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选修三重要知识点整理第一章基因工程1.限制性核酸内切酶(限制酶)主要从原核生物(用于切割外源DNA,保护自身)中分离纯化出来,识别序列由6个核苷酸(或4、5、8个)组成。末端种类:平末端和黏性末端①E·coliDNA连接酶来源:大肠杆菌作用特点:只连接黏性末端②T4DNA连接酶来源:T4噬菌体作用特点:连接黏性末端和平末端2.DNA连接酶效率低3.运载体(1)作用:①作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞内。②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。(2)种类:质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。(3)条件:①有一个或多个限制酶切位点②能自我复制③有标记基因(4)一般来说,天然载体往往不能满足人类的所有要求,因此在基因工程中,对某些天然的载体进行人工改造。4.基因工程中形成的重组DNA是DNA分子片段的连接,而不是合成DNA分子或转录合成mRNA的过程5.DNA连接酶:不需要模板DNA聚合酶:需要模板DNA复制时都形成磷酸二脂键6.基因操作程序:Ⅰ获取目的基因Ⅱ构建表达载体(核心)Ⅲ导入受体细胞Ⅳ目的基因的检测与鉴定Ⅰ获得目的基因(1)基因组文库(所有的)部分基因文库(部分的),如cDNA文库(2)PCR技术扩增目的基因原理:DNA复制指数方式增加需要:模板DNA,原料(游离的四种脱氧核苷酸),引物,DNA聚合酶(3)人工合成(基因较小)化学合成:DNA合成仪(已知序列)反转录法:未知序列Ⅱ构建表达载体(核心):目的基因、启动子、终止子、标记基因Ⅲ导入受体细胞(1)植物细胞农杆菌转化法:双子叶植物、裸子植物的体细胞或受精卵基因枪法花粉管通道法(2)动物细胞:显微注射技术受体细胞:受精卵(a含有目的基因表达所需的物质;b具有全能性)(3)微生物细胞:原核生物(繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少)作为受体细胞大肠杆菌:Ca2+处理细胞(感受态细胞)Ⅳ目的基因的检测与鉴定1)检测:DNA分子杂交技术(原理:碱基互补配对)①目的基因作探针②转录出mRNA③翻译成蛋白质:抗原抗体杂交2)鉴定:个体生物学水平7.逆转录形成的目的基因不含内含子原因:mRNA形成时切掉了内含子转录的RNA内含子:能转录不能翻译外显子:能转录能翻译真核生物基因编码区:内含子和外显子原核和真核生物的非编码区:对遗传起调控作用(启动子和终止子)8.植物基因工程技术①提高农作物的抗逆能力②改良农作物的品质③利用植物生产药物9.杀虫的基因:Bt毒蛋白基因(我国转基因抗虫棉)、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因10.病原微生物:病毒、真菌、细菌等。11.转基因玉米:赖氨酸含量比对照提高30%12.动物基因工程:导入生长素基因---提高生长速度导入肠乳糖酶基因---改善畜产品品质生产药物---乳腺生物反应器或乳房生物反应器优点:易提取、产量高、质量好、成本低转基因动物作器官移植的供体优点:抑制抗原基因的表达、或除去抗原决定的基因、无免疫排斥反应13.工程菌第一种基因工程药物---重组人胰岛素细胞因子、抗体、疫苗、激素等。我国生产:白细胞介素-2、干扰素(糖蛋白,为我国第一个批量生产的药物)、乙肝疫苗14.体外基因治疗和体内基因治疗:都处于初期临床试验阶段15.基因工程是在两个物种间转移基因,克服了两个物种间由于生殖隔离不能进行基因交流的障碍,能定向培育生物新品种。16.基因重组:1)有性生殖时:非等位基因的重新组合2)DNA的拼接技术---基因工程17.基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质18.蛋白质工程:第二代基因工程基因修饰或基因合成第二章细胞工程1.植物的组织培养离体的组织、器官或细胞愈伤组织植物体2.植物体细胞杂交技术生殖方式:无性生殖脱分化再分化外植体固体培养基营养:蔗糖、矿质元素(无机盐)激素:生长素、细胞分裂素(也有赤霉素)注:愈伤组织之后需要给予光照条件原理:植物细胞的全能性去除细胞壁的方法:酶解法(纤维素酶和果胶酶)诱导原生质体融合的方法:物理法:离心、振动和电激化学法:聚乙二醇(PEG)生长素含量>细胞分裂素:诱导脱分化和根原基形成生长素含量细胞分裂素:诱导再分化和芽原基形成一、植物细胞工程杂种细胞形成的标志:生成新的细胞壁植物体细胞杂交的原理:细胞膜的流动性、植物细胞的全能性意义:克服不同物种远缘杂交的障碍3植物细胞工程的应用(1)微型繁殖意义:保持亲本优良性状、快速繁殖(2)作物脱毒取材部位:茎尖、根尖(分生区)(3)人工种子:由胚状体和人工种皮(营养物质、杀菌剂)(4)单倍体育种(5)细胞产物的工厂化生产例如:从愈伤组织中提取紫草素二、动物细胞工程(一)动物细胞培养1、过程:原代培养幼龄动物的组织块分散成单个细胞细胞悬液细胞贴壁接触抑制胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶传代培养2、原理:细胞的增殖10代以内,保持正常的二倍体核型3、动物细胞培养条件:①无菌、无毒②营养:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清(液体培养基)③温度和PH④气体环境(CO2、O2)动物细胞培养植物组织培养原理目的结果培养液成分细胞增殖细胞全能性获得细胞或细胞分泌蛋白脱毒植株、微型繁殖、人工种子获得新植株获取大量细胞或细胞产物无机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、葡萄糖、血清液体培养基蔗糖、矿质元素、维生素、植物激素、有机添加剂固体培养基(二)动物体细胞核移植技术胚胎细胞核移植体细胞核移植(卵母细胞:减二中期)原理:动物细胞核的全能性(三)动物细胞融合1、诱导方法:聚乙二醇、电激、灭活的病毒2、原理:细胞膜的流动性(四)单克隆抗体1、原理:免疫原理、动物细胞融合、动物细胞培养2、细胞类型(5种)、融合的细胞类型(3种)3、杂交瘤细胞的特点:无限增殖、产生单一抗体4、优点:特异性强、灵敏度高、产量大5、应用:诊断试剂、治疗疾病和运载药物(生物导弹)第三章胚胎工程1.精子的发生:从初情期----生殖机能衰退(哺乳动物的睾丸的曲细精管里)1)精原细胞有丝分裂大量精原细胞其中部分初级精母细胞2)初级精母细胞MⅠMⅡ四个单倍体精子细胞3)变形:形似蝌蚪,分头颈尾。细胞核---精子头部的主要部分高尔基体---精子头部的顶体中心体---精子的尾部线粒体---聚集在尾的基部形成线粒体鞘其他物质:浓缩为原生质滴,脱落和。2.卵子的发生1)场所:卵巢内,输卵管中2)时间:从性别分化到生殖机能衰退3)过程:卵原细胞有丝分裂大量卵原细胞其中部分初级卵母细胞(被卵泡细胞包围)形成卵泡减分成熟卵子MⅠ:排卵前后完成(进入输卵管),产生1个极体和1个次级卵母细胞MⅡ:精子与卵子结合时,生成成熟卵子和1个第二极体4)卵子是否受精的重要标志卵黄膜和透明带的间隙可观察到两个极体3.排卵:卵子从卵泡中排出4.受精场所:输卵管中1)精子获能2)卵子准备:进一步成熟,达到减二中3)过程①顶体反应,释放顶体酶,穿越放射冠②透明带反应---防止多精入卵的第一道屏障③卵黄膜封闭作用---防止多精入卵的第二道屏障④入卵后,尾部脱离,核膜破裂,形成雄原核同时卵子被激活,完成减二分裂,形成雌原核5.卵裂期:透明带内进行,胚胎总体积略减小,细胞行有丝分裂6.桑椹胚(32个),之前每个细胞都具全能性7.囊胚:内细胞团发育成各种组织滋养层胎膜胎盘8.透明带破裂:孵化9.原肠胚:内细胞团表层细胞外胚层(细胞分化最旺盛)下方细胞内胚层包围的原肠腔10.体外受精1)卵母细胞采集和培养①促性腺激素处理(小)②已屠宰母畜卵卵巢中采集③超声波探测仪…用真空泵吸取2)精子采集和获能采集:①假阴道法②手握法③电刺激法④获能:①培养法②化学诱导法:肝素或钙离子载体11.胚胎早期培养:无机盐有机盐维生素激素氨基酸核苷酸血清等12.胚胎移植:1)供受体生殖器官的生理变化相同,相同生理环境2)处于游离态3)不发生免疫排斥4)可与受体子宫正常生理和组织联系13.胚胎移植基本程序:1)供受体选择处理2)配种或人工受精3)胚胎收集,检查,保存4)移植5)检查14.胚胎的分割:桑葚胚或囊胚15.胚胎干细胞(ES或EK):1)特点:体积小,细胞质核大,核仁明显,具发育的全能性2)体外:可增殖不分化3)应用:细胞坏死,退化,功能异常引起的疾病,如帕金森,少年糖尿病,老年痴呆症等4)分化诱导因子:诱导ES分化16.比较试管婴儿克隆1)生物原理或技术2)生殖类型3)后代遗传性状继承特点体外受精,胚胎移植细胞全能性,核移植有性无性双亲特性几乎全部性状与提供核的亲本性状一样
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