《药物分析》杭太俊第8版--第6章-芳酸类非甾体抗炎药物的分析

药物分析主讲：吴飞跃第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•芳酸类非甾体抗炎药物的定义：该类药物含有苯环和羧基的基本母核结构，同时是一类不含有甾体骨架的抗炎药。•芳酸类非甾体抗炎药物的适用症：•①具有抑制前列腺素的合成，具有抗炎、抗风湿、止痛、退热和抗凝血的作用。•②在临床上广泛用于风湿性关节炎和类风湿性关节炎、多种发热和各种慢性疼痛，如头痛、关节肌肉痛、牙痛等症状的缓解。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•第一节典型芳酸类非甾体抗炎药物的结构与性质几种典型的芳酸类非甾体抗炎药物第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•1、结构特点•①均有苯环、羧酸或其酯。其酸性特征可作为原料药含量测定的基础，在中性乙醇或其他水溶性的有机溶剂中，用氢氧化钠直接滴定。•②水杨酸类和苯甲酸类结构中的羧基直接与苯环相连。•③除了酸性基团外，各自具有本身的官能团。•④分子中苯环、羧酸和取代基的相互影响，使芳酸的酸性强度各有不同第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•2、主要理化性质：•1）酸性：具有游离羧基而显酸性，但其酸性强度受苯环的取代基位置及苯环上其他取代基的影响而显示不同的酸性。如阿司匹林的pKa=3.49,苯甲酸的pKa=4.26等。•2）水解性：具有酯键的药物，如阿司匹林、双水杨酯、吲哚美辛、尼美舒利以及对乙酰氨基酚等，可发生水解反应，可进行定量及定性分析。•3）吸收光谱特性：本类药物分子结构中具有苯环和特征取代基，具有紫外和红外的特征吸收光谱，因此可对本类药物进行鉴别。•4）基团或元素特征：如具有酚羟基或邻羟苯甲酸结构的药物能与三氯化铁生成有色配位化合物；酮洛芬的二苯甲酮可与苯肼缩合显色等。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•第二节鉴别试验•1、与三氯化铁反应•1）水杨酸反应：•水杨酸的水溶液加三氯化铁试液，生成紫堇色配位化合物。•反应条件：中性或弱酸性条件下进行（pH值为4-6），在强酸性条件下配合物会分解。•适用于：煮沸水解的芳酸类药物，如阿司匹林、双水杨酸酯、二弗尼柳等。•反应方程式如下：第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•2）酚羟基反应：•对乙酰氨基酚的水溶液加三氯化铁试液即显蓝紫色。•适用：烯醇式羟基即具有酚羟基的性质，如吡罗昔康、美洛昔康等。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•2、缩合反应•酮洛芬具有二苯甲酮结构，在酸性条件下可与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物。•方法：去样品于乙醇中溶解后，加二硝基苯肼试液，加热至沸，放冷即产生橙色反应。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•3、重氮化-偶合反应•分子结构中具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生重氮化反应。生成的重氮盐与碱性β-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。•对乙酰氨基酚生成对氨基酚•对氨基酚与亚硝酸盐进行•重氮化反应•重氮盐与碱性β-萘酚偶合生•成红色偶氮化合物第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•4、氧化反应•甲芬那酸溶于硫酸后，与重铬酸钾反应显深蓝色，随即变为棕绿色。甲芬那酸＋H2SO4深蓝色△黄色并产生绿色荧光第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•5、水解反应•阿司匹林与碳酸钠试液加热水解，得水杨酸即醋酸钠，加过量的稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并产生醋酸的臭味。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•6、特征元素的反应•1）氯元素的鉴别：样品与碱炽灼会化后，加水煮沸后，滤液显氯化物的鉴别反应，如双氯芬酸钠。•2）硫元素的鉴别：样品经高分分解后，产生硫化氢气体，遇醋酸铅生成硫化铅黑色沉淀，如美洛昔康。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•7、光谱法•1）紫外可见光光度法：•①最大吸收波长法：如规定双氯芬酸钠水溶液在276nm有最大吸收；吡罗昔康的水溶液在276nm波长处有最大吸收。•②最大与最小吸收波长法：如布洛芬0.4%的氢氧化钠溶液，最大吸收：265nm和273nm的波长处；最小吸收：245nm和271nm的波长处。•③吸光度法：甲芬那酸（1mol/L的盐酸溶液-甲醇）（1:99）的20μg/ml的溶液：λmax,279=0.69-0.74;λmax,350=0.56-0.60;•④吸光度比值法：二氟尼柳盐酸（0.1mol/L）乙醇溶液（样品浓度2020μg/ml）λmax,251/λmax,315=4.2-4.6.第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•2）红外分光光度法•阿司匹林IR特征吸收峰峰位归属3300～3200νO-H(羧基)1760,1690νC-O(羧酸酯和羧基)1610,1570,1480,1460νC=C(苯环)1310,1230,1180,νC-O(羧酸酯和羧基)775δAr-H(邻位取代苯环)COOHOCOCH3第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•8、色谱法•1）薄层色谱法：•如二弗尼柳胶囊的鉴定：硅胶GF254为固定相，正己烷-二氧六环-冰醋酸（85:10:5）为展开剂，在紫外光（254nm）灯下检视。供试品试液所显主斑点的位置和颜色与对照品溶液的主斑点相同。•2）高效液相色谱法：•方法：供试验品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留是将相同。•适用于：阿司匹林、吲哚美辛、对乙酰氨基酚、布洛芬、萘普生等药物。表6-3典型非甾体抗炎药物的主要有关物质药物名称有关物质结构式代码/名称药物名称有关物质结构式代码/名称阿司匹林双水杨酯游离水杨酸萘普生I．6-甲氧基-2-萘乙酮甲芬那酸2,3-二甲基苯胺对乙酰氨基酚氨基酚对氯苯乙酰胺OHOHOOCH3OMeNH2CH3CH3NH2OHCH3NHOCl第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第三节特殊杂质及检查方法第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第三节特殊杂质及检查方法•一、阿司匹林及双水杨酯中游离水杨酸与有关物质的检查。OHOHCOOHOHCOOH苯酚水杨酸CO2OCOCH3COOH(CH3CO)2OCOOHOOOH双水杨酸酯阿司匹林•（一）阿司匹林及双水杨酯的合成第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析（二）阿司匹林中游离水杨酸与有关物质的检查1、游离水杨酸【酰化不完全+水解（精制、制剂、贮藏）】——易氧化成有色醌类化合物，有毒①ChPbefore2010用水杨酸与Fe3+生成紫堇色配离子的原理,用稀硫酸铁铵溶液显色法检查供试品溶液制备过程中阿司匹林水解②ChP2010（HPLC）供试品采用1%冰醋酸甲醇溶液，防止阿司匹林水解。ODS（十八烷基硅烷键合硅胶）为填充剂作为固定相，以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70）为流动相，检测波长303nm，按外标法以峰面积计算，游离水杨酸不得超过0.1%。第三节特殊杂质及检查方法原料、制剂限量不同第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析2、有关物质——除水杨酸外的合成原料苯酚及其他合成副产物COOOHCOOOCOCH3OHCOOCOOHCOOOCOCH3COOHCOOOHOHCOOOCOCH3OCOCH3OCOCH3OHOHCOOH醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯水杨酰水杨酸乙酰水杨酰水杨酸水杨酸酐乙酰水杨酸酐(CH3CO)2O(CH3CO)2O(CH3CO)2O(CH3CO)2OCOCOOHOHCOOHOHCOOH苯酚水杨酸CO2OCOCH3COOH(CH3CO)2O阿司匹林•方法:HPLC•色谱条件：ODS柱，流动相A：乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70）；流动相B：乙腈，梯度洗脱，检测波长为276nm；供试品溶液（10mg/ml）的稀释液（0.5%）为对照。•主要检测：水杨酸、乙酰水杨酰水杨酸•除主峰外，其他各杂质的峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积。第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第三节特殊杂质及检查方法•阿司匹林有关物质HPLC检查色谱图阿司匹林水杨酸乙酰水杨酰水杨酸a:阿司匹林供试品(10mg/ml)；b:0.5%自身对照(50g/ml)；c:0.05%自身对照(灵敏度试验5g/ml)；d:水杨酸对照(10g/ml)；e:空白第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析（三）双水杨酯中游离水杨酸的检查–利用水杨酸与三价铁生成有色配离子的原理,用硝酸铁溶液显色,在530nm的波长处测定吸光度,限度为0.5%;双水杨酯片同法检查,限度为1.5%第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析OHOHCOOHOHCOOH苯酚水杨酸CO2COOHOOOH双水杨酸酯水解第三节特殊杂质及检查方法第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析二、甲芬那酸中2,3-二甲基苯胺的检查•（一）甲芬那酸的合成工艺：•原料2,3-二甲基苯胺可引起高铁血红蛋白血症，对中枢神经系统及肝脏有损害。第三节特殊杂质及检查方法第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•（二）2,3-二甲基苯胺的限量检查ChP曾采用HPLC法检查:单1杂质的限量为0.1%杂质总量为0.5%ChP2010规定HPLC法检查:“有关物质”GC检查:2,3-二甲基苯胺(0.01%)第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•（二）2,3-二甲基苯胺的限量检查•气相色谱检查：•①条件：毛细管柱,以聚乙二醇（PEG-20M）固定相；•对照品溶液恒温，150℃；供试品采用程序升温，起始温度150℃；进样口温度：250℃；检测器温度：260℃。•②溶液制备与测定：•二氯甲烷-甲醇（3:1）作溶液，供试品（25mg/ml）,对照品（2.5μg/ml）.•进样量：1μl•定性：保留时间一致；•定量：供试品中2,3-二甲基苯胺峰面积不得大于对照液中2,3-二甲基苯胺。三、二氟尼柳中有关物质的检查(一)合成工艺FFNH2FFFFCOCH3FFOCOCH3FFOHFFOHCOOH+偶联乙酰化(CH3CO)2O,AlCl3氧化水解OH-/H+羧化CO2,CH3ONaⅠⅡⅢⅣⅤⅥCuH2O22,4-二氟苯胺,2,4-二氟联苯,4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮,4-(2',4'-二氟苯基)苯酚乙酯,4-(2',4'-二氟苯基)苯酚,二氟尼柳,多种苯或联苯类中间体及副产物第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第三节特殊杂质及检查方法(二)有关物质A和B的检查：自身对照法1.有关物质A的检查——TLC(正相):极性较小的杂质杂质斑点与对照液主斑点比较，不得更深2.有关物质B的检查——HPLC(反相):极性较大的杂质各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（0.5%）第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第三节特殊杂质及检查方法四、萘普生中有关物质的检查(一)合成工艺原料(I):2-萘甲醚中间体(II):6-甲氧基-2-乙酰萘(6-甲氧基-2-萘乙酮)中间体(III):2-羟基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸产品(IV):萘普生MeOMeOCH3OMeOCH3OHCOOHMeOCH3COOH酰化羧化催化氢化ⅠⅡⅢⅣ第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第三节特殊杂质及检查方法(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有关物质1.溶液制备供试品溶液:0.5mg/ml流动相溶液对照品溶液:6-甲氧基-2-萘乙酮(杂质I),50μg/ml对照溶液:供试品溶液1ml+对照品溶液2ml→200ml2.限度杂质I:不得大于杂质I峰面积(0.1%)其他单个杂质:不得大于杂质I峰面积的2倍(0.2%)各杂质总量:不得大于对照溶液中萘普生峰面积(0.5%)第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第三节特殊杂质及检查方法五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查(一)合成工艺(二)有关杂质:对硝基酚,对氨基酚,对氯苯胺,对氯苯乙酰胺,o-乙酰基对乙酰氨基酚,偶氮苯,氧化偶氮苯,苯醌和醌亚胺1.对氨基酚及(其它)有关物质——HPLC对氨基酚:0.005%有关物质:单个0.1%;总量0.5%2.对氯苯乙酰胺(极性较小)——HPLC(0.005%)ClNO2HONO2HONH2HONHCOCH3水解还原酰化第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析第三节特殊杂质及检查方法第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析•本类药物原料：酸碱滴定；•制剂的检查性定量测定：溶出度、含量均匀度：紫外-可见分光光度法；•制剂含量测定：紫外-可见分光光度法，HPLC第四节含量测定ORCOOH•羧基：酸碱滴定、非水滴定•酯基：剩余酸碱滴定•苯环：紫外分光光度法、HPLC一、酸碱滴定法第