乙型肝炎病毒微生物学及检验

第二节乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(HBV)以肝脏炎性病变为主的传染性疾病是乙型肝炎的病原体乙型肝炎全球分布乙肝现状•乙肝病毒携带者占人口10%.•全世界20亿曾感染过、有3.5亿乙肝携带者、我国乙肝携带者总数高达1.3亿.•10%转化为各种慢性肝病，包括有慢性肝炎、肝硬化和肝癌•我国慢性肝病人数3000万，肝病死亡人数每年30万全球HBV感染流行情况20亿人曾感染HBV,占全球人口1/3慢性HBV感染者约3.5~4亿，其中亚洲占2/3,中国占1/3全球60亿人口15%~25%最终将死于与HBV有关肝病每年全球死亡75~100万例，占死因第7位LavanchyD.JViralHepatitis.2004;11:97-107一生物学特性•形态与基因结构嗜肝DNA病毒科正肝DNA病毒属电镜：3种形态大球形颗粒小球形颗粒管型颗粒完整的HBV颗粒为大球形颗粒，又称Dane颗粒，直径42nm，分为包膜与核心两部分，包膜HBsAg，核心部分含有环状双股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg等，是病毒复制的主体1大球形颗粒（Dane）：直径42nmDane颗粒双层外壳核心DNADNA聚合酶外衣壳：相当于一般病毒包膜内衣壳：相当于一般病毒核衣壳病毒衣壳•成分：蛋白质–由壳粒组成。壳粒是衣壳的形态学亚单位，多肽分子是衣壳的化学亚单位•功能–保护病毒核酸–参与感染过程–具有抗原性•2小球形颗粒是HBV感染肝细胞时过剩的病毒衣壳组成直径22nm成分HBsAg少量PreS2+HBsAg不含DNA及DNA聚合酶无法复制•3管形颗粒成分与小球形颗粒相同，是由多个小球形颗粒串联而成直径22nm长100—500nm无法复制三种形态之间的关系基因组基因组长约3.2kb，为部分双链环状DNApre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAgDNARNADNA转录逆转录HBV的复制方式很特殊,在复制过程中有逆转录过程,与逆转录病毒相似,逆转录后的DNA可整合至靶细胞的染色体HBV的复制3、HBV的抗原组成表面抗原HBsAg•外衣壳抗原前S1抗原前S2抗原•内衣壳抗原核心抗原HBcAge抗原HBeAg大球形颗粒形态（完整的病毒，具有传染性）HBsAgHBcAgHBVDNADNAP聚合酶》（外膜蛋白）（核衣壳蛋白）•机体感染HBV后产生相应的免疫反应，形成多种不同的抗原抗体系统•表面抗原抗体系统(HBsAg，抗HBs)•核心抗原抗体系统(HBcAg，抗HBc)•e抗原抗体系统(HBeAg，抗HBe)（1）表面抗原•曾用名“澳抗”•出现时间：HBV感染后2—6个月•由S基因码产生的蛋白•4个亚型adradwaywayr抗-HBs●出现时间：急性感染后期或HBsAg消失后（空白期或窗口期）●抗-HBs为保护性抗体（中和抗体）其出现标志着HBV感染进入恢复期●抗-HBs对相同HBsAg亚型的HBV再感染有免疫力，但对不同亚型的HBV保护力不完全。（2）核心抗原•是Dane颗粒中核心组成部分•被HBsAg覆盖，血中不易检出•抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志•抗HBc-IgG：凡“有过”HBV感染者均可阳性•HBcAg的免疫原性最强•抗HBc-IgG可终身阳性（3）e抗原•为可溶性蛋白•血清HBeAg阳性者中，HBVDNA阳性率为92%左右，是HBV复制和传染的感染性标志•其抗体有利于抑制病毒复制，抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低乙肝（3）HBeAgHBeAg是HBcAg的降解产物HBVC基因前C区C区前C/C蛋白HBeAgHBcAg表达切割、加工分泌到细胞外HBeAg只存在于血清中4培养特性•黑猩猩最敏感疫苗效价安全评价•不能在细胞培养中分离培养5抵抗力•抵抗力强70%乙醇无法灭活•HBV传染性与抗原性不一致二微生物学检验•标本处理：1.常规检测：24小时分离5天内2—8℃5天后—20℃/—70℃2.核酸检测：血清（常用）血浆肝素抗凝X6小时处理24小时按成保存—70℃乙型肝炎的快速诊断光镜-----包涵体电镜免疫荧光ELISA分子生物学技术杂交SouthernblotPCRNorthernblot直接病毒诊断•HBVDNA：是HBV感染最直接，最灵敏和最特异的检测指标，且血清中HBVDNA的水平可作为治疗方案与疗效观察的指标。HBVDNA定量检测酶联免疫法ELLSAE固相抗体标本（含抗原）酶标抗体EE底物双抗体夹心法检测抗原（+）（-）EEEEEEEEE双抗体夹心法测抗原EEE底物固相抗体标本（含抗原）酶标抗体双位点一步法检测抗原固相抗体标本（含抗体）抗原酶标抗体底物EEE竞争法检测HBeAb乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价(1)(2)(3)(4)(5)常见模式及其意义＋－＋－＋急性或慢性乙型肝炎，高传染性＋－－－＋急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg携带者＋－－＋＋急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，弱传染性－＋－－＋急性HBV感染康复期或有既往感染史，有免疫力－－－＋＋乙肝恢复期，弱传染性－－－－＋急性HBV感染“窗口期”，或既往曾感染过乙肝－＋－－－接种HBV疫苗或HBV感染后康复－＋－＋＋急性乙肝康复期，开始产生免疫力－－－－－无HBV感染＋－－－－无症状携带者乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价(1)(2)(3)(4)(5)少见模式及其意义＋＋＋－＋不HBsAg亚型病毒的双重感染＋＋－－＋HBsAg亚型病毒的双重感染＋－＋＋＋乙肝趋向恢复1表面抗原HBsAg2表面抗体抗-HBs3e抗原HBeAg4e抗体抗-HBe5核心抗体抗-HBc三临床意义•HBsAg无症状携带者主要传染源•潜伏期30—160天传播方式1、输血传播2、性接触传播(同性恋)3、垂直传播4、口-口传播（唾液检测HBV-DNA）5、静脉药瘾，血液透析医源性传播输血或注射器、血透机、内窥镜等消毒不严格乙肝垂直传播主要途径：围产期（新生儿皮肤、粘膜有破损而接触母血）和产后密切接触经胎盘及生殖细胞传播：有可能垂直传播是我国HBV感染的主要模式HBV感染的自然史急性HBV感染慢性HBV感染成年期感染3~5%婴儿期感染95%肝硬化肝功能衰竭肝细胞癌慢性乙型肝炎5年发生率12~25%5年发生率6~15%5年发生率20~23%肝移植AdaptedfromEASLConsensusStatement.JHepatol2003;39(S1):S3-25肝腹水切断传播途径加强宣传教育，增强防治意识管理传染源避免不必要的打針、輸血、紋身、穿耳洞及紋眉不共用牙刷及刮鬍刀表面抗原携带者不應捐血记住…不管每剂乙肝疫苗的接种耽搁了多久,都不要重新开始,继续未完成的接种就可以了！思考题•1、乙肝的主要传播途径？•2、目前乙肝的主要检测方式？