/1＝8.806mg/mlT×V×F维生素C标示量％＝4×0.05×100％8.806×22.45×1.005＝4×0.05×1000×100％＝99.34％OOOHOHOHHCH2OHOOOOOHHCH2OHI2H+CC++2HI二、光谱分析（一）、UV法1、标准对照法（一点法）–A样/A标=C样/C标，–样品%=A样/A标×C标×F/W×100%–F=稀释倍数–W=取样量2、百分吸收系数法（A=E1%cm×C×L）–C%=A/E1%cm–样品%=A/E1%cm×F/W–F=稀释倍数和浓度换算因子–W=取样量3、标准曲线法（y=bx＋a）–由标准曲线或回归方程求出C样，再根据F，W求出样品%。4、计算分光光度法–双波长法，差示法均可应用比尔定律的公式，以△A代替吸收度A。差示分光光度法原理：利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生了特征性变化，而共存干扰物在该两种溶液中未引起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（ΔA值），根据ΔA与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。方法：一定量+酸→一定体积（测定）→A测同样量+碱→同样体积（参比）→A参A测－A参=△A样∵干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即△A杂=0，∴△A样只与样品浓度C呈线性关系。供试品220240260280nmΔA•pH10溶液，240nm•pH13溶液，255nm•酸性溶液，无maxΔA样=ApH13-ApH10ΔA标=ApH13-ApH10C样=ΔA样/ΔA标×C标•特点：具备一般分光光度法简易、快速、直接读数的优点;无需事先分离，又能消除干扰;提供一个近似理想的参比溶液。ΔA2020/2/2518（二）、FLU法以荧光强度△R代替吸收度A1、对照品溶液与空白溶液的荧光强度之差（ΔR对）2、供试品溶液与空白溶液的荧光强度之差（ΔR样）ΔR样C样＝×C对ΔR对称取己酸孕酮0.0105g,加无水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。吸取1.00ml,置100ml容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,置1cm吸收池内进行测定,根据下列数据,求出按干燥品计算的己酸孕酮百分含量。A=0.390,E1%1cm=3930.390×10393×0.0105×100%=含量%复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑（SMZ）的含量测定：精密称取本品（每片含SMZ为0.4g）10片，总重量为5.5028g。精密称取SMZ对照品0.0501g、片粉0.0756g，按双波长分光光度法测定SMZ含量。在257nm波长处测得：对照品溶液的吸收度A对为0.330，供试溶液的吸收度A样为0.372。在304nm波长处测得：对照品溶液的吸收度A对为0.009，供试溶液的吸收度A样为0.021。计算SMZ的含量相当于标示量的百分含量。257nm304nm对照品供试品0.3300.3720.0090.0210.372-0.0210.05015.50280.330-0.0090.0756100.4××××100%=99.69%对乙酰氨基酚片剂溶出度测定：取标示量为0.3g的本品6片，依法在1000mL溶剂中测定溶出度。经30分钟时，取溶液5mL滤过，精密吸取续滤液1mL，加0.04%氢氧化钠溶液稀释至50mL，摇匀，在257nm波长处测得每片的吸收度分别为0.345，0.348，0.351，0.359，0.356和0.333，按其百分吸收系数为715计算出各片的溶出量。限度为标示量的80%。并判断其溶出度是否符合规定。0.345×50×1000715×0.3=80.4%片1：片2……复方苯巴比妥散中苯巴比妥的测定主要成分：苯巴比妥，阿司匹林原理：在pH5.91和pH8.04条件下，阿司匹林及水解产物水杨酸等的紫外吸收光谱重合，ΔA=0，而苯巴比妥在此两pH条件下的差示光谱在240nm处ΔA值最大，因此可测定此波长处的ΔA值，采用标准曲线法定量。方法：取样品0.12g，加无水乙醇20ml，振摇，加水至200ml，取5ml两份，分别用pH5.91和pH8.04的缓冲液稀释至50ml，以试剂为空白，在240nm处测定吸收度，代入回归方程计算含量。三、色谱分析（HPLC和GC）•内标法：–F=A内/A标×C标/C内–样品%=A样/A内×F×C内×稀释倍数/W×100%–或C样=R样/内/R标/内×C标–（R代表峰面积比值）•外标法（同光谱法）:–标准曲线法–标准对照法(一点法)–系统适用性试验•柱效（理论板数）n=5.54(tR/Wh/2)2•分离度R=•拖尾因子T=•重复性取对照品或样品溶液，连续进样5次，测得峰面积相对标准差RSD应小于2.0%2(tR2-tR1)W1+W2W0.05h2d1(R≥1.5)(T=0.95～1.05)T=W0.05h/2d1d1hW0.05h0.05hHPLC测定复方SMZ片中SMZ含量，以SG为内标，测得标准液中：SMZ峰高14.90cm，浓度8.0mg/mL，SG峰高13.80cm，浓度4.0mg/mL。样品液中：SMZ峰高11.92cm，SG峰高16.20cm，浓度4.0mg/mL。求样品液中SMZ的浓度为多少？（进样量均为5l）13.8×8.014.9×4.0F=样品（mg/mL）=11.92×4.016.2=1.852×F=5.45用HPLC法测得某药保留时间为12.54min，半高峰宽3.0mm（纸速5mm/min），计算柱效？N=5.54（12.54/3.0）2？N=5.54[12.54/（3.0/5）]2？N=2420丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每1mL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（1.6mg/mL苯丙酸诺龙甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10L注入液相色谱仪，记录色谱图。另取本品适量，同法测定，内标法计算含量。已知对照品溶液为1.052mg/mL，样品溶液为1.032mg/mL，测得对照液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为54678和61258，样品液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为52213和61228，计算丙酸睾酮的含量？52213/6122854678/61258×1.052/1.032=？97.4%第二节样品分析的前处理方法一、概述含金属药物有：富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等。含卤素药物有：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞钠等。根据所含金属或卤素在分子中结合的牢固程度，分析前采用不同方法进行预处理。不经有机破坏处理的分析方法直接测定法金属原子不与碳直接相连的或C-M键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中电离，可选用适当方法直接测定。例：富马酸亚铁——在热的稀矿酸中溶解，释放出亚铁离子，用硫酸铈滴定液直接滴定。CHCOOCHCOOFeHClFe2+葡萄糖酸锑钠——为组成不定的五价锑化合物，采用间接碘量法测定锑的含量，在酸性条件下，葡萄糖酸锑钠与碘化钾试液作用，Sb5+可氧化KI，析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定。枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌——EDTA滴定法测定含量。经水解后测定法本法适合于卤素与脂肪碳链相连者，经加热回流使其水解，有机结合的卤素转变成无机的卤素离子，然后用适当方法进行测定。例：三氯叔丁醇的含量测定CCl3－C(CH3)2－OH+4NaOH3NaCl然后用银量法测定氯化钠含量。回流注意沉淀转化（加有机溶剂）Fe3+的水解（酸性中滴定）NaCl+AgNO3AgCl剩余AgNO3+SCN-AgSCNSCN-+Fe3+Fe（SCN