脂质体改

实验中心网站：***2020年2月29日星期六药学综合大实验（二）脂质体的制备及检测2脂质体的制备及包封率检测脂质体的制备及检测3实验目的1、掌握注入法制备脂质体的工艺。2、掌握脂质体包封率的测定方法。3、熟悉脂质体形成原理，作用特点。脂质体的制备及检测4实验原理脂质体系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊(vesicle)，也有人称脂质体为类脂小球或液晶微囊，类脂双分子层厚度约4nm。磷脂的结构特点为一个磷酸基和一个季铵盐基组成的亲水性基团，以及由两个较长的烃基组成的亲脂性基团。生物学定义:当两性分子如磷脂分散于水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起，避开水相，而亲水头部暴露在水相，形成具有双分子层结构的的封闭囊泡，称为脂质体。脂质体的制备及检测5在脂质体内，由双分子层分成不同的隔室，亲脂性基团彼此包封隔室称油相隔室，由亲水性基团包封隔室称水相隔室。在脂质体制备过程中，若为非极性药物，则先与磷脂、胆固醇混合后，溶于有机溶媒中，当形成脂质体时，包封在油相隔室中；若为极性药物时，则先溶于水相中，当形成脂质体时，包封在水相隔室中。脂质体的制备及检测6一、脂质体分类：①单室脂质体（SUV），粒径约10～100nm；②大单室脂质体（LUV），粒径约100～1000nm；③多层脂质体（MLV），粒径约100～20000nm；脂质体的制备及检测7二、脂质体制备方法脂质体制备方法有多种，可根据药物的性质或需要进行选择。（1）薄膜分散法：一种经典的制备方法，将类脂材料溶解在有机溶剂中,然后在旋转蒸发器上,于真空下蒸除溶剂,加入缓冲液,再加入一些小玻璃球帮助分散，可形成大单室脂质体。（2）注入法：分为乙醚注入法和乙醇注入法。本次实验用乙醇注入法。注入法适用于实验室小量制备脂质体，制得的脂质体为大单室脂质体。此法较温和，包封率高且被氧化的可能性小。（3）反相蒸发法：是制备多层脂质体或大单室脂质体的方法，此法包封率高。（4）冷冻干燥法：适用于在水中不稳定的药物制备脂质体。脂质体的制备及检测8（5）熔融法：适用于制备多相脂质体，稳定，可加热灭菌。（6）超声波分散法：将类脂材料溶解在有机溶剂中,然后在旋转蒸发器上,在真空下蒸除溶剂,加入缓冲液,再加入一些小玻璃球帮助分散，可形成大单室脂质体，经超声处理，得到小单室脂质体。此法操作简便，但包封率较低。（7）高压乳匀法：将各成分加入溶剂中，通过高压均质机均匀分散成脂质体。脂质体的制备及检测9三、脂质体中药物装载机理主要分为“主动载药”与“被动载药”两大类。所谓“主动载药”，即通过脂质体内外水相的不同离子或化合物梯度进行载药，主要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度)等。传统上，人们采用最多的方法是“被动载药”法。所谓“被动载药”，即首先将药物溶于水相或有机相(脂溶性药物)中，然后按所选择的脂质体制备方法制备含药脂质体。“被动载药”的共同特点是：在装载过程中脂质体的内外水相或双分子层膜上的药物浓度基本一致，决定其包封率的因素为药物与磷脂膜的作用力、膜材的组成、脂质体的内水相体积、脂质体数目及药脂比(药物与磷脂膜材比)等。评价脂质体质量的指标有粒径、粒度分布和包封率等。其中脂质体的包封率是衡量脂质体质量的一个重要指标。脂质体的制备及检测10四、包封率的测定C总－C游离包封率％＝_________×100％C总式中：C总－脂质体混悬液中的药物浓度C游离－未包入脂质体中的药物浓度脂质体的制备及检测11实验内容（一）实验材料与设备1.实验材料:水杨酸、注射用卵磷脂、胆固醇、95％乙醇、生理盐水。2.实验仪器:磁力搅拌器、吸耳球、光学显微镜、玻璃棉、10mL注射器筒、0.22μm微孔滤膜、紫外分光光度仪、容量瓶等。脂质体的制备及检测12（二）实验部分1.水杨酸脂质体的制备【处方】水杨酸0.25g卵磷脂2g胆固醇0.2g生理盐水适量【制备】(1)磷脂、胆固醇乙醇溶液的配制：取处方量卵磷脂、胆固醇溶于10～15mL的乙醇中，即得。（2）水杨酸脂质体的制备：取生理盐水约30mL于50mL烧杯中，置磁力搅拌器上，加热至60℃左右，将含卵磷脂、胆固醇的乙醇液慢慢滴加于生理盐水中（5min左右滴完），之后继续搅拌约30min，使乙醇完全蒸发除去，加入水杨酸，脂质体的制备及检测13再继续搅拌至少2h，加生理盐水至50mL，取下磁力搅拌器，镜检，即得。【质量检查】(1)脂质体的形态与粒度：显微镜（油镜）(2)异物：显微镜下观察有无异物（有色斑块，棒状结晶等）。(3)包封率的测定（超滤膜过滤法）：取3～5mL水杨酸脂质体混悬液，用0.22μm微孔滤膜过滤，收集滤液。取0.3mL滤液置25mL容量瓶内，加0.5%硫酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，在297nm波长处测定吸光度，计算未包入脂质体中水杨酸的浓度。脂质体的制备及检测15实验结果与讨论1．绘制显微镜下脂质体的形态图。2．计算包封率。脂质体的制备及检测16思考题1.以脂质体作为药物载体的特点。请讨论影响脂质体形成的因素。2.如何提高脂质体对药物的包封率？