葡萄糖测定试剂盒(葡萄糖氧化酶法)标准化操作规程GLU-SOP

葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶法）标准化操作规程1目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。2授权操作人经培训且考核通过的实验室检验人员。3适用范围本试剂适用于体外定量检测人血清、血浆或尿液中葡萄糖的浓度。4检验方法本试剂盒采用氧化酶法测定葡萄糖的浓度。5检验原理样品中的葡萄糖在试剂中葡萄糖氧化酶（GOD）的催化作用下氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶（POD）的催化下与苯胺类色原物质和4-氨基安替比林作用产生水和醌亚胺色素，醌亚胺色素的生成量与样品中葡萄糖的含量成正比，通过测定特定波长处反应最终生成的色素量，可以计算出样品中葡萄糖的浓度。葡萄糖＋H2O+O2GOD葡萄糖酸＋H2O2H2O2+4-氨基安替比林+苯胺类色原物质POD醌亚胺色素+水6检验标本要求6.1葡萄糖样本应采用含氟化钠的样本管收集，以防止细菌污染和糖酵解。6.2血清或血浆样本应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。肝素抗凝血浆样本。6.3样本分离后，请于当日测定。如当日不能完成测定，请作如下保存：血清或血浆样本在2℃~8℃可稳定24小时、30℃可稳定4小时。尿液样本在2℃~8℃可稳定1天，必要时可采用硫柳汞（0.23mmol/L）等化学防腐剂。7试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司葡萄糖试剂盒（氧化酶法）7.2试剂组成试剂盒主要组成成份浓度试剂1(R1)过氧化物酶375U/L4-羟基苯甲酸15mmol/L4-氨基安替比林0.75mmol/L磷酸盐缓冲液110mmol/L试剂2(R2)葡萄糖氧化酶6KU/L磷酸盐缓冲液110mmol/L7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1份试剂1与1份试剂2混合后，可作为单试剂使用。混合后的试剂溶液避光储存于2℃~8℃可稳定7天。7.3.2试剂应防止日光直接照射。7.4试剂的变质指示：若试剂混浊，或以水为空白在500nm处吸光度值大于0.100A时，则不能使用。8实验仪器及性能指标8.1实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1空白吸光度：A≤0.100。8.2.2分析灵敏度：在样本浓度≥0.5mmol/L时，样本吸光度能够与空白吸光度产生差别。8.2.3线性范围：0.5mmol/L～30mmol/L，线性相关系数：r≥0.9900；[0.5，6]mmol/L范围内，线性绝对偏差应不超过±1.2mmol/L；（6，30]mmol/L范围内，相对偏差不超过±15％。8.2.4准确度：当参考物质浓度≤4.16mmol/L，实测值与标示值的绝对偏差应不超过±0.833mmol/L；当参考物质浓度＞4.16mmol/L，实测值与标示值的相对偏差应在±15%范围内。8.2.5测量精密度：重复性：CV≤5.0%。批间差：R≤6.0%。9校准程序9.1校准品来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学校准血清9.2校准品的组成：人血清9.3校准品的存贮：未复溶的校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定至标签失效期。复溶后校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定7天；15～25℃可稳定1天；-20℃可稳定30天。9.4校准品使用注意事项9.4.1若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。9.4.2不同批号的校准血清不能交叉使用，因为批号于批号之间的赋值不同。9.4.3请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。9.5校准程序建议使用试剂盒配套的校准品，以纯化水和校准品进行2点校准测定。测定后仪器自动拟合成校准曲线。当试剂批号更换或质控失控时，需要重新校准。10质量控制10.1质控品来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学质控血清(水平I和水平II)10.2质控品组成：人血清10.3质控品存贮未复溶的校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定至标签失效期。复溶后校准血清在避光条件下，2～8℃可稳定7天；15～25℃可稳定1天；-20℃可稳定30天。10.4质控品使用注意事项10.4.1若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。10.4.2请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。10.4.3因批与批之间的质控血清赋值不同，所以不同批号的质控血清不能当做校准血清使用。10.5质量控制建议使用迪瑞公司的质控品，进行质量控制。实验室应自行建立质控区间和限值。若质控值失控，每个实验室应采取纠正措施。11操作程序11.1试剂配制试剂1和试剂2均为液体试剂，可直接使用。11.2项目参数：测定温度37℃R1用量240μL主波长500nm~520nmR2用量60μL副波长660nm样本用量2μL比色杯光径1.0cm反应时间300s～600s吸光度范围0A~2A反应方向正反应测定模式两点终点法11.3样本检测步骤：300s~600s300s300s300s样本用量:2μL试剂R1用量:240μL记录吸光度A1加试剂R2:60μL记录吸光度A2温度:37℃主波长:500nm副波长：660nm11.4计算方法单位换算：mmol/L×18=mg/dL11.5注意事项11.5.1本品仅用于体外诊断。11.5.2避免测试中途添加试剂。11.5.3试剂和样本用量可根据不同仪器的要求按比例改变。11.5.4反应颜色可稳定2小时。12结果判断12.1如反应温度为25℃或30℃，孵育时间相应延长至30分钟或20分钟。12.2样本中葡萄糖浓度＞30mmol/L（或540mg/dL）时，可用生理盐水稀释，计算结果时乘以稀释倍数。12.3人血清、血浆或尿液中葡萄糖浓度的检测只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体症、病史以及其它的诊断项目、诊断手段进行综合判断。13参考区间健康成年人空腹血清葡萄糖：3.9～6.1mmol/L（70.2～109.8mg/dL）尿液：0.28～0.83mmol/L（5～15mg/dL）引用的参考值范围代表本法的期望值，仅供参考，建议各实验室验证这一参考范围或建立自己的参考值范围。14临床意义葡萄糖的准确测定对于诊断和治疗高血糖症和低血糖症是十分重要的。高血糖症可发生于糖尿病、静脉输入含葡萄糖液体、严重应激状态、脑血管意外。低血糖症可见于胰岛瘤、胰岛素用药、先天性碳水化合物代谢障碍和禁食。通常在研究这些病症时，还将葡萄糖测定与各种耐量试验和刺激试验一同进行。15复检操作程序按仪器使用说明书进行复查操作。16方法局限性16.1检验结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。16.2当样本中黄疸＞684μmol/L、血红蛋白＞8g/L、甘油三脂＞50mmol/L、抗L）（）（/mmolAAL/mmol校准液浓度校准管△样本管△样本浓度坏血酸＞0.57mmol/L时可能会影响检测结果。17注意事项样本、废液等有潜在生物传染性，操作者应遵守实验室安全操作规定，并按当地医疗废弃物、感染性废弃物、产业废弃物等规定处理废液。18个人防护18.1请把标本当作可能感染HIV、HBV、HCV等的危险物质处置。为了避免或减少相关的传染风险，请使用一次性手套。18.2若本试剂误入眼内或口中、或接触到皮肤时，请迅速用水冲洗，必要时请接受医生治疗。19当检测系统不能工作时，所采取的补救措施当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。20参考文献20.1YoungDS.EffectsofDrugsonClinicalLaboratoryTests.ThirdEdition.1990;3:168-182.20.2TrinderP:AnnClinBiochem,1969,6:24~27.20.3Frontini，StabilizedTrinderReagent，U.S.Pat.5,108,733.20.4Kobayashi，StableEnzymeComposition，U.S.Pat.4,451,569.20.5Yamasaki，StabilizedPeroxidaseCompositionsandAntibodyCompositions，U.S.Pat.5,516,672.20.6NCCLS.InterferenceTestinginClinicalChemistry;ApprovedGuideline,2005.