血小板血型系统及检测技术

单击此处编辑母版标题样式2020/2/291五、交叉配血(MatchcrossBlood)2020/2/292交叉配血(MatchcrossBlood)一、交叉配血的概念•交叉配血实验也称配合性实验，实际上是检查不配合性。检查患者和献血员之间是否有对应的抗原、抗体存在。1.主侧交叉配血供血者的红细胞与受血者的血清反应2.次侧交叉配血受血者的红细胞与供血者的血清反应3.自身对照受血者红细胞与自身血清反应，排除自身抗体，DAT+，假凝集等干扰2020/2/2932020/2/294交叉配血(MatchcrossBlood)二，交叉配血的方法1.只能检出不配合的完全抗体盐水介质法2.可检出不配合的不完全抗体抗人球蛋白法蛋白酶法低离子介质法等3.改良的交叉配血方法2020/2/295交叉配血(MatchcrossBlood)•聚凝胺（Polybrene)配血法利用高价阳离子的多聚季氨盐溶解后产生的大量正电荷可中和红细胞表面的负电荷缩小其之间的距离•微柱凝胶配血法（卡式配血法）2020/2/296几种交叉配血试验的方法学评价配血方法缺点优点盐水配血试验简单、快速检不出IgG酶介质试验简便、经济准确性、稳定性差抗球蛋白试验准确、可靠复杂、费时、贵凝聚胺试验快速、准确需特殊试剂微柱凝胶试验灵敏成本高2020/2/297交叉配血(MatchcrossBlood)三，交叉配血不合的原因（一）主侧不合：Rs+Dc1.不规则抗体有同种抗体或自身抗体2.冷凝集3.假凝集4.A2抗A1(1%-8%A2,22%A2B个体有抗-A1)5.Dc的DAT+2020/2/298交叉配血(MatchcrossBlood)（二）次侧不合：Pc+Ds1.Pc做DAT：阳性见于自身抗体，输血反应2.Ds中有不规则抗体3.忽略ABO亚型误定血型4.冷凝集素吸附于Pc5.异型输血2020/2/299四，交叉配血的注意事项1.离心时间与速度2.水温箱的温度37℃3.水质，离子影响4.用新鲜的标本5.做抗人球实验时最好用血清6.注意输血史，妊娠史7.注意溶血的结果，被检血清中含有溶血性抗体，红细胞抗原+2020/2/2910SoundOfColors•我们何其幸运•无法确知•自己生活在什么样的世界•we’reextremelyfortunate•nottoknowprecisely•thekindofworldwelivein.•—辛波丝卡•《we’reextremelyfortunate我们何其幸运》2020/2/2911血小板血型系统及检测技术2020/2/2912一、血小板血型抗原•定义:指用同种免疫抗体检测出的血小板表面抗原分类：血小板相关抗原血小板特异性抗原2020/2/2913（一）血小板相关抗原（platelet-associatedantigen）•血小板表面存在的与其他细胞或组织共有的抗原•包括：红细胞的血型系统（ABO等）人类白细胞抗原（HLA）2020/2/2914血小板HLA系统血型抗原Chromosome6DPDQDRBCAClassIIClassI存在HLA-A和B位点的抗原HLA-C位点的抗原未发现HLA-DP、DQ和DR等位点抗原P672020/2/2915（二）血小板特异性抗原人类血小板抗原（humanplateletantigen，HPA）•血小板特有的,其他组织细胞没有•表现血小板独特的遗传多态性•均存在于血小板膜糖蛋白（GP）上•被国际输血协会组织确认的血小板特异性抗原已有6个系统，12个抗原，正式命名为HPA-1~HPA-5和HPA-15。2020/2/2916命名规定如下：•在系统前冠以HPA，即人类血小板抗原（humanplateletantigen）英文缩写•按发现顺序用数字编号•只有在共显性双等位基因全被检测出来后，才能被称为系统，对偶抗原按其在人群中频率由高到低，用字母命名，高的为a，低的为b•尚未发现对偶抗原的，给予暂时命名，在等位基因数字后加后缀w表示P982020/2/2917血型系以往命名糖蛋白(GP)定位抗原以往抗原命名表现型频率白人日本人中国人HPA-1ZwPLAGPIIIaHPA-1aZwaPLA1899999.99HPA-1bZwbPLA2113.7n.t.HPA-2KoSibGPIbHPA-2aKob99.3n.t.n.t.HPA-2bKoaSiba14.625.49.1HPA-3BakLekGPIibHPA-3aBakaLeka87.778.979.1HPA-3bBakb64.1n.t.70.5HPA-4PenYukGPIIIaHPA-4aPenaYukb99.999.999.9HPA-4bPenbYuka0.21.71.8HPA-5BrHcZavGPIaHPA-5aBrbZavb99.2n.t.n.t.HPA-5bBraZavaHca20.6n.tn.tDUZOPLFNek2020/2/2918二、血小板抗体•产生机理：机体对血小板表面或相关抗原免疫•临床分类：血循环中的游离抗体结合于血小板上的抗体(PAIgG)•血型学分类：•血小板同种抗体：抗体不是针对自身抗原，而是与同种异基因的红细胞发生反应自身抗体：受血者体内产生的抗体，针对自己本身的红细胞抗原。•见于：血小板输注治疗无效；同种免疫血小板减少症；自身免疫血小板减少症；药物、病毒、细菌引起的血小板减少症2020/2/2919•血小板表面存在众多复杂抗原，因此反复大量输注血小板的患者约50%以上产生血小板同种抗体•据报道HLA抗体占多数，约80%左右•HPA抗体单独存在频率较低（2%-3%）•HPA抗体与HLA抗体共存（18%左右）•必须首先识别并去除血清中存在的HLA抗体，才能分析血小板抗体的特异性2020/2/2920鉴别有无HLA抗体存在的方法淋巴细胞毒试验:抗原抗体反应在补体参与下破坏LC，活OR死细胞染色鉴别混合淋巴细胞培养：两个无关LC体外培养，MHC不同，刺激增殖。计数转化后的母细胞或者被摄取的DNA量判定除去血小板表面HLA抗原方法0℃氯喹或酸溶液处理血小板P79P832020/2/2921血小板血型的临床意义•血小板输注无效•输血后紫癜•新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜•血小板的自身免疫作用P1002020/2/2922一、血小板输注无效（platelettransfusionrefractoriness，PTR）2020/2/29231、PTR定义•指患者在输注合适剂量的血小板后没有产生“适当的反应”，即连续两次输注足量随机供者血小板后，没有达到合适的校正血小板计数增加值（CCI），临床出血表现亦未见改善2020/2/29242、PTR原因•免疫因素（17.5%）：反复输注血小板或有妊娠史的妇女，血清中产生血小板同种抗体，再次输注，发生免疫反应，血小板被巨噬细胞吞噬•HLA抗体、HPA抗体、ABO抗体、自身抗体、药物抗体、循环免疫复合物等•非免疫因素（67.5%）：发热、败血症、脾肿大、骨髓移植、DIC、静注抗菌素等；血小板质量•非免疫+免疫因素（15%）2020/2/2925二者区别同种异体免疫输入的血小板很快破坏，输注后1小时和24小时均不见计数增高非免疫因素输注后1小时血小板计数增高，但24小时计数不增高或受影响2020/2/29263、PTR的判定指标•临床:出血趋势不减轻，或出现输血性紫癜，出血加重。血小板计数较输注前不仅不增高，有时还会下降。判定血小板输注效果可通过•1.校正血小板计数增加值（correctedcountincrement,CCI）:CCI=(输注后血小板计数-输注前血小板计数)×体表面积(m2)输入血小板总数（×1011）PTR判定标准:1小时CCI﹤7.5×109／L20-24小时CCI﹤4.5×109／L•2，血小板回收率（percentageplateletrecovery,PPR）:PPR=(输注后血小板数－输注前血小板数)×血容量(L)输入血小板总数×2/3PTR判定标准：1hPPR﹤30%20-24hPPR﹤20%2020/2/2927•一个体表面积为1.5的患者接受了4×1011的血小板后，其24h血小板上升了25×109/L。计算CCI•一个体重80Kg的患者，输注了4×1011的血小板后，其24小时血小板上升了25×109/L血容量按照75ml/kg计算。计算PPR。2020/2/29285、PTR的处理流程•首先考虑血小板质量问题，可输注ABO同型的非库存血小板，以排除ABO系统的抗体或血小板质量方面的影响因素•若有发热、感染、DIC等导致血小板消耗增加的因素存在，积极治疗原发病，并增加输注剂量•若有同种抗体存在，则挑选HLA、HPA相合的供者血小板，或使用激素、免疫抑制剂或静脉注射免疫球蛋白。•若病人持续输注血小板效果不佳而又找不到明确的原因，则应考虑药物性抗体的存在，停用或换用相关药物2020/2/2929二、输血后紫癜（posttransfusionpurpura,PTP）•定义：指输注全血或血小板后引起的急性、暂时性的同种免疫性血小板减少综合征.•临床表现：在输血后1周左右突然发生瘀点、瘀斑和黏膜出血，严重者有内脏和颅内出血大多数的患者是女性，有输血或妊娠史P1022020/2/2930PTP预防和治疗措施•血小板抗体筛选•血小板交叉配血试验，选择配合型的血小板供体输注•大量静脉注射免疫球蛋白2020/2/2931新生儿同种免疫血小板减少性紫癜（neonatalalloimmunethrombocytopenia,NAITP）2020/2/2932病因：胎儿和母亲的血小板血型不合，使母亲产生同种抗体，通过胎盘进入胎儿体内，与胎儿血小板反应而导致胎儿和新生儿的血小板减少症状：内脏和中枢神经系统出血，脑水肿，婴儿出生时(12~24小时)有严重、广泛的瘀点和瘀斑。最严重的并发症是颅内出血。或出生时正常,于二、三天后出现血小板减少症诊断：母体血小板抗体检测，抗原检定患儿血小板抗体(表面、游离)检测预后：死亡率13%P1042020/2/2933•治疗措施给患儿输入与母体血清中同种抗体无反应性的血小板对患儿进行换血治疗，纠正患儿的血小板减少。对新生儿的治疗一般选用静脉内注射免疫球蛋白预防对血浆中含有高效价血小板同种抗体的孕妇做血浆置换治疗，降低孕妇血浆中同种抗体的含量，以减少对胎儿和新生儿的危害。2020/2/2934血小板的自身免疫作用——特发性血小板减少性紫癜（idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP）•定义：免疫系统失调，患者体内存在抗血小板自身抗体，使血小板大量破坏，是一种自身免疫疾病•临床表现：出血症状P1052020/2/2935•发病机制血小板自身抗体可与自身和同种血小板结合，破坏血小板血小板自身抗体与巨核细胞结合，影响血小板的生成•血小板自身抗体的分布血小板相关免疫球蛋白（PAIgG）：与血小板上的相关抗原结合，PAIgG升高的水平与血小板减少的程度有关游离抗体2020/2/2936ITP的治疗•血小板输注不仅没有疗效，还有可能因血小板表面各类血小板抗原的同种免疫作用，导致输血后紫癜等输血反应治疗方法•应用皮质激素等免疫抑制剂•脾切除术•大量血浆置换•大剂量静脉注射免疫球蛋白