开展“高血压”化学发光免疫检测技术可行性分析20120712(DOC)

博奥赛斯（天津）生物科技有限公司高血压系列1运用化学发光免疫检测技术开展“高血压项目”检测的可行性分析一、开展“高血压项目检测”在医疗机构检测中的重要性放射免疫分析技术开展肾素活性—血管紧张素—醛固酮系统（RRAS）测定，临床意义介绍如下：RAAS是人体血压、水和电解质平衡重要的调节系统，对维持人体内环境的稳定起着十分重要的作用。肾素在生理和许多病理情况下，其数量和活性决定了整个体系的活性，测定肾素活性因此成为RAAS活性的标志。实际工作中肾素活性的测定是通过测定血管紧张素I（AngI）的量和在37℃条件下1hAI的增加量（即肾素原被肾素催化转化为AI的量）来计算肾素活性的。肾素的主要生理功能是将血管紧张素原分解成AngI，AI在血管紧张素转移酶（ACE）作用下转变成AngⅡ，并可引起醛固酮（ALD）分泌,以此发挥对机体血压的调节作用。ALD是肾素-血管紧张素系统的一个延伸部分，它也参与了高血压的发病过程。原发性醛固酮增多症患者，肾上腺因肿瘤或增生等原因大量分泌ALD，肾素分泌受抑制。临床上表现为高血压、低血钾。血、尿中ALd水平升高。肾素--血管紧张素--醛固酮系统（RAAS）是由一系列激素及相应的酶组成,通过对血容量和外周阻力的控制，调节人体血压、水和电解质平衡，来维持机体内环境恒定。另外，它与一些肾脏疾病及与肾脏有关的一些疾病有密切的关系。目前检测血浆中肾素活性（PRA）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和醛固酮（ALD）已成为原发性和继发性高血压分型诊断、治疗及研究的重要指标。对一些有关肾脏疾病的诊断、治疗以及发病机理的探讨有着重要意义。二、采用化学发光法检测“高血压项目”是医学检验技术的必然趋势1.本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理博奥赛斯（天津）生物科技有限公司高血压系列2与放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。2.临床实验数据对照案例：2.1试验方案试验目的：通过博奥赛斯试剂盒对临床样本（金域提供）的对比试验，验证博奥赛斯试剂与金域现用试剂是否等效，从而验证博奥赛斯试剂和进口试剂的测值相关性。试验项目：博奥赛斯醛固酮（ALD）定量检测试剂盒（化学发光法）（以下简称博奥赛斯ALD）博奥赛斯血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）定量检测试剂盒（化学发光法）(以下简称博奥赛斯PRA)博奥赛斯血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）定量检测试剂盒（化学发光法）(以下简称博奥赛斯AngⅡ)对照试剂：贝克曼（BeckmanCoulter）ALD放射免疫试剂（以下简称BeckmanALD）索林（DiaSorin）血浆肾素活性放射免疫试剂（以下简称DiaSorinPRA）伯乐免疫测定质控品三水平（371,372,373）（以下简称伯乐质控品）美国病理学家协会（CollegeofAmericanPathologists，CAP）尿样本室间质评（2012年）（以下简称CAP尿样室间质评）试验样本：金域当天新鲜检测样本，样本量应足够进行比对试验。试验前去除严重溶血、脂血、黄疸和染菌的样本。试验方法：双盲法。2.2试验结果与结论2.2.1醛固酮（ALD）定量检测试剂盒（化学发光法）2.2.1.1分析灵敏度、剂量反应曲线性同时测定10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值X与标准偏差SD。计算X-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。博奥赛斯（天津）生物科技有限公司高血压系列3表1ALD分析灵敏度、线性S0发光值校准品浓度（pg/mL）发光值参数297559432291442526222252456235｜r｜0.9995309894630776687519795911963318XS030766762896896313798221012428041231795SDS0105600.131607252990420650557883517335分析灵敏度13.7318559330137871500262278263060本次试验分析灵敏度为13.7pg/mL，｜r｜=0.9995.2.2.1.2精密度（CV%）10孔平行测定高值和低值的样本，计算测定值的平均浓度（X）与标准差（SD）。批内不精密度（CV%）=SD／X×100%表2ALD精密度样本1（2010-5-3075160）样本2（2010-5-3075180）孔数发光值测定值发光值测定值11817980115.98218668070.6521809837126.29222597866.3831802299129.84211410076.6441804197129.45211712576.1351828486124.53217459671.4561874899115.67214634575.371875937115.48212384278.0381831369125.45209637981.4991773696130.91210623880.23101827748124.68212261578.18123.8375.45SD6.024.67CV%4.86%6.20%样本1,2的变异系数分别为4.864%，6.20%.2.2.1.3测值重复性取10~20份新鲜样本，将每份样本分装成3~5份。每天测定一次，连续3~5天。计算每个样本测定值的CV%.X博奥赛斯（天津）生物科技有限公司高血压系列4表3ALD测值重复性2012-6-1高血压样本样本号放免测定值（pg/mL）6-2测定值6-4测定值6-7测定值SDCV%1751287701339.991183.671262.591262.0878.166.19%275104116154.45175.64164.78164.9610.66.43%375105273173.35153.07170.15165.5210.96.59%475106575397.76341.49357.33365.5329.027.94%5751557941108.321038.141106.461084.3139.993.69%675108235279.25246.47257.12260.9516.726.41%7751096260.3153.6555.4456.473.456.11%87515621894.8783.9383.5987.466.427.34%9751575898.0685.6389.9191.26.316.92%10751587758.3449.8550.8453.014.648.75%117515990185.47165.63182.14177.7510.625.97%测得2012年6月1号金域高血压样本11个，分别于6月2号、4号、7号测定，分别计算CV%,结果在3.69%~8.75%之间。2.2.1.4准确性2.2.1.4.1测定伯乐质控品表4ALD测定伯乐质控品伯乐质控品（批号40250）测定值（pg/mL）BeckmanCoulter测定范围（pg/mL）是否在质控范围内37179.1887.0是371200.26130-296是373400.47281-688是2.2.1.4.2测定CAP尿样室间质评表5ALD测定CAP尿样室间质评CAP尿样室间质评（2012）测定值（ug/L）CAP提供ALD测定范围（ug/L）是否在质控范围内N-0147.936.7-100是N-0217.713.5-35是N-0319.714.1-34.2是2.2.1.5与BeckmanCoulter测定值的临床符合率。X博奥赛斯（天津）生物科技有限公司高血压系列5本次测定金域高血压样本213个，分别根据BeckmanALD，和博奥赛斯ALD说明书中普食立位的参考值判断样本值，判断样本值属于正常，偏高或者偏低。结果如下表。表6ALD临床符合率（具体结果见附件一）低值样本数正常样本数高值样本数总数213例2117418213符合例数1716217196不符例数412117临床符合率92.00%2.2.1.6结论2.2.1.6.1博奥赛斯ALD试剂灵敏度为13.7pg/mL、批内不精密度4.864%，6.20%、测值重复性的不精密度在3.69%~8.75%之间、剂量反应曲线线性0.9995、测定伯乐质控品值，CAP室间质评值均在要求范围之内。2.2.1.6.2博奥赛斯ALD试剂和BeckmanALD试剂进行临床对比试验，符合性大于90%，说明两种试剂测值符合性良好。2.2.2血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）定量检测试剂盒（化学发光法）2.2.2.1分析灵敏度、剂量反应曲线性同时测定10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值X与标准偏差SD。计算X-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。表7AngⅠ分析灵敏度、线性S0发光值校准品浓度（ng/mL）发光值参数700631068132220.330039643263092｜r｜0.9996680761870308371.519568632079875XS06672183702646969282375.510731561129713SDS0140375.76809113680954420509359560683分析灵敏度0.027191726710626345231362250825本次试验分析灵敏度为0.02ng/mL，｜r｜=0.999。2.2.2.2精密度（CV%）博奥赛斯（天津）生物科技有限公司高血压系列610孔平行测定高值和低值的样本，计算测定值的平均浓度（X）与标准差（SD）。批内不精密度（CV%）=SD／X×100%表8PRA精密度样本1（2010-6-575012）样本2（2010-6-575039）样本3（2010-6-575044）孔数4度值37度值PRA4度值37度值PRA4度值37度值PRA14.321.517.21.376.645.271.554.212.6624.622.0417.441.256.825.571.824.652.8335.3721.4516.081.216.415.21.264.042.7844.4623.0918.631.135.914.781.334.182.8554.7723.2918.521.216.2150.953.812.8663.2418.3515.111.487.075.590.973.742.7774.3821.9517.571.647.255.610.923.892.9784.5321.516.971.33.872.5794.9723.718.73X17.365.292.79SD1.210.320.12CV%6.97%6.05%4.30%样本1,2,3的变异系数分别为6.97%，6.05%，4.3%。2.2.2.3测值重复性取10~20份新鲜样本，将每份样本分装成3~5份。每天测定一次，连续3~5天。计算每个样本测定值的CV%.表9PRA测值重复性2012-6-4高血压样本样本号放免测值（ng/mL/hr）6-5测值6-6测值6-7测值6-8测值SDCV%1751412.162.172.031.991.912.030.115.42%2751561.041.331.131.191.131.20.097.50%3752471.982.282.12.262.492.280.167.02%4753832.432.672.512.252.362.450.187.35%57540422.8113.9413.3912.9712.1413.110.765.80%67547826.6126.1323.5925.5427.6725.