02 陈广腾 食品中氨基甲酸酯类农药残留量的测定

食品中氨基甲酸酯类农药残留量的测定制作：陈广腾(091303102)(P68)•「氨基甲酸酯类农药」在六六六禁用之后已成为我国大量使用的一类农药。•「氨基甲酸酯类农药」广泛用于杀虫、螨类、线虫、杀菌和除草。（P68）作为杀虫剂的氨基甲酸酯农药N-甲基氨基甲酸酯类（杀虫广谱，作用强）N,N-二甲基氨基甲酸酯类芳基氨基甲酸酯（西维因、速灭威、残杀威）肟基N-甲基氨基甲酸酯↘↙↙↘P68「氨基甲酸酯类农药」毒性的特点（P68）•①大多数品种速效性好，残效期短，选择性强。•②多数品种对高等动物毒性低，除呋喃丹、涕灭威属高毒，西维因、叶蝉散、速灭威属中等毒性外，其余常用品种均属低毒。•③在生物体和环境中易降解。其毒作用表现为抑制乙酰胆碱酯酶，其中毒症状同有机磷是一致的，但较有机磷中毒恢复快，因为其抑制有可逆性。（一）「氨基甲酸酯类农药」的测定方法•气相色谱法（P68）•仪器：高灵敏度的氮磷检测器直接测定（要注意选用低极性的固定液，柱应尽量短，工作温度应适中(140-190℃)）食品中「氨基甲酸酯类农药」残留量的测定方法(P68)1.原理含氮有机化合物被色谱柱分离后在加热的碱金属片的表面产生热分解，形成氰自由基(CN·)，并且从被加热的碱金属变成正离子，由收集极收集，并作为信号电流而被测定。电流信号的大小与含氮化合物的含量成正比。以峰面积或峰高比较定量。2.试剂(P68)1.无水硫酸钠于450℃焙烧4h后备用⒉丙酮重蒸⒊无水甲醇重蒸⒋二氯甲烷重蒸⒌石油醚沸程30-60℃重蒸⒍速灭威≥99％⒎叶蝉散≥99％⒏残杀威≥99％⒐呋喃丹≥99％⒑抗蚜威≥99％⒒西维因≥99％⒓5%氯化钠溶液⒔甲醇-氯化钠溶液取无水甲醇及5%氯化钠溶液等体积混合。14.氨基甲酸酯杀虫剂标准溶液的配制：分别准确称取速灭威、叶蝉散、残杀威、映喃丹、抗蚜威及西维因各种标准品，用丙酮分别配制成1mg/mL的标准储备液。使用时用丙酮稀释配制成单一品种的标准使用液(5μg/mL)和混合标准工作液(每个品种浓度为2～10μg/mL)。(P69)3.仪器（P69）•气相色谱仪[附有FTD(火焰热离子检测器)]•电动振荡器。•组织捣碎机。•粮食粉碎机：带20目筛。•恒温水浴锅。•减压浓缩装置。•分液漏斗：250，500mL。•量筒：50，100mL。•具塞三角烧瓶：250mL。•抽滤瓶：250mL。•布氏漏斗：Φ10cm。4.试样的制备取粮食实验样品经粮食粉碎机粉碎，过20目筛制成粮食试样。取蔬菜实验样品洗净、晾干，去掉非食部分后剁碎或经组织捣碎机捣碎制成蔬菜试样。5.分析步骤（P69）①提取②净化③浓缩①提取粮食样品：称取约40g粮食试样，精确至0.001g，置于250mL具塞谁形瓶中，加入20～40g无水硫酸钠(视试样的水分而定)、100mL无水甲醇。塞紧，摇匀，于电动振荡器上振荡30min。然后经快速滤纸过滤于量筒中，收集50mL滤液，转入250mL分液漏斗中，用50mL5%氯化钠溶液洗涤量筒，并入分液漏斗中。•蔬菜样品：称取20g蔬菜试样，精确至0.001g，置于250mL具塞锥形瓶中，加入80mL无水甲醇，塞紧，于电动振荡器上振荡30min。然后经铺有快速滤纸的布氏漏斗抽滤于250mL抽滤瓶中，用50mL无水甲醇分次洗涤提取瓶及滤器。将滤液转入500mL分液漏斗中，用100mL5%氯化钠水溶液分次洗涤滤器，并入分液漏斗中。•②净化粮食样品：于盛有样品提取液的250mL分液漏斗中加入50mL石油醚，振荡1min，静置分层后将下层(甲醇氯化钠溶液)放入第二个250mL分液漏斗中，加25mL甲醇－氯化钠溶液于石油醚层中，振摇30s，静置分层后，将下层并入甲醇－氯化钠溶液中。•蔬菜样品：于盛有样品提取液的500mL分液漏斗中加入50mL石油醚，振摇1min、静置分层后将下层放入第二个500mL分液漏斗中，并加入50mL石油醚，振摇1min，静置分层后将下层放入第三个500mL分液漏斗中。然后用25mL甲醇－氯化钠溶液依次反洗第一、二分液漏斗中的石油醚层，每次振摇30s，最后把甲醇－氯化钠溶液并入第三分液漏斗中。•③浓缩于盛有样品净化液的分液漏斗中，用二氯甲烷(50，25，25mL)依次提取三次，每次振摇1min，静置分层后将二氯甲烷层经铺有无水硫酸钠(玻璃棉支撑)的三角漏斗(用二氯甲烷预洗过)过滤于250mL蒸馏瓶中，用少量二氯甲烷洗涤漏斗，并入蒸馏瓶中。将蒸馏瓶接上减压浓缩装置，于50℃水浴上减压浓缩至1mL左右，取下蒸馏瓶，将残余物转入10mL刻度离心管中，用二氯甲烷反复洗涤蒸馏瓶并入离心管中。然后吹氮气除尽二氯甲烷溶剂，用丙酮溶解残渣并定容至2.0mL，供气相色谱分析用。④气相色谱条件(P69-70)•1色谱柱色谱柱1：玻璃柱，3.2mm(内径)×2.1m，内装涂有2%OV－101＋6%OV－210混合固定液的ChromosorbW(HP)80～100目担体。色谱柱2：玻璃柱，3.2mm(内径)×1.5m，内装涂有1.5%OV－17＋1.95%OV－210混合固定液的ChromosorbW(AW－DMCS)80～100目担体。•2气体条件氮气65mL/min；空气150mL/min；氢气3.2mL/min。•3温度条件柱温190℃；进样口或检测室温度240℃⑤测定氨基甲酸酯杀虫剂的色谱图EiimAAEXi10002000标准试样中组分i的含量，ng试样中组分i的峰面积或峰高，积分单位标准试样中组分i的峰面积或峰高，积分单位试样质量，g试样中组分i的含量，mg/kg⑥计算(P70)换算单位样液的定容体积↘↖↑↗样液的定容体积↘↘样液的定容体积↘样液的定容体积↘样液的定容体积↘样液的定容体积↘EiimAAEXi10002000样液的定容体积↘试样中组分i的含量，mg/kg试样中组分i的含量，mg/kg标准试样中组分i的含量，ng试样中组分i的峰面积或峰高，积分单位标准试样中组分i的峰面积或峰高，积分单位↖试样质量，g↑换算单位↗（二）粮、油、菜中西维因残留量的高效液相色谱法(P70)1.原理含有西维因的粮食经提取、弗罗里硅土净化后，浓缩，定容作为测定溶液，取一定量注入高效液相色谱仪，经分离用紫外280nm检测器检测，与标准系列比较定量。2.试剂(P70)①苯、乙腈、甲醇、二氯甲烷、无水硫酸钠(120℃干燥4h);②弗罗里硅土:120℃干燥4h，加入6%(m/m)蒸馏水，摇匀，放置过夜后使用;③西维因标准溶液的配制:准确称取西维因标准品(99.3%)，用甲醇溶解并配制成10.0mg/mL的标准储备液，贮于冰箱中，使用时用甲醇稀释成10μg/mL的标准使用液。•3.仪器(P70)△高效液相色谱仪：带紫外检测器；△溶剂过滤器；△超声波仪：用于流动相脱气；△KD浓缩器或旋转式蒸发器。4.分析步骤(1)提取(2)净化•1提取称取20.00g经粉碎过20目筛的粮食试样于250mL具塞锥形瓶中，准确加入50mL苯，浸泡过夜，次日振荡提取1h，提取液过滤。•2净化取直径1.5cm层析柱，先装脱脂棉少许(柱两头装2cm高无水硫酸钠，中间装6g弗罗里硅土)，装好的柱先用20mL二氯甲烷预淋，弃去预淋液，然后将5～10mL样品提取液倒入层析柱，用70mL二氯甲烷少量多次淋洗，收集全部淋洗液，用KD浓缩器进行浓缩至近干(水浴温度30℃)，然后用甲醇溶解残余物，并定容至5mL。定容后用0.5μm滤纸借助于注射器过滤，取10μL滤液注入高效色谱进行分离、检测。3液相色谱测定参考条件1色谱柱：不锈钢柱BONAPAKC183.9mm×30cm。2检测器：紫外检测器波长280?m，灵敏度0.01～0.02。3流动相：乙睛水(55＋45)混合溶剂，流速1mL/min4温度：柱温，检测器均为室温。4测定(P71)吸取10μL标准使用液及样品液注入色谱仪，以保留时间定性，用标准曲线法定量。2111mVVAX5计算从标准曲线求出样液中西维因的含量，μg样液定容的体积，mL样品的质量，g注入色谱的体积，mL粮食中西维因的含量，mg/kg↓↖↗→(三)花生仁、棉籽油、花生油中涕灭威残留量的气象色谱法(P71)1.原理含有涕灭威及氧化代谢物涕灭威亚砜、涕灭威砜的样品，在提取过程中加入强氧化剂使涕灭威、涕灭威亚砜氧化成在气相色谱仪火焰光度检测器上有较高响应的涕灭威砜进行测定。涕灭威残留总量以涕灭威砜的量表示。2.试剂(P71)除特殊规定外，只应使用分析纯试剂和蒸馏水或同等纯度水。(1)丙酮、二氯甲烷、无水硫酸钠、10%碳酸氢钠溶液、过氧乙酸溶液(2)过氧化氢∶乙酸＝2∶1。(3)涕灭威砜标准储备溶液：精密称取涕灭威讽标准品50.0mg，置于50mL容量瓶中，加少量二氯甲烷溶解，用二氯甲烷稀释到刻度。配成每毫升含涕灭威砜1.0mg的标准溶液。(4)涕灭威砜标准使用溶液：吸取标准储备溶液5.0mL，用二氯甲烷定容至50mL，该中间溶液浓度为0.10mg/mL。依次吸取中间溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，以二氯甲烷分别定容至100mL，配成浓度为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/mL标准系列。•3.仪器(P71)①电动振荡器。②旋转蒸发仪。③净化柱：在1.3cm(内径)×8cm层析柱中依次装入1cm无水硫酸钠，4g弗罗里硅土，1cm无水硫酸钠。④气相色谱仪：具有火焰光度检测器。4.操作方法(P71)(1)样品处理①水果：样品洗净、擦干，取可食部分捣碎、混匀。称取约25g试样，精确至0.001g。置于250mL具塞锥形瓶中，加入100mL丙酮－水(3∶1)，振荡0.5h。经滤纸过滤，用50mL丙酮－水分三次冲洗锥形瓶及残渣，合并滤液。在水浴45℃条件下减压浓缩至约100mL。样液置于250mL分液漏斗中，加入5mL过氧乙酸溶液，振荡0.5h。缓慢加入50mL碳酸氢钠溶液，摇至无气泡产生。用50、25、25mL二氯甲烷草取三次，合并二氯甲烷，经无水硫酸钠干燥，在水浴45℃条件下减压浓缩至1.0mL，待测定。•②花生仁、粮谷等：样品粉碎、混匀，按5.1.1“称取25g样品，……经无水硫酸钠干燥。”操作。萃取液浓缩至约20mL。层析柱先用25mL甲苯－二氯甲烷(1∶1)预洗。将上液转入柱中，弃去流出部分，依次用50mL(2∶98)、100mL(1∶1)丙酮－乙醚淋洗，收集、合并两次淋洗液。在水浴45℃条件下减压浓缩至近干，取下用氮气吹干。加1.0mL二氯甲烷溶解残渣，待测定。•(2)色谱条件（P72）①色谱柱长1m，内径3mm玻璃柱；固定相：15%FFAP/ChromosorbWAW80～100目。②检测器火焰光度检测器，S滤光片。③温度柱箱190℃；进样口230℃；检测器230℃。④气流：氮气45mL/min；氢气80mL/min；空气100mL/min(3)测定(P72)根据气相色谱仪灵敏度，取标准系列各浓度5～10μL分别注入气相色谱仪。测得各浓度标准溶液的峰高，以进样体积下的标准物含量(ng)为横坐标，峰高(mm)为纵坐标绘制标准曲线。取样品溶液5～10μL注入气相色谱仪。测得涕灭威砜的峰高(mm)，从标准曲线中查出相应的含量(ng)。(4)计算(P72)(5)精密度本方法相对标准差小于13%10mWVVX样品中涕灭威砜含量，mg/kg样品峰在标注曲线中查到的相应含量，ng样品液体积，mL进样体积，μL称样量，g↓↙→