氯霉素的药物分析

酰胺醇类抗生素之——氯霉素•一化学结构与性质•二鉴别试验•三检查•四含量测定主要内容一化学结构与性质（一）化学结构氯霉素结构中含有对硝基苯基、丙二醇与二氯二酰胺三个部分，抗菌活性主要与丙二醇有关。本品为D-苏式-（—）-N-[α-（羟基甲基）-β-羟基-对硝基苯乙基]-2,2-二氯乙酰胺。按干燥计算，含C11H12Cl2N2O5应为98.0%̴102.0%。（二）性质1.稳定性性质稳定，能耐热，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、微溶于水等。干燥时稳定，在中性、弱酸性（pH4.5—7.5）溶液中较稳定，煮沸不分解。2.水解性●强碱性（pH9）氯水解●强酸性（Ph2）酰胺水解3.旋光性氯霉素结构中具有两个手性碳，有四个旋光异构体。仅1R,2R（—）或者（—）苏阿糖型（Threo）有抗菌活性，临床使用。此药物在无水乙醇中呈右旋性，在醋酸乙酯中呈左旋性。4.紫外吸收本类抗生素分子内具苯环含有共轭双键系统，在紫外光区有吸收。在277nm波长处有最大吸收。5.氧化性氯霉素含有对硝基苯基，其中硝基具有氧化性，可以将其还原成胺基。二鉴别试验1.色谱法高效液相色谱法ChP采用高效液相色谱法鉴别氯霉素，在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液的主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。2.光谱法紫外吸收光谱利用最大吸收波长鉴定法来鉴别。将供试品配成适当浓度的溶液，直接测定紫外吸收光谱，根据其最大吸收波长或最大吸收波长处的吸光度进行鉴定。3.鉴别反应●氯霉素中的丙二醇能发生醛酮缩合反应，酸水解后产物与过碘酸作用，氧化生成对硝基苯甲醛；与2，4-硝基苯肼缩合，生成苯腙。●本品分子中的硝基经锌粉还原成羟胺衍生物，在乙酸钠存在下与苯甲酰氯进行苯甲酰化，再在弱酸性溶液中与高铁离子生成紫红色的络合物。例：ChP(2010)取本品10mg,加稀乙醇1ml溶解后加1%氯化钙溶液3ml与锌粉50mg置水浴上加热10分钟，倾取上清液，加苯甲酰氯约0.1ml立即强力振摇1分钟，加三氯化铁试液0.5ml与三氯甲烷2ml，振摇，水层显紫红色。●取氯霉素1ml，加氢氧化钠的乙醇溶液2ml，再加硝酸2ml，加硝酸银3滴，生成白色沉淀，沉淀加氨试液溶解，再加硝酸银5滴，沉淀复生（氯离子的鉴别）。三检查•结晶性取本品少许，依法检查（附录IXD），应符合规定。•酸碱度取本品，加水制成每1ml中含25mg的混悬液，依法测定（附录VIH），pH值应为4.5—7.5。•比旋度取本品精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含50mg的溶液，依法测定（附录VIE），比旋度为+18.5◦至+21.5◦。•干燥失重在105◦C干燥至恒重，减失重量不得过0.5%（附录VIIL）。•炽灼残渣不得过0.1%（附录VIIIN）。•溶出度取本品，照溶出度测定法（附录ⅩC第一法），以盐酸溶液（9→1000）900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，30分钟时，取溶液适量，滤过，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（附录ⅤA），在278nm的波长处测定吸光度，按C13H12CI2N2O3的吸收系数（E1%1cm）为298，计算每片的溶出量，限度为标示量的70%，应符合规定。•有关物质目前各国药典均采用HPLC法检测精密称取本品适量，加甲醇适量（每10mg氯霉素加甲醇1ml）使溶解后，用流动相定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取氯霉素二醇对照品与对硝基苯甲醛对照品适量，加甲醇适量（每10mg氯霉素二醇物加甲醇1ml）使溶解，用流动相定量稀释制成每1ml中含氯霉素二醇物5µg与对硝基苯甲醛3µg的混合溶液，作为杂质对照品溶液。•照含量测定项下的色谱条件，取杂质对照品溶液10µl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使氯霉素二醇物峰的峰高约为满量程的25%；精密量取供试品溶液与杂质对照品溶液各10µl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含氯霉素二醇物不得过1.0%，含对硝基苯甲醛不得过0.5%。•残留溶剂乙醇与氯苯取本品0.5g，精密称定，置10ml量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品贮备液，精密量取2ml置顶空瓶中，再精密加二甲基亚砜1ml，摇匀，作为供试品溶液；精密称取氯苯约36mg、乙醇约500mg，置100ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1ml置顶空瓶中，再精密加二甲基亚砜2ml，摇匀，密封，作为系统适用性试验溶液；精密量取对照品贮备液1ml置顶空瓶中，精密加供试品贮备液2ml，摇匀，密封，作为对照品溶液，•照残留溶剂测定法（附录ⅧP第二法）测定，以6%清丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或极性相近）为固定液的毛细管柱为色谱柱，起始温度为40℃，维持10分钟，再以每分钟10℃的速率升至200℃，维持4分钟；进样口温度为250℃；检测器温度为300℃；顶空平衡温度为85℃，平衡时间为45分钟。取系统适用性试验溶液顶空进样，洗脱顺序依次为：乙醇、氯苯，各色谱峰之间的分离度应符合要求，取对照品溶液顶空进样，计算数次连续进样结果，相对标准偏差不得过5.0%。取供试品溶液与对照溶液分别顶空进样，记录色谱图，用标准加入法以峰面积计算，均应符合规定。四含量测定氯霉素的含量测定主要用的是HPLC，除此之外还可以用UV、TLC、LC/MS等方法高效液相色谱•色谱条件填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（磷酸二氢钾6.8g0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释，加三乙胺5ml，磷酸调节pH值至2.5）检测波长：277nm对照品：氯霉素•测定法精密称取本品适量，加甲醇适量（每10mg氯霉素加甲醇1ml）使溶解，用流动相定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，摇匀，精密量取10µl注入液相色谱仪，记录色谱图；另外再精密称取氯霉素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。按下式计算含量(外标法)•含量（CX）=CR·(AX⁄AR)•标示量%=CR·(AX/AR)·D·WW·标示量·100%—式中，CX为对照品溶液浓度（mg/ml）；AX和AR分别为供试品溶液和对照品溶液的峰面积；D为稀释体积(ml)；W为取样量(g)；W为平均重量(g)；标示量为取样品规格（mg/支）—THEEND