茯苓多糖检测实验方案

样品处理精密称取过60目筛的茯苓粉末0．5g10份，置索氏提取器中，用100mL石油醚和100mL乙醇各提取2h，滤渣加入1mol·L_Na0H溶液50mL，浸渍过夜，过滤，弃去初滤液，收集续滤液，精密吸取续滤液1．5mL至50mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀即得。取供试品液0．4mL3份，分别置于15mI试管中，加入5％苯酚1．2mL，混匀后加入浓硫酸7．0mL．在45℃水浴中保温30min，再放入冰水浴中30min，得供试品。1、对照品溶液的配制：精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖50mg置50mL容量瓶中，然后吸取此液5mL置50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，即得浓度为0．1000mg·mL一‘的葡萄糖溶液。2、吸收波长的选择：精密吸取对照品液和供试品液各1．0mL于具塞试管中，加1．0mL水，加5％苯酚0．8mL，混匀．迅速加入6．0mL浓硫酸摇匀。于45℃水浴中保温30min后移至冰水浴中。放置30min后取出，在分光光度仪上测定波长在410～600nm之间的吸收度，结果在490nm处葡萄糖的吸收度为最高，故选择490nm为最佳吸收波长进行测定。3、苯酚用量的选择：精密吸取葡萄糖对照品溶液1．0mL，加入浓硫酸5．0mL放置30min，分别加入5％苯酚0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、1．2、1．4、1．6、1．8、2．0、2．5mL，测其吸收度(在490nm处)，结果表明1．2mL吸收度最高。4、浓硫酸用量的选择：精密吸取对照品溶液1．0mL，加5％苯酚1．2mL，浓硫酸用量分别为：5．0、5．5、6．0，6．5、7．0、7．5mL，测吸收度，结果表明浓硫酸7．0mL时吸收度最高。5、反应温度的选择：精密吸取对照品溶液1．0mL，加5％苯酚1．2mL，浓硫酸7．0mL，水浴温度在室温20、45、65、85、100℃时保温30min。测吸收度。结果表明45℃时吸收度最高。6、反应时间的选择：精密吸取对照品溶液1．0mL，加5％苯酚1．2mL。浓硫酸7．0mL，水浴温度在45℃时保温时间分别为30、40、60、100、120min测吸收度，结果表明30min时吸收度最高。7、标准曲线的绘制：精密量取葡萄糖标准液0．0、0．1、0．2、0．4、0．5、0．6mL置15mL试管中，分别加水至1．0ml，再加入5％苯酚溶液1．2rnL，充分混合后，迅速加入7．0mL浓硫酸，再充分混合，置于45℃水浴30min后移至冰水浴中，放置30min后取出。在490nm处测其吸收度(A)。以浓度对吸收度做回归，得回归方程为A：8．7336C+0．0445(RSD=0．9972，n=5)。8、精密度试验：精密吸取标准品溶液1．0mL，同前法操作，测定吸收度，连续测5次，结果RSD-=2．0％，表明精密度良好。9、重复性试验：按照最佳条件，平行处理5份样品，同前法操作，测定吸收度，连续测5次，结果RSD=1．6％，表明重复性良好。10、稳定性试验：按照最佳条件制备样品，同前法操作，于lh、2h、4h、8h、12h测定吸收度，结果RSD=2．6％，表明样品在12h内稳定。11、样品含量测定：精密称取过60目筛的l0批茯苓样品粉末0．5g。置索氏提取器中，用100mL石油醚和l00mL80％的乙醇各提取2h，滤渣加入1moL·LNaOH溶液50mL，浸渍过夜，过滤，弃去初滤液，收集续滤液。供试品液0．4mL3份，分别置于15mL试管中，加入5％苯酚1．2mL，混匀后加入浓硫酸7．0mL，在45℃水浴中保温30min，再放入冰水浴中30min，测其吸收度A，根据回归方程求出茯苓多糖百分含量。