淋菌检测

淋病实验室检测锦州CDC田晶实验室诊断方法直接显微镜检查淋球菌的分离培养淋球菌的鉴定—初步鉴定/确诊试验锦州CDC直接显微镜检查涂片固定将拭子在载玻片上稍用力滚动一下，制成薄而均匀的涂片。自然干燥后迅速通过火焰2~3次，加热固定。革兰染色第一液（结晶紫）染色1min，流水轻轻冲洗。第二液（碘液）染色1min，水洗。第三液（95％乙醇）脱色至涂膜无蓝色为止，一般需10~20s，水洗。第四液（复红）复染1min，水洗，吸水纸吸干。锦州CDC直接显微镜检查结果观察先在低倍镜下找到视野后转换成油镜观察。淋球菌为革兰阴性菌，常成对排列，菌体呈肾形，两菌长轴平行，接触面平坦或稍凹，位于中性粒细胞内。结果报告中性粒细胞内见到形态典型的成对的革兰阴性双球菌为阳性。中性粒细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌为可疑。有或无中性粒细胞但无革兰阴性双球菌为阴性。锦州CDC淋球菌的分离培养培养基一般选用营养丰富的选择性培养基，Thayer-Martin(T-M)培养基、含抗生素的血液琼脂或巧克力琼脂培养基。培养基应密封在塑料袋中，于4℃冰箱贮存，时间不应超过3周。接种标本取材后标本应尽可能及早接种，拭子转动涂布于平皿的上1/4范围，然后分区划线，以获得较纯的单个菌落。锦州CDC淋球菌的分离培养培养条件接种后，平皿置36℃、5~10％的CO2和70％湿度的培养箱内，培养24~48小时观察细菌的生长。观察结果经过24h培养后，此时没有菌生长应继续培养至48h，仍无菌生长才可丢弃，作淋球菌培养阴性的报告。对培养基上分离的可疑菌落应作进一步鉴定。锦州CDC淋球菌的鉴定初步鉴定菌落特征氧化酶试验革兰染色确诊试验糖发酵试验荧光抗体染色法锦州CDC淋球菌的鉴定—初步鉴定菌落大小及形态随培养时间的不同可有差异。巧克力培养基上生长24h时直径大约为0.5~1mm，圆形，凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落，通常有黏性。培养48h后菌落直接可达3mm，边缘平滑或呈锯齿状，表面粗糙。锦州CDC淋球菌的鉴定——初步鉴定氧化酶试验试剂盐酸四甲基对苯二胺及盐酸二甲基对苯二胺方法将氧化酶试剂滴加于可疑菌落上，观察颜色变化。结果在10~15s内出现深紫红色（二甲基对苯二胺）或深紫蓝色（四甲基对苯二胺）即为阳性反应锦州CDC淋球菌的鉴定—初步鉴定革兰染色取单个可疑菌落制成涂片作革兰染色，在显微镜下检查。24h的新鲜菌落可见到典型肾形的革兰阴性双球菌（约占25%），其余呈单球、四联或八叠形。超过48h的较老培养物，因细菌自溶，革兰染色常难以说明问题。锦州CDC淋球菌的鉴定—确诊试验糖发酵试验该试验检测奈瑟球菌分解特定糖类（葡萄糖、麦芽糖、乳糖及蔗糖）而产酸的能力。淋球菌仅分解葡萄糖，这点可与其他奈瑟球菌加以鉴别。方法1.取在非选择性（不含抗生素）巧克力琼脂或血液琼脂培养基上过夜生长的纯培养淋球菌（2接种环），在0.4mlBSS(缓冲平衡盐指示溶液)中制成浓厚菌悬液。锦州CDC淋球菌的鉴定—确诊试验2.取5支小试管，在1~4管中分别加入20%过滤灭菌的葡萄糖、麦芽糖、乳糖及蔗糖各0.05ml。第5管不加糖，作对照。3.每管加0.1mlBSS。4.每管加0.05ml菌悬液，充分混匀。置37℃水浴箱中孵育4h。结果观察淋球菌仅发酵葡萄糖，不发酵其他糖类。仅葡萄糖管颜色由红变黄色为淋球菌。锦州CDC淋球菌的鉴定—确诊试验荧光抗体染色法抗淋球菌主要外膜蛋白1的单克隆荧光抗体与淋球菌结合后，在荧光显微镜下可见到发特异荧光的淋球菌。方法取数个菌落涂布于玻片上，加一滴生理盐水，制成涂片，干燥后加热固定。将30ul荧光抗体试剂加于涂膜上，放于湿盒中，置37℃15min。用蒸馏水轻轻冲洗涂片，洗去未结合的抗体。涂片干燥后，加一滴封固液，盖上玻片，在荧光显微镜下观察结果。锦州CDC淋球菌的鉴定—确诊试验结果观察发苹果绿色荧光的双球菌为阳性。注意事项加试剂后的涂片应放在湿盒内以防干燥，否则干燥的荧光抗体附着在玻片上会产生非特异性荧光。封固剂中甘油的纯度要高，否则其产生的自发荧光会影响结果的正确判断。锦州CDCTHANKS!