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当前位置:首页 > 商业/管理/HR > 质量控制/管理 > 第2章 药物质量控制与分析方法验证
L/O/G/O第四章药物的含量测定方法与验证2020/2/262第四章药物的含量测定方法与验证定量分析方法的分类与特点1样品分析的前处理方法2药品质量标准分析方法验证32020/2/263第一节定量测定方法的分类与特点一、容量分析法二、光谱分析法三、色谱分析法2020/2/264两个注意点•含量测定的内容:原料药:主成分量占取样量的百分比,百分含量;(小于100%)制剂:单位制剂中所含有效成分的量占标示量的百分比,标示量百分含量;(可能大于100%)标示量:药品标注的单位制剂所含有效成分的量生物样本:测定药物在生物基质中的浓度•定量分析:精密称定:精确到称样量的千分之一。对天平的要求:称样0.1g:天平精确到0.1mg,万分之一天平;称样10mg:天平精确到0.01mg,十万分之一天平;称样1mg:天平精确到0.001mg,百万分之一天平;2020/2/265一、容量分析法(一)特点与适用范围(1)方法简便易行(2)方法耐用性高(3)测定结果准确(4)方法专属性差适用于原料药含量测定(二)有关计算:1.滴定度与滴定度计算2.含量计算(1)直接滴定法(2)间接滴定法生成物滴定法剩余量滴定法也称滴定法:将已知浓度滴定液滴加至被测药物溶液中,至滴定终点,根据滴定液的浓度,体积和滴定度,计算含量容量分析法2020/2/266(二)相关计算每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量,mg1.滴定度每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6DCBAdcbaBBAAbMWaMWABBABABBAMbaVmMbanaMbMWWBAVTWMbamT)(mg/mlHI2OHCIOHC6662686)(mg/ml806.813.1761105.0T2020/2/2671.滴定度溴酸钾法测定异烟肼(C6H7N3O=137.14)的含量,溴酸钾滴定液浓度为0.01667mol/L(KBrO3为单元)反应式:每1ml溴酸钾滴定液(0.01667mol/L)相当于3.429mg的异烟肼(C6H7N3O)OH3KBr2N3NOHC3KBrO2ONHC3222563376滴定度:)(mlmg429.314.1372316670.0T2020/2/2682.含量测定直接滴定法生成物滴定法剩余量滴定法(1)(2)(3)2020/2/269(1)直接滴定法%100(%)WTV含量规定摩尔浓度实际摩尔浓度F%100%100'100%'(%)WFTVWTVWTV含量注意掌握滴定反应的原理,药物与滴定剂在反应中的摩尔比正确计算滴定度和百分含量2020/2/2610•精密称取阿司匹林0.3972g,用氢氧化钠(0.1021mol/L)滴定,消耗反应体积21.35ml。计算每1ml标准氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的滴定度,以及阿司匹林的含量。(分子式C9H8O4分子量180.2)(98.89%)2020/2/2611(2)生成物滴定法%100%100'100%'(%)WFTVWTVWTV含量注意摩尔比的替换药物与A作用生成B,用滴定液滴定B百分含量计算方法与直接滴定法相同2020/2/2612(2)生成物滴定法滴定度23-5ISbI2Sb-264--2322OSI2OS2I葡萄糖酸锑钠含量测定:本品约0.3g,加水100ml、盐酸15ml与碘化钾试液10ml,暗处放置10分钟,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定每1ml硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg锑(Sb)反应式:)(mg/ml088.676.121211.0MbamT2020/2/2613(3)剩余量滴定法(回滴法)加入定过量滴定液A,用滴定液B滴定剩余的A注意:滴定度为滴定液A的滴定度%100)((%)ABBAAWTFVFV含量%100)((%)ABSBOBWTFVV含量无空白进行空白校正2020/2/2614%100)((%)ABBAAWTFVFV含量(1)滴定液A(V总=VA×FA)一部分与待测药物反应(V);(2)剩余的体积(V剩)与滴定液B反应,所以V=VA×FA-V剩(3)A与B反应为aA+Bb,那么a/(CA×V剩)=b/(CB×VB×FB);当a:b=CA:CB时,V剩=VB×FB,(4)与待测药物反应的滴定液A体积V=VA×FA-VB×FB无空白校正2020/2/2615有空白校正%100)((%)ABSBOBWTFVV含量前提:A与B反应为aA+Bb,当a:b=CA:CB时(1)空白实验时A与B完全反应,滴定液A总体积V总=VB0×FB(2)滴定时,待测药物消耗的滴定液A体积为V=V总-VBS×FB=VB0×FB–VBS×FB2020/2/2616(3)剩余量滴定法司可巴比妥钠含量测定:本品约0.1g,加水10ml溶解,精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml,再加盐酸5ml,放置15分钟,加碘化钾试液10ml,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定,滴定的结果用空白试验校正W=0.1022g;硫代硫酸钠滴定液F=1.038;供试品消耗硫代硫酸钠滴定液15.73ml;空白23.21ml2020/2/2617(3)剩余量滴定法滴定度(mg/ml)01.1327.260111.0MbamT司可巴比妥钠M=260.27,与溴摩尔比为1:1%8.98%10010001022.001.13038.1)73.1521.23(%100)((%)2322322BrOSNaOSNaS0WTFVV司可巴比妥含量2020/2/2618(3)剩余量滴定法滴定液A与滴定液B浓度是相当(a:b=CA:CB)溴滴定液(0.05mol/L)与硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当,因为溴(Br2)等摩尔转化为碘(I2),而碘(I2)与硫代硫酸钠(Na2S2O3)反应的摩尔比为1:2,所以溴滴定液与硫代硫酸钠滴定液的浓度比也是1:2。滴定液A与滴定液B经浓度校正后的消耗体积(V’=V×F)是相当的2020/2/2619二、光谱分析法定义分类UV-Vis利用物质的光谱进行定性、定量和结构分析的方法——光谱分析法IRAAFluorFP(flamephotometry)2020/2/2620(一)紫外-可见分光光度法1.特点与适用范围(1)方法简便易行(2)方法灵敏度高(3)结果准确度较高(4)方法专属性较差制剂含量测定2.仪器校正和检定(1)波长(2)吸光度的准确度(3)杂散光3.测定法对照品比较,吸收系数计算光谱,比色法基于对紫外光区(200~400nm)和可见光区(400~760nm)单色光吸收特性的分析方法原理:UV-VisEclTA1lg2020/2/2621(1)对照品比较法原料药制剂RRXXAcAc%100(%)XWDc含量%100(%)XBWWDc标示量氟康唑片溶出度检查:取本品(规格:100mg),盐酸溶液(9→1000)1000ml为溶出介质,经45分钟时,取溶液滤过;取续滤液,在261nmm波长处测定吸光度;另取氟康唑对照品适量,精密称定,加溶出介质溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液,同法测定,计算每片的溶出量%100%)(RRXBADcA标示量溶液浓度2020/2/2622(2)吸收系数法原料药制剂%100(%)XWDc含量%100(%)XBWWDc标示量溶液浓度100)ml/g(%11cmXEAcX盐酸氯丙嗪注射液(规格:xxml:xxmg)的含量测定:精密量取适量(Vml,相当于盐酸氯丙嗪50mg),置200ml量瓶中,用盐酸溶液(91000)稀释至刻度,摇匀;精密量取2ml,置100ml量瓶中,用盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,在254nm的波长处测定吸光度,按吸收系数()为915计算1%1cmE%1001001000(%)1%1cm标示量标示量BVEVDA2020/2/2623•取标示量为25mg的盐酸氯丙嗪片20片,除去糖衣后精密称定,总重量为2.4120g,研细,精密称量片粉0.2368g,置500ml量瓶中,加盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置100ml量瓶中,加同一溶剂稀释至刻度,摇匀,在254nm波长处测得吸收度为0.435,按百分吸收系数为915计算,求其标示量百分含量?(10分)2020/2/2624三、色谱分析法特点与应用分类依据分离原理:(1)高灵敏度:ng-µg/ml(2)高专属性:选择性检测(3)高效能与高速度吸附;分配;离子交换;分子排阻色谱法复方制剂含量测定的首选方法依据分离方式:纸色谱;薄层色谱;柱色谱;气相色谱;高效液相色谱法2020/2/2625(一)高效液相色谱法1.仪器(RP-HPLC)(1)色谱柱:ODS最常用;粒径一般在3-10m;温度≯40℃(2)检测器:UV(DAD,PDA);Fluor,ELSD,RID,ECD,MS(3)流动相:首选甲醇-水(末端波长检测:乙腈-水),有机相≮5%;pH2-82.系统适用性试验(1)色谱柱的理论板数(n)(2)色谱峰的分离度(R)(3)色谱系统的重复性(RSD%)(4)色谱峰的拖尾因子(T)3.测定法(1)内标法(2)外标法不得改变:固定相种类,流动相组分,检测器类型可以改变:色谱柱内径,长度,载体粒度流动相流速,混合流动相各组分的比例柱温;进样量;检测器的灵敏度HPLC2020/2/26262.系统适用性试验分离度(R):用于评价组分的分离程度;关键指标重复性:用于评价连续进样系统响应的重复性能拖尾因子(T):用于评价色谱峰的对称性理论板数(n):用于评价色谱柱的分离效能n=(tR/)2=16(tR/W)2;n=5.54(tR/Wh/2)2212R1R)(2WWttR)(70.1)(22/,22/,12R1RhhWWttR;RSD≥1.51h05.02dWT2020/2/26273.测定法与计算(2)外标法氨酚待因片(I)的含量测定取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量,置250ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,滤过,取续滤液10µl进样;另精密称取磷酸可待因与对乙酰氨基酚对照品适量,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含磷酸可待因0.03mg和对乙酰氨基酚2mg的溶液,同法测定RXRX)(AAcc含量WWDAAcRXR)(mg/片含量2020/2/2628(1)内标法RRSS)(CACAf校正因子SScAAfcXX)(含量2020/2/2629第二节样品分析的前处理方法一、不经有机破坏的前处理方法二、经有机破坏的前处理方法(一)水解法;(二)还原法(一)干法破坏;(二)湿法破坏2020/2/2630需验证的项目验证的内容准确度定量限•防腐剂•溶出度,释放度•鉴别试验•杂质检查•含量测定第三节药品质量标准分析方法验证精密度专属性检测限线性范围耐用性重复性中间精密度重现性2020/2/2631八、验证内容的选择验证内容分析项目鉴别试验元素或杂质检查含量测定及溶出量测定限度定量准确度++精密度重复性++中间精密度++专属性++++检测限++定量限+线性++范围++耐用性++++2020/2/2632一、准确度(一)含量测定方法(二)杂质定量测定加入已知量杂质进行测试(三)数据要求9个测定结果3个不同浓度(80,100,120%)每个浓度各3份准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度一般用回收率(%)表示定义)(加入量本底量测得量)回收率(%100%)(加入量测得量)回收率(%100%2020/2/2633二、精密度1.重复性同一分析人员连续测定所得结果的精密度;也称批内精密度或日内精
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