HPV检测技术及临床应用

HPV检测技术及临床应用内容HPV检测技术的诞生背景HPV检测临床应用的进展HPV检测主要的技术及特点硕世21HPV分型定量检测的优势HPV与宫颈癌关系的确立ProfessorHaraldzurHausenNobelPrizeforMedicine20081976年：HaraldzurHausen在宫颈癌及疣体患者中发现了HPVDNA；1984年：HaraldzurHausen从宫颈癌患者中克隆了HPV16型和18型病毒。“ThefirstonewhodemonstratedHPV-DNAsequencesincervicalcancerbiopsiesandcervicalcancercelllines.”Year1975198019851989199319972001200520105-存活率68.1%67.9%66.4%71.0%70.9%71.6%70.4%68.0%67.9%CytologyReducedCervicalCancerIncidencebutUnmetNeedStillExists:SEER9Incidence&U.S.Mortality1975-2010,AllRaces,Females.RatesareAge-Adjusted.(accessed3/25/14)细胞学减少了宫颈癌的发生率，但尚未满足的需求依然存在•对于CIN2及以上病变检测的敏感性，细胞学低于HPVDNA检测1•精确性差：不同的细胞病理学医生之间或实验室之间对结果的判读，存在高度的变异2•只能分辨已经处于癌或癌前病变的妇女，不能分辨具备发展为癌前病变的风险妇女1.CastlePE,etal.LancetOncol2011;12:880–890plussupplementarytables.2.WrightTCetal.IntJCancer.2013Oct7.doi:10.1002/ijc.28514.[Epubaheadofprint]单独使用细胞学的局限性细胞学假阴性率高女性确诊为浸润癌（ICC）的筛查史原因Kaiser1Swedishaudit2近期没有筛查464(56%)789(64%)细胞学漏检263(32%)300(24%)异常细胞学随访时漏检106(13%)91(7%)1.LeydenWA,etal.JNatlCancerInst2005;97:675683;2.AndraeB,etal.JNatlCancerInst2008;100:622629.细胞学临床敏感性明显更低于HPVDNA检测WhitlockEP,etal.AnnInternMed.2011;155:687697,W2145.Studiesperformedindevelopedcountriesinwomen30yearsandolder.平均增加了35.7%Bigras(N=13,842)Cardenas(N=1,850)Coste(N=3,080)Kulasingam(N=774)Mayrand(N=9,977)Petry(N=7,908)020406080100细胞学HPVDNA检测≥CIN2的检测敏感性(%)细胞学缺乏精确性细胞学的判读重复性差NILMASCUSLSIL≥HSILNILM78%19%3%1%ASC-US39%43%17%2%LSIL4%22%68%6%≥HSIL3%23%27%47%质控（QC）评审诊断重读了4948份液基细胞学片子原始诊断结果Re-readof4948Liquid-basedCytologySlidesStolerMandSchiffmanM,JAMA.2001;285:1500-1505ASC-US和HSIL的结果判读一致性最差LabALabBLabCLabD数量12,294421816,97912,442平均年龄40.937.939.340.1≥ASC-US3.8%5.2%8.1%9.9%细胞学敏感性*42.051.060.573.0cobas®HPV检测敏感性*90.188.288.488.9*For≥CIN2Wrightetal.Int.J.Cancer,2014;134(8):1835-43ATHENA临床研究:细胞学在各实验室间检测的变异很大0%5%10%15%20%25%0.04.515.027.039.051.063.075.087.099.0111.0119.51618hrOtherNegKhanetal.JNatlCancerInst.2005;97:1072-1079.随访月数发展为≥CIN3的百分比≥30岁，细胞学为NILM，10年≥CIN3的累计风险13,229womenaged≥30years,accordingtooncogenicHPVstatusatenrollment细胞学不能像HPVDNA检测那样，可预测风险HPVDNA检测确定了妇女随着时间CIN3以上病变的发展风险内容HPV检测技术的诞生背景HPV检测临床应用的进展HPV检测主要的技术及特点硕世21HPV分型定量检测的优势1941年巴氏涂片1970s豪森提出HPV感染与宫颈癌有关1996年TCT2001，ASCCPHPV用于分流2003，ASCCP细胞学&HPV2012，ASCCP细胞学&HPV分型2016年，ACOGHPV初筛美国宫颈癌死亡人数下降85%•1941年，死亡26000人•2010年，死亡4210人。2009年，ASCCPHPV16/18分型的应用宫颈癌筛查重大进展时间表1.HPV联合细胞学筛查（2012年ASCCP/ACS/ASCP）SaslowD,SolomonD,LawsonHWetal.AmJClinPathol.2012Apr;137(4):516-42.人群推荐筛查方法＜21岁不筛查21～29岁每3年一次的单独细胞学筛查30～65岁每5年一次的HPV和细胞学联合筛查（优先推荐）每3年一次的单独细胞学筛查（可接受的）65岁近10年有连续3次阴性细胞学结果或连续2次阴性联合筛查结果且末次筛查在近5年内的65岁女性,停止筛查。HPV检测联合细胞学筛查（30岁及以上）ASCCP，AmericanSocietyforColposcopyandCervicalPathology：美国阴道镜和宫颈病理学会CSCCP，ChinaSocietyforColposcopyandCervicalPathology：中国阴道镜和宫颈病理学会LSIL，Low-gradeSquamousIntraepithelialLesion)：低度鳞状上皮内病变SaslowDetal,JournalofLowerGenitalTractDisease,2012HPV检测+细胞学细胞学≥LSILHPV+&NILMHPV-&ASC-USHPV-&NILMHPV+&ASC-US阴道镜间隔5年筛查ASCCP推荐：间隔3年筛查CSCCP推荐：间隔1年筛查HPV16/18+HPV16/18-HPV16/18分型立即重复联合检测间隔12个月HPV+或≥ASCHPV-&NILM阴道镜间隔3年筛查重复联合检测间隔12个月2.21岁及以上女性细胞学ASC-US的分流管理(2013年ASCCP指南推荐)意义不明的非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）阴性≥ASC常规筛查（3年内细胞学检查）阴道镜不充分阴道镜检查未观察到上皮病变，首选颈管取样充分阴道镜检查转化区有上皮病变，可接受颈管取样HPV阳性HPV阴性重复联合检测间隔3年参照ASCCP指南管理重复细胞学，间隔1年（可接受）HPV检测（首选）L.StewartMassad,etal,JournalofLowerGenitalTractDisease,2013.3.25岁及以上女性HPV检测宫颈癌一线初筛(2016年ACOG指南推荐)HPV初筛HPV16/18型阳性阴道镜其它12高危HPV+细胞学12个月后随访阴性常规筛查≥ASC-USNILMACOG，AmericanCongressofObstetriciansandGynecologists：美国妇产科医师学会NILM，negativeforintraepitheliallesionormalignancy：未见上皮内病变或恶性病变ASC-US，AtypicalSquamousCellsofUndeterminedSignificance：意义不明的非典型鳞状上皮细胞2016ACOGpracticebulletin，Number157.HPV检测预防宫颈癌（欧洲试验结果）•4个欧洲随机试验，分别在瑞典、荷兰、英国和意大利进行•包括176,464位20-64岁妇女•随访的中位年数为6.5(1,214,415人-年)•HPV初筛相比细胞学，减少了宫颈癌的发生率Roncoetal.Lancet，2014HPV检测筛查宫颈癌的预防效果优于细胞学100908070605040302010002468累计检出率(每105)随访时间(年)基线时妇女检测结果为阴性细胞学筛查HPV检测筛查Roncoetal.Lancet，2014汇总四个随机对照试验的宫颈癌发病率：细胞学（对照组）与HPV检测（试验组）美国ATHENA研究•研究人群：美国46,887位接受常规筛查的妇女(其中32,260位30岁，41955位25岁)•受检者同时妇科检查，液基细胞学检查，HPV检测和基因分型•所有HPV(+)和/或细胞学(+)；和选取部分HPV(-)/NILM（未见上皮内细胞病变）的人群行阴道镜检查比较不同筛查策略效能（25岁及以上女性）策略筛查检测CIN3+基线CIN3+1-3年CIN3+漏检阴道镜每检测1个CIN3+所需的阴道镜数细胞学45,166143361681,93410.8混合策略*82,994143971073,09712.9HPV初筛52,65119797533,76912.8权衡CIN3+的检出率和阴道镜转诊率Wrightetal.GynecolOncol2015*混合策略是指25-30岁细胞学筛查策略结合30岁及以上HPV检测联合细胞学筛查策略0246810121416宫颈癌发生率（每100,000）年龄组*肿瘤登记(1975-2010)*美国宫颈癌的发病率25–34岁时快速上升期SEER（Surveillance,Epidemiology,andEndResults）PresentedtoFDApanel,12March2014AgeGroup40%30%20%10%0%25-2940-4930-3950≥CIN3病例（%）21-2428%17%10%37%8%25%N=22,006WomenN=6647Women28%的≥CIN3病例发生在25-29岁年龄段57.346.738.327.80%20%40%60%80%100%25-2930-3940-49≥5042.753.361.772.2细胞学漏检了25-29年龄段的大多数≥CIN3病例PercentagesshownareforhrHPV+womenwith≥CIN3,N=252HuhW,etal.27thInternationalPapillomavirusConference,Berlin,Germany,September17–22,2011,OP-229.比率≥CIN3(%)年龄≥ASC-USNILM4.宫颈病变术后的追踪与管理诊断性切除术或转化区消融术诊断性切除术阴道镜充分阴道镜不充分，CIN2,3复发，或颈管取样为CIN2,3HPV检测+细胞学12个月和24个月连续两次联合检测均为阴性重复联合检测3年内常规筛查任何检测异常阴道镜结合颈管取样2013年ASCCP指南推荐的CIN2,3管理**如果妊娠或年龄在