2014年多氯联苯检测方法

辽宁省疾病预防控制中心理化检测所多氯联苯(polychlorobiphenyls，PCBs)别名：氯化联苯，我国习惯上按联苯上被氯取代的个数将PCB分为三氯联苯(PCB3)、四氯联苯(PCB4)、五氯联苯(PCB5)、六氯联苯(PCB6)，是一种持久性环境污染物，在斯德哥尔摩公约中被提出严禁使用，其化学性质稳定，难降解。由于多氯联苯可以通过水体中生物食物链的富集作用，其在鱼类体内浓度累积到几万甚至几十万倍。多氯苯同时损害人类的免疫系统并被列为可能的致癌物质，其毒性主要表现为：影响皮肤、神经、肝脏，破坏钙的代谢，导致骨骼、牙齿的损害，并有慢性致癌和致遗传变异等的可能性。由于二噁英样PCBs的测定需要采用高分辨质谱，难以在普通实验室推广，为此联合国GEMS/FOOD中规定了PCB28、PCB52、PCB101、PCB118、PCB138、PCB153、PCB180作为PCBs污染状况的指示性单体（indicatorPCBs）进行替代性监测目的通过监测发现垃圾焚烧对食品可能产生的危害；通过监测了解工业化生产对食品的不良影响；通过监测发现我国居民主要消费的大宗食品中受持久性有机污染物污染最严重的食品。开展地区指示性多氯联苯近海产海水鱼：天津、辽宁、江苏、福建、山东、广东、广西、海南；鲜蛋：北京、河北、吉林、河南、湖南、重庆。标准◦GB/T5009.190-2006《食品中指示性多氯联苯含量的测定》◦GB2762-2012《食品中污染物限量》规定指示性PCBs限量◦CAC正在制(修)定最大允许限量（MLs）监测◦GEMS/Food将指示性多氯联苯列入监测计划◦2012年起国家食品安全风险监测计划规定了指示性PCBs的监测能力验证◦国家认监委能力验证活动，解决了检验机构参加一次考核结果无法多方利用的问题◦了解全国PCBs的检验能力，促进检验机构检验水平的不断提高初测满意省级CDC机构8个河北省疾病预防控制中心辽宁省疾病预防控制中心吉林省疾病预防控制中心上海市疾病预防控制中心江苏省疾病预防控制中心浙江省疾病预防控制中心湖北省疾病预防控制中心湖南省疾病预防控制中心中国计量科学研究院特别制备基质：金枪鱼肉添加一定浓度的7种成分指示性PCBs标准溶液样品种类：◦空白基质样品◦考核样品：A、B◦每份考核样品的量约为10g样品制备流程样品制备：鱼类样品去皮，去刺，去内脏之后切碎，再用粉碎机粉碎，冷冻干燥，放入冰箱中备用。样品称量：先将鱼样品从冰箱取出，放置到室温后，准确称量1g鱼肉样品和1g在400℃煅烧过10h的无水硫酸钠，混匀后加到滤纸筒中。将称量好的样品置于索氏提取装置中，加入内标0.1mL，室温中避光环境中平衡30min后，在150mL的烧瓶中加入80mL正己烷/丙酮（1:1V/V）混和溶液，70℃水浴回流，提取24小时。净化：提取液在40℃恒温水浴中旋转蒸发至1mL，转移至10mL具塞刻度管中，用正己烷洗涤旋转蒸发瓶3～4次，洗液并入刻度管并定容5mL，加入0.5mL浓硫酸，用涡旋混合器震摇1min，以3000r/min的转速离心5min，使硫酸层和有机层分离。如果上层溶液仍有颜色，表明脂肪未完全出去，再加0.5mL浓硫酸，重复操作，直至上层溶液呈无色。上层无色溶液用一次性移液管取出待SPE净化。SPE净化步骤：用4mL丙酮清洗FLorisil（500mg/6mL）小柱，并真空抽干，然后用4mL正己烷调节小柱，不抽干，让小柱保持湿润状态。将样品提取浓缩液转移到小柱上，上样后，静止2min。用5mL的洗脱液(正己烷:丙酮=9:1)洗脱，洗脱速率1.5mL/min，接收的洗脱液用氮气吹至1mL，转移至样品瓶中准备进行GC/MS的测定。仪器条件气相色谱条件：色谱柱DB-5MS30m×0.25mm×0.25μm；载气：氦气（≥99.999%），流速1.0mL/min；进样口温度290℃；柱温：100℃保持2min15℃/min升温至180℃，3℃/min升至240℃，15℃/min升温至290℃保持5min。质谱条件：离子源230℃，四级杆1：150℃，四级杆2：150℃，碰撞气：氮气（≥99.999%）1.5ml/min、氦气（≥99.999%）2.25ml/min，监测模式：MRM，电离模式：EI，能量70ev，传输线温度：300℃。溶剂延迟时间11min。PCBs二级质谱分析碰撞能量见下表。名称保留时间min母离子定量子离子碰撞能量（eV）辅助定性子离子碰撞能量（eV）丰度比%PCB2814.178256186（32）151（50）23PCB5215.490292220（34）257（12）68PCB10119.301326256（34）291（12）48PCB11822.374326256（27）291（12）45PCB15323.470360290（35）325（16）35PCB13824.838360290（30）325（15）49PCB18028.272394324（34）359（15）48PCB20830.368464322（20）392（20）65方法的线性范围、检出限和回收率实验配制标准系列：5μg/L，10μgμg/L，20μg/L，50μg/L，100μg/L，200μg/L。内标PCB208的浓度为100μg/L。进行MRM方式测定，内标法定量，结果如表2所示。本方法在5μg/L～200μg/L质量浓度范围内，线性关系良好，相关系数均大于0．9995。分别添加20μg/kg和100μg/kg两个水平的加标回收实验，平均加标回收率均在89.4%～101.9%之间。名称标准曲线方程相关系数r平均回收率（%）（n=6）检出限（μg/kg）20μg/kg100μg/kgPCB28Y=7.78X-0.510.999897.895.50.03PCB52Y=2.97x-0.210.999789.499.60.07PCB101Y=2.75x-0.230.999796.5101.90.17PCB118Y=3.08x-0.300.999798.090.20.17PCB138Y=2.48x-0.250.999699.3100.80.17PCB153Y=2.87x-0.260.999698.692.30.17PCB180Y=1.79x-0.170.999790.191.20.17提取系统的净化为了消除提取系统引入干扰物的可能，在提取样品前，将提取用滤纸筒至于索氏提取器中，用50ml正己烷/丙酮（1:1V/V）混和溶液，在70℃水浴回流4小时。提取净化后，将盛有滤纸筒的索氏提取器拆下，在室温下晾干溶剂。将平底烧瓶中的提取液倒出。采用经典的索氏提取（SoxhletExtraction）方法，使用正己烷/丙酮（1:1V/V）混和溶液作为提取溶液，提取的温度定为70℃。本方法操作简单，提取效率高。样品中脂肪是干扰本实验定量测定的主要因素，国标中第一法用酸性硅胶柱和符合硅胶柱净化，操作过于繁琐。而用凝胶渗透色谱GPC净化，需大量的试剂及时间。本方法用浓硫酸去除脂肪，操作简单，经济方便，净化效果好。