培养基配制中注意事项

://user.qzone.qq.com/846443755/blog/1310470322培养基成分使用浓度(mg/L)大量元素KNO32500MgSO4·7H2O250CaCl2·2H2O150(NH4)2SO4134微量元素KI0.75H3BO43.0MnSO4·4H2O10ZnSO4·7H2O2.0Na2MoO4·2H2O0.25CoCl2·6H2O0.025铁盐CuSO4·5H2O0.025Na2-EDTA37.3FeSO4·7H2O27.8有机成分肌醇100烟酸1.0盐酸吡哆醇1.0盐酸硫铵10注意事项1、现在一般用通用铁盐代替草酸铁。2、过磷酸钙先用盐酸溶解，再加入培养基中。3、现在琼脂质量较好，具体用量，自己掌握。4、用于兰花播种和组织培养，具有较好的缓冲能力B5培养基的组成和配方组成成分数量(mg/l）KNO32500大量元素CaCl2·2H2O150MgSO4·7H2O250(NH4)2SO4134KI0.75H3BO43.0MnSO4·4H2O10微量元素ZnSO4·7H2O2.0Na2MoO4·2H2O0.25CoCl2·6H2O0.025CuSO4·5H2O0.025铁盐Na2-EDTA37.3FeSO4·7H2O27.8肌醇100烟酸1.0有机成分盐酸吡哆醇1.0盐酸硫铵10N6培养基配方组成成分数量(mg/l）硝酸钾(KN03)2830硫酸铵(NH4SO4)463大量元素氯化钙(CaCl2·2HzO)166硫酸镁(MgSO4·7H20)185磷酸二氢钾(KH2PO4)400硫酸亚铁(FeSO４·7H20)27.8硫酸锰(MnS04·4H20)4.4微量元素硫酸锌(ZnSO4·7H20)1.6硼酸(H2BO3)0.8碘化钾(KI)1.6甘氨酸2有机成分烟酸0.5盐酸硫胺素(维B1)1.0盐酸吡哆素(维B6)1、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。注意：(1)配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。(2)CaCl2·2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2·2H2O时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。２、微量元素母液的配制MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物（除Fe）组成。微量元素用量较少，特别是CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用电光天平称量，其它同大量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ0.1ml。3、铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解，定容至1L。配制培养基时，配制1L取此液10ml。注意：在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA鳌合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。为避免此现象发生，配制铁盐母液时，FeSO4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20-30min)，调pH值至5.5，室温放置冷却后，再冷藏。4、有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，定容至1L，注意称量时用电子分析天平。配制培养基时，每配1L培养基取此液5ml。注意：由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。避免此现象发生的方法是:配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。5、激素母液配制植物组织培养中使用的激素种类及含量需要根据不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的终浓度以0.5mg/ml为好，需要注意的是：（１）配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，应先用少量95%乙醇或无水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。（２）细胞分裂素，例如KT，应先用少量95%乙醇或无水乙醇加3~4滴1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。（３）配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。注意：所有的母液都应保存在0~4℃冰箱中，若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。