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果蝇综合大实验反交组一.实验目的1、理解和验证分离定律;2、了解两对不连锁基因的杂交方法,验证自由组合定律;3、理解伴性遗传原理,验证伴性遗传规律;4、理解连锁和交换的原理,学习实验结果的数据处理和重组值的计算方法;5、熟悉果蝇的饲养及其生活史,掌握果蝇的杂交技术。二.实验原理(一)分离定律:一对基因在杂合状态互不污染,保持其相对独立性,在形成配子时,又按原样分离到不同的配子中去。一般情况下,配子的分离比是1:1,子二代基因型的分离比是1:2:1,子二代表型的分离比是3:1。(二)自由组合定律:位于非同源染色体上的两对基因,他们所决定的两对相对性状在F2代是自由组合的。这两对不连锁的基因所决定的性状在F2代的比例为9:3:3:1。(三)伴性遗传:位于性染色体上的基因所控制的性状在遗传上与性别相联系的遗传现象,称为伴性遗传。果蝇的性染色体有X和Y两种,雌蝇为XX,是同配性别;雄蝇为XY,是异配性别。把本组实验的结果跟正交组做对比,就可以证明果蝇的眼色的遗传属于伴性遗传。(四)三点测验:对于三个连锁的基因来说,用三隐性个体和纯合的三显性个体杂交,制成三因子杂种,再把雌性杂种与三隐性个体测交,在下一代中就可以得到8种不同表型的果蝇,这样经过数据处理,一次实验就可以测出三个连锁基因的距离和顺序。这种基因定位的方法称作三点测验。三.实验材料本杂交实验选用亲本蝇的类型分别是26号雌处女蝇和6号雄蝇.品系体色颜色翅形刚毛26(♀)黑檀体e(3)红眼长翅直刚毛6(♂)灰色体白眼w(1)短翅m(1)卷刚毛sn(1)实验器具与药品:1.器具:隔水式恒温培养箱、高压灭菌锅、光学解剖镜、麻醉瓶、培养瓶、白瓷板、海绵、毛笔、镊子、电子天平、烧杯、量筒、不干胶标签等2.药品:琼脂、白糖或蔗糖、玉米粉、酵母(新鲜或干粉)、苯甲酸、丙酸、乙醚等四.实验步骤•反交:26(♀)×6(♂)•配制培养基•选处女果蝇-杂交-移去亲本-观察后代-后代自交-移去亲本-观察统计后代-数据处理1.选取处女蝇选取26号瓶中的雌蝇和雄蝇接种培养待培养瓶中出现大量蛹时把培养瓶倒空(注意一个也不能留),收集孵化8小时内的雌幼蝇,放入杂交瓶中,雌性个体就是处女蝇,即雌性亲本。2.杂交(1)投放杂交亲本:将提供雄性亲本的6号品系进行麻醉,选取雄性个体放入装有处女蝇的杂交瓶中,配成5对,并在杂交瓶外壁贴上标签,注明杂交组合,实验日期,实验者姓名。放入培养箱中,20—25度恒温培养。第二天检查亲本成活情况,如有死亡,应及时补充。(2)一周以后,杂交瓶中可见幼虫,此时将亲本移出杂交瓶(一定要除干净),并再次对亲本表型进行检查,以确保亲本的准确性,如有例外,则需重新进行操作。(3)3-4天后杂交瓶中出现果蝇成虫,即F1代个体,用麻醉瓶将F1代个体进行麻醉,并观察F1代成蝇性状,统计表型及雌雄个数,连续观察2-3天并填写记录在表格中。同时,选取5-6对F1代个体投入一个新的培养瓶中(此处不需要处女蝇),进行F1代自交,在杂交瓶外壁贴上标签。第二天,检查F1代个体成活情况,如有死亡,及时补充适当的亲本个体。(4)1周后,将F1代杂交个体转移出杂交瓶,此时瓶中可见幼虫出现。(5)再经过一周,杂交瓶中会出现果蝇成虫,即F2代个体。用麻醉瓶将F2代个体进行麻醉,并观察F2代个体的数量,表型和相应性别,每隔两天统计一次,连续观察7-8天,每次观察完后,要将成蝇处死,置于死蝇瓶里(留其在瓶中繁殖会扰乱实验结果),统计结果(统计至200只左右),记录在实验报告中。五.实验结果及其分析1.分离定律(以黑檀体和灰体为一对相对性状)F1代表型数量黑檀♀×灰体♂黑檀体灰体数目总数注:预先已知控制黑檀与灰体这对性状的基因位于第三号同源常染色体上,所以正交反交不影响统计结果。F2代表型数量灰体♀×灰体♂黑檀体灰体数目总数适合度检验x2F2表型黑檀体灰体总计实计频数O预计频数E(O-E)2(O-E)2/Edf(自由度)=2-1=1x2=∑[(O-E)2/E]=则查表可知p=因此:(2)自由组合定律(以红眼对白眼、灰体对黑檀体为两对相对性状)F1代表型红眼灰体♀×白眼黑檀体♂灰体红眼灰体白眼黑檀体红眼黑檀体白眼数目总数F2代表型红眼灰体♀×白眼黑檀体♂灰体红眼灰体白眼黑檀体红眼黑檀体白眼数目总数适合度检验x2F2表型灰体红眼灰体白眼黑檀体红眼黑檀体白眼总计实计频数O预计频数E(O-E)2(O-E)2/Edf(自由度)=4-1=3x2=则查表可知p=因此:(3)伴性遗传(以红眼和白眼为一对性对性状)F1代观察结果红眼♀×白眼♂红眼♀红眼♂白眼♀白眼♂数目总数F2代观察结果红眼♀×白眼♂红眼♀红眼♂白眼♀白眼♂数目总数适合度检验x2观察结果红眼♀红眼♂白眼♀白眼♂总数实计频数O预计频数E(O-E)2(O-E)2/Edf(自由度)=4-1=3x2=则查表可知p=因此:(4)三点测交(本实验不能做三点测验)理由如下:三点测验原理由实验原理可知,是用三显性基因与三隐性基因杂交,制成三因子杂种,再把雌性杂种和三隐性个体测交。基因间发生交换,从而在下一代中得到8种不同表型的个体。由于是与三隐性雄性杂交,所以子代表现型即为亲本的雌性杂种的配子类型。而我们组所进行的实验是以6号为雄性亲本,26号为雌性亲本,而且6号亲本所显示的白眼短翅卷毛均为x染色体上隐性基因的表型。这样在进行杂交后,我们所得到的F1代中雄性个体均为红眼,长翅,直毛的个体,是一个显性个体。这与三点测验所要求的三隐性雄性个体性状不符。•实验改进:反交组做三点测验,可选用F1代雌蝇和亲本型雄蝇做杂交,其后代的统计结果可用三点测验法来进行基因定位.六.预期结果•符合孟德尔遗传经典理论1、分离定律(灰:黑檀=3:1);2、自由组合定律(红灰:红黑檀:白灰:白黑檀=9:3:3:1)3、伴性遗传(红眼:白眼=3:1;雌:雄=1:1);•可能会出现考虑范围以外的表型或者现象.七:实验过程中可能遇到的问题以及解决方法、注意事项•1时间果蝇杂交7-8天后出现蛹,孵化需3-4天,而收集处女蝇要在孵化后8小时内进行.要计划好开始的时间.我们拟定从9月28下午三点开始,则11天后,即10月9日(周日)晚八点点的时候是卵孵化后的第5个小时.此时来收集处女蝇并且与雄蝇混合培养.•2.果蝇的统计比较费事,F1,F2代都要统计并且要在下一代出现前结束.•3.贴好标签,上应有时间.雌雄类型.组别4.果蝇的接种方法应该正确,用毛笔刷上放到侧壁•5看护好自己的果蝇.同时不碰别人组的果蝇.•6.麻醉应该从轻微开始,如果是要挑选处女蝇,则用一点乙醚,迅速挑选,处理。旁边备上培养皿。至于统计性状,则用深度麻醉。谢谢观看
本文标题:遗传学实验设计1
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